本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種真菌(Glarea?lozoyensis)?FIM2006071，該菌株由中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏號為CCTCC?NO：M2012475，保藏日期為：2012年11月23日。本發(fā)明專利技術(shù)還公開了通過調(diào)控其微生物代謝來獲得高單位的卡泊芬凈中間體紐莫康定B0。本發(fā)明專利技術(shù)提供的發(fā)酵菌株性能優(yōu)良，生產(chǎn)能力穩(wěn)定，發(fā)酵單位高且發(fā)酵副產(chǎn)物相對較少，降低了后提取難度，有利于得到高品質(zhì)的卡泊芬凈，適宜于工業(yè)化大生產(chǎn)。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種新型微生物及其應(yīng)用,尤其涉及一種真菌Glarea lozoyensis及其通過調(diào)控微生物代謝獲得紐莫康定Btl的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
棘白菌素又稱棘球白素，是一類新型抗真菌藥，屬于乙酰六環(huán)類，對人體的毒性低，是一種水溶性的脂肽，主要用于治療念珠菌食道炎或口咽炎、侵入性曲霉菌病及其他抗真菌藥治療無效或不能耐受者，對卡氏肺孢菌也有作用，通過抑制真菌細(xì)胞壁重要組成成分β (1，3)-D-葡萄糖的合成而發(fā)揮抗真菌作用。卡泊芬凈(Caspofungin)是第一個(gè)批準(zhǔn)上市的棘白菌素類抗真菌藥。對于治療持續(xù)發(fā)熱及中性粒細(xì)胞較少患者，卡泊芬凈作為經(jīng)驗(yàn)性治療，其安全性、生存率及有效率均較高，耐受性更好，治療真菌感染和念珠菌敗血癥也有效，能殺滅正在生長的煙曲霉細(xì)胞。卡泊芬凈是由紐莫康定B。(Pneumocandin B。)經(jīng)過結(jié)構(gòu)修飾后得到。其中紐莫康定Btl是真菌(Glarea lozoyensis)的微生物代謝產(chǎn)物,可以通過調(diào)控真菌(Glarealozoyensis)的微生物代謝也即發(fā)酵產(chǎn)生，經(jīng)提取純化后再經(jīng)過多步反應(yīng)合成得到卡泊芬凈。一般的紐莫康定Btl產(chǎn)生菌，生產(chǎn)能力不穩(wěn)定，產(chǎn)量較低，發(fā)酵副產(chǎn)物較多，雜質(zhì)也較多，導(dǎo)致后提取工藝較為復(fù)雜，大大地增加了后續(xù)的提純難度，并且難以獲得高純度的最終產(chǎn)物，從而難以更好地進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是針對上述問題，提供一種發(fā)酵單位高、能穩(wěn)定生產(chǎn)、產(chǎn)量高且副產(chǎn)物少的紐莫康定Btl產(chǎn)生菌。本專利技術(shù)的另一目的是提供該菌株在制備紐莫康定Btl中的應(yīng)用，以及具體的發(fā)酵制備方法。本專利技術(shù)的目的是通過下列技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:一種真菌 FM2006071，分類命名為 Glarea lozoyensis FM2006071，由中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏(簡稱CCTCC)，保藏號為:CCTCC NO:M2012475，保藏日期為:2012年11月23日。所述的保藏號為CCTCC NO:M2012475的菌株是從福建省福州篩選得到的。所述的保藏號為CCTCC NO:M2012475的菌株的菌落特征:菌落近圓形，邊緣白色，不規(guī)則扇形，菌落直徑7.5-17.8mm，菌落隆起，中心形成紐結(jié)或陷落成坑，中間無分泌物和可溶性色素產(chǎn)生。根據(jù)微生物形態(tài)學(xué)及國外相關(guān)資料的描述，結(jié)合保藏號為CCTCC NO:M2012475的菌株的各種培養(yǎng)特征，該保藏號 為CCTCC NO:M2012475的菌株屬于真菌屬，定名為Glarealozoyensis FIM2006071。所述的保藏號為CCTCC NO:M2012475的菌株可應(yīng)用于發(fā)酵制備紐莫康定Btltl該制備方法包括下列步驟:a.菌株采用保藏編號為CCTCC NO:M2012475的菌株；b.將按常規(guī)方法制備的30%甘油菌絲冷凍管按搖瓶種子培養(yǎng)基體積的3-5%的接種量接入搖瓶種子培養(yǎng)基，220-260rpm,培養(yǎng)2_3天，得搖瓶種子液；將搖瓶種子液按種子罐培養(yǎng)基體積0.1-0.2%的接種量接種于種子罐，120-200 rpm，培養(yǎng)3-4天，得罐種子液；將罐種子液按發(fā)酵體積的5-15%的接種量接種于發(fā)酵罐培養(yǎng)基，150-200 rpm,發(fā)酵培養(yǎng)9_12天，收集發(fā)酵液；其中培養(yǎng)溫度均為22-26°C。其中所述的搖瓶種子培養(yǎng)基各組分在培養(yǎng)基中的比例為:每IOOmL培養(yǎng)基中，碳源l_8g,氮源2-8g,無機(jī)鹽0-2.5g,其余為水；種子罐培養(yǎng)基各組分在培養(yǎng)基中的比例為:每IOOmL培養(yǎng)基中，碳源2_8g，氮源l_7g，無機(jī)鹽0-2.5g，其余為水； 發(fā)酵培養(yǎng)基各組分在培養(yǎng)基中的比例為:每IOOmL培養(yǎng)基中，碳源8_16g,氮源l-5g,無機(jī)鹽Ο-lg,氨基酸0-2g,其余為水。其中所述的培養(yǎng)基各組分在培養(yǎng)基中比例，優(yōu)選為:搖瓶種子培養(yǎng)基各組分的比例為:每IOOmL培養(yǎng)基中,碳源2_4g,氮源4_6g,無機(jī)鹽l_2g，其余為水；種子罐培養(yǎng)基各組分的比例為:每IOOmL培養(yǎng)基中，碳源4_6g，氮源3_5g，無機(jī)鹽0.5-1.5g，其余為水；發(fā)酵培養(yǎng)基各組分的比例為:每IOOmL培養(yǎng)基中，碳源10_14g，氮源2_4g，無機(jī)鹽0.3-0.5g，氨基酸0.5-1.5g，其余為水。其中所述的碳源選自土豆淀粉、玉米淀粉、可溶性淀粉、麥芽糊精、土豆糊精，甘油、葡萄糖、麥芽糖、土豆汁、土豆浸出粉、甘露醇中的一種或幾種；所述的氮源選自黃豆餅粉、生豆粉、豆柏、玉米漿、玉米漿粉、蠶蛹水解液、尿素、硫酸銨、酵母粉、酵母浸出粉、棉籽粉、蠶蛹粉中的一種或幾種;無機(jī)鹽為 K2HPO4' MnSO4.4H20、NaCl、Fe (NH4)2(SO4)2.6H20、NaNO3> KNO3> MgSO4.7H20、FeSO4.7H20、KH2PO4 中的一種或幾種；氨基酸為 L-賴氨酸、L-亮氨酸、L-異亮氨酸、L-酪氨酸、L-蘇氨酸、L-絲氨酸、L-脯氨酸、L-精氨酸中的一種或幾種。其中所述的培養(yǎng)基優(yōu)選為:碳源為葡萄糖、甘露醇中的一種或幾種；氮源為酵母浸出粉、玉米漿粉、酵母粉、棉籽粉、生豆粉中的一種或幾種；無機(jī)鹽為KH2P04、K2HPO4,MnSO4.4H20、FeSO4.7H20中的一種或幾種；氨基酸為L-脯氨酸、L-蘇氨酸中的一種或幾種。本專利技術(shù)所述的保藏號為CCTCC NO:M2012475的菌株是目前分離到的一種天然高單位的紐莫康定Btl的產(chǎn)生菌，發(fā)酵性能優(yōu)良，可用于大規(guī)模生產(chǎn)。發(fā)酵過程是紐莫康定Btl生產(chǎn)的重要環(huán)節(jié)，其發(fā)酵水平與工藝優(yōu)劣直接相關(guān)，本專利技術(shù)提供的發(fā)酵工藝經(jīng)過搖瓶和10噸發(fā)酵罐中進(jìn)行試驗(yàn)，其生產(chǎn)能力穩(wěn)定。經(jīng)檢測，用本專利技術(shù)提供的菌種及發(fā)酵培養(yǎng)方法制備的紐莫康定Btl的發(fā)酵單位可高達(dá)300(^g/mL左右或以上，從而為后續(xù)的工業(yè)化生產(chǎn)提供了良好的基礎(chǔ)。同時(shí)本專利技術(shù)的發(fā)酵副產(chǎn)物相對較少，并降低了后提取的難度，從而有利于高品質(zhì)的卡泊芬凈的獲得，在應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)上具有優(yōu)勢。菌株保藏情況:保藏于武漢中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC)，保藏編號為CCTCC NO:M2012475，分類命名為真菌 FM2006071 (Glarea lozoyensis FIM2006071 )0 保藏日期為2012年11月23日。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例為本專利技術(shù)進(jìn)行進(jìn)一步的描述，但不能將方案中所涉及的方法及技術(shù)參數(shù)理解為對本專利技術(shù)的限制。實(shí)施例1:保藏號為CCTCC NO:M2012475的菌株的培養(yǎng)及生理生化特征和碳源利用情況1、保藏號為CCTCC NO:M2012475的菌株培養(yǎng)的形態(tài)學(xué)特征將保藏號為CCTCC N0:M2012475的菌株接種于酵母麥芽提取物瓊脂培養(yǎng)基(YME)、土豆葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)、沙氏瓊脂培養(yǎng)基(SMA)等用于觀察形態(tài)特征的培養(yǎng)基中，23°C培養(yǎng)3周，觀察并進(jìn)行描述。菌落在YME瓊脂培養(yǎng)基上23°C培養(yǎng)，生長局限，3周直徑11.7-15.4mm ;菌落近圓形，邊緣不規(guī)則扇形；菌落隆起，中心形成紐結(jié)或陷落成坑；質(zhì)地絨狀兼繩狀；菌落表面形成放射性的皺紋；菌絲顏色灰紅色至淡粉紅色，反面顏色淡褐色；無分泌物和可溶性色素產(chǎn)生。菌落在PDA培養(yǎng)基上23°C培養(yǎng)，菌落圓形邊緣稍不規(guī)則，菌落較厚中心隆起，有不規(guī)則放射性皺紋；菌落生長較慢，3周直本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種真菌(Glarea?lozoyensis)?FIM2006071，由中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏號為CCTCC?NO：M2012475，保藏日期為：2012年11月23日。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種真菌(Glarea lozoyensis) FIM2006071,由中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏,保藏號為CCTCC NO:M2012475，保藏日期為:2012年11月23日。2.按權(quán)利要求1所述的保藏號為CCTCCNO:M2012475的菌株在發(fā)酵制備紐莫康定B。中的應(yīng)用。3.用權(quán)利要求1所述的保藏號為CCTCCNO:M2012475的菌株發(fā)酵制備紐莫康定B。的方法，其特征在于包括下列步驟: a，發(fā)酵菌株采用保藏編號為CCTCC NO:M2012475的菌株； b，將按常規(guī)方法制備的30%甘油菌絲冷凍管按搖瓶種子培養(yǎng)基體積的3-5%的接種量接入搖瓶種子培養(yǎng)基，220-260rpm，培養(yǎng)2_3天，得搖瓶種子液；將搖瓶種子液按種子罐培養(yǎng)基體積0.1-0.2%的接種量接種于種子罐，120-200 rpm，培養(yǎng)3-4天，得罐種子液；將罐種子液按發(fā)酵體積的5-15%的接種量接種于發(fā)酵罐培養(yǎng)基，150-200rpm,發(fā)酵培養(yǎng)9_12天，收集發(fā)酵液；其中培養(yǎng)溫度均為22-26°C。4.按權(quán)利要求3所述的發(fā)酵制備方法，其特征是: 搖瓶種子培養(yǎng)基各組分在培養(yǎng)基中的比例為:每IOOmL培養(yǎng)基中，碳源l_8g，氮源2_8g，無機(jī)鹽0-2.5g，其余為水； 種子罐培養(yǎng)基各組分在培養(yǎng) 基中的比例為:每IOOmL培養(yǎng)基中，碳源2-8g，氮源l_7g，無機(jī)鹽0-2.5g，其余為水； 發(fā)酵罐培養(yǎng)基各組分在培養(yǎng)基中的比例為:每IOOmL培養(yǎng)基中,碳源8-16g,氮源l_5g,無機(jī)鹽Ο-lg,氨基酸0-2g,其余為水。5.按權(quán)利要求4所述的發(fā)酵制備方法...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：朱健，陳曉霞，王蓓，許永鋒，吳娟，嚴(yán)咪咪，
申請(專利權(quán))人：杭州華東醫(yī)藥集團(tuán)生物工程研究所有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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