本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種嗜根寡營養(yǎng)單胞菌及其環(huán)二肽代謝物的應(yīng)用，屬于微生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域。發(fā)明專利技術(shù)采用的嗜根寡營養(yǎng)單胞菌（Stenotrophomonas?rhizophila）?WQS37菌株已于2012年11月5日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏號：CGMCC?No：6777。將嗜根寡營養(yǎng)單胞菌通過培養(yǎng)及分離獲得環(huán)二肽代謝物；嗜根寡營養(yǎng)單胞菌及其環(huán)二肽代謝物與少孢節(jié)叢孢混合，作為誘導(dǎo)少孢節(jié)叢孢快速形成大量的捕食器官的應(yīng)用。本發(fā)明專利技術(shù)的嗜根寡營養(yǎng)單胞菌和其環(huán)二肽代謝物能快速誘導(dǎo)少孢節(jié)叢孢在土壤中形成大量的捕食器官，有效的捕食線蟲，為開發(fā)捕食線蟲真菌生物菌劑提供新的思路。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
:本專利技術(shù)涉及一種嗜根寡營養(yǎng)單胞菌及其環(huán)ニ肽代謝物的應(yīng)用，屬于微生物農(nóng)藥
技術(shù)介紹
:植物寄生線蟲是植物的重要病害之一，全球每年因植物寄生線蟲病害所引起的農(nóng)作物經(jīng)濟(jì)損失達(dá)到780億美元(McCarter，2008)。在我國，植物寄生線蟲危害煙草、花卉、蔬菜、棉花、大豆、花生、中藥材等幾乎所有作物，成為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中重要的限制因子之一。目前對線蟲的防治主要依靠化學(xué)殺線蟲劑，但長期使用化學(xué)農(nóng)藥除了造成環(huán)境污染、殘留、破壞生態(tài)平衡等弊端外，同時加劇了害蟲的抗藥性。利用線蟲天敵來進(jìn)行生物防治具有不污染環(huán)境，藥效持久，害蟲不易產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點，得到了各國政府的重視。捕食線蟲真菌作為病原線蟲的重要天敵，是自然界中控制、平衡和調(diào)節(jié)線蟲種群數(shù)量的重要生物因子,也是研究開發(fā)生物殺線蟲制劑的主要來源(Siddiqui and Mahmood,1996 ；Nordbring-Hertz et al.,2000)。在土壤中約有200多種真菌利用捕食器官來捕食線蟲。通過近距離的接觸線蟲，真菌 菌絲能在幾小時后形成捕食器官黏附、穿透、殺死后消化線蟲。這些分化的器官包括三維菌網(wǎng)、粘性分支、粘球和收縮環(huán)等。因此形成捕食器官對這些真菌來說非常重要，從而進(jìn)入了寄生的階段。對于捕食器官的形成，人們主要關(guān)注的是線蟲的誘導(dǎo)，從活線蟲和死線蟲的培養(yǎng)液中分離的被稱為“Nemin”的物質(zhì)能誘導(dǎo)，或者在實驗室條件下，當(dāng)營養(yǎng)缺乏時，一些小肽或氨基酸也能誘導(dǎo)，植物的信息素脫落酸也能誘導(dǎo)，然而這些物質(zhì)的活性都沒有活線蟲高(Xu et al.，2011)。在土壌中，捕食線蟲真菌競爭力弱且受環(huán)境影響較大，生長受到限制，或者即使達(dá)到一定數(shù)量了，由于不能有效形成捕食器官，導(dǎo)致了捕食線蟲真菌在線蟲侵染植物根部以前不能捕食線蟲，降低了防效(Jaffee，2003)。因此研究食線蟲真菌在土壌中快速形成捕食器官的因子對提高它的防效是ー個重要的途徑。早在1962年就有文獻(xiàn)報道，當(dāng)把捕食線蟲真菌放置于抑真菌作用土壌中，食線蟲真菌能直接從孢子上形成捕食器官，近年的研究表明，細(xì)菌是影響抑真菌作用土壌的關(guān)鍵因子。根際土壤和土壤的萃取物也被報道能誘導(dǎo)食線蟲真菌形成捕食器官。盡管這些研究表明土壌中的細(xì)菌與食線蟲真菌形成捕食器官相關(guān)，但是這些作者認(rèn)為捕食器官的形成是微生物間競爭營養(yǎng)的結(jié)果(Persmark and Nordbring-Hertz, 1997)。到目前為止只有李蕾(Liet al.,2011)報道Chryseobacterium sp.TFB能誘導(dǎo)捕食線蟲真菌形成捕食器官。單胞菌屬(Stenotrophomonas)通常在土壤中，很多植物的根際中廣泛存在，并被認(rèn)為是ー種潛在的用于防治線蟲病害的生防菌。而嗜根寡營養(yǎng)單胞菌(Stenotrophomonas rhizophila)由于沒有發(fā)現(xiàn)能使人類感染疾病而被認(rèn)為是ー種具有潛力的生防菌(Hayward et al.,2009)。我們研究發(fā)現(xiàn)土壤中的嗜根寡營養(yǎng)單胞菌(Stenotrophomonas rhizophila)在其代謝產(chǎn)物的作用下能誘導(dǎo)食線蟲真菌的模式種一少孢節(jié)叢孢以及多種食線蟲真菌快速形成大量的捕食器官，此類研究，未見公開文獻(xiàn)報道。參考文獻(xiàn):I) McCarter JP (2008) Nematology: terra incognita no more.NatureBiotechnology26:882-8842)Siddiqui ZAj Mahmood I(1996)Biological control of plant parasiticnematodes by fung1: a review.Bioresource Technology58:229-239.3)Nordbring-Hertz B, Jansson HB，Tunlid A(2000)Nematophagous fung1.1n:Encyclopedia of Life Science.Macmillam Publishers Ltd.,Basingtoke.4)Xu LLj Lai YPj Wang L，Liu XZ(2011)Effects ofabscisic acid and nitricoxide on trap formation and trapping ofnematodes by the fungus Drechslerellastenobrocha AS6.1.Fungal Biologyll5:97_1015)Jaffee BA (2003)Correlations between most probable number and activityof nematode-trapping fung1.Phytopathology93:1599-1605.6)Persmark L, Nordbring-Hertz B(1997)Cornidial trap formationof nematode-trapping fungi in soil and soil extracts.FEMS MicrobiologyEcology22:313-3237)Li L, Ma MCj Liu YJ，Zhou JWj Qu Q, Lu KPj Fu DG，Zhang KQ(2011) Inductionof trap formation in nematode-trapping fungi by a bacterium.FEMS MicrobiologyLetter322:157-1658) Hayward A.C.，F(xiàn)egan N.，F(xiàn)egan M.，Stirling G.R.(2009) Stenotrophomonasand Lysobacter: ubiquitous plant-associated gamma-proteobacteria ofdeveloping significa nce in applied microbiology.Journal ofAppiiedMicrobiology.108:756-770
技術(shù)實現(xiàn)思路
:本專利技術(shù)的目的在于提供一種嗜根寡營養(yǎng)單胞菌及其環(huán)ニ肽代謝物的應(yīng)用，它們能誘導(dǎo)少孢節(jié)叢孢快速形成大量的捕食器官從而捕食線蟲，為開發(fā)生物農(nóng)藥制劑提供新的方法。本專利技術(shù)是這樣實現(xiàn)的:生產(chǎn)菌株為嗜根寡營養(yǎng)單胞菌(S.rhizophila WQS3)，該菌株已于2012年11月5日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏單位地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號中國科學(xué)院微生物研究所；保藏號:CGMCCNo:6777 ；將嗜根寡營養(yǎng)單胞菌用液體培養(yǎng)基常規(guī)發(fā)酵，發(fā)酵液離心除去菌體后用含有0.lmL/L三氟こ酸的こ酸こ酯萃取三次，こ酸こ酯部位用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在50度下濃縮至膏狀，將膏狀物質(zhì)用Sephadex LH-20分離得到含有四個環(huán)ニ肽的活性餾分，活性餾分用SephadexLH-20反復(fù)分離后，再用硅膠分離得到四個環(huán)ニ肽單體。嗜根寡營養(yǎng)單胞菌的四個環(huán)ニ肽化合物用核磁共振和高分辨質(zhì)譜鑒定其結(jié)構(gòu)其結(jié)構(gòu)如下:這四個化合物分別為(I)Cyclo (L-leucyl-trans-4-hydr本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點】
嗜根寡營養(yǎng)單胞菌及其環(huán)二肽代謝物的應(yīng)用，其特征在于：（1）將保藏號為CGMCC?No：6777的嗜根寡營養(yǎng)單胞菌（S.??rhizophila?WQS37），用液體培養(yǎng)基發(fā)酵，發(fā)酵液離心除去菌體后用含有0.1?mL/L三氟乙酸的乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯部位用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在50度下濃縮至膏狀，將膏狀物質(zhì)用Sephadex?LH?20分離得到含有四個環(huán)二肽的活性餾分，活性餾分用Sephadex?LH?20反復(fù)分離后,再用硅膠分離得到四個環(huán)二肽單體；（2）制備菌絲表面帶嗜根寡營養(yǎng)單胞菌的少孢節(jié)叢孢：a.少孢節(jié)叢孢接種于液體CMB中，在28℃下培養(yǎng)7天，CMB培養(yǎng)基配方為：玉米粉：20克，水1000毫升，pH自然；b.?嗜根寡營養(yǎng)單胞菌用液體培養(yǎng)基在28℃下培養(yǎng)48小時，液體培養(yǎng)基的配方為：蛋白胨?5?g?、牛肉膏?3?g?、NaCl?5?g?、蒸餾水?1000ml?、pH?7.2；c.取0.1?2.0?ml嗜根寡營養(yǎng)單胞菌的發(fā)酵液放入已經(jīng)培養(yǎng)了7天的少孢節(jié)叢孢中，混合均勻后再培養(yǎng)1?7天；然后將表面帶有嗜根寡營養(yǎng)單胞菌的少孢節(jié)叢孢菌絲用紗布將發(fā)酵液過濾后得到帶嗜根寡營養(yǎng)單胞菌的菌絲；(3)?將（2）步驟得到的帶嗜根寡營養(yǎng)單胞菌的少孢節(jié)叢孢菌絲與（1）步驟得到的環(huán)二肽代謝物，按每克菌絲中放0.2?3.0毫克環(huán)二肽代謝物混合后置于土壤中，作為誘導(dǎo)少孢節(jié)叢孢快速形成大量的捕食器官的應(yīng)用。...
【技術(shù)特征摘要】
1.根寡營養(yǎng)單胞菌及其環(huán)ニ肽代謝物的應(yīng)用，其特征在于: (1)將保藏號為CGMCCNo:6777的嗜根寡營養(yǎng)單胞菌(S.rhizophila WQS37)，用液體培養(yǎng)基發(fā)酵，發(fā)酵液離心除去菌體后用含有0.1 mL/L三氟こ酸的こ酸こ酯萃取三次，こ酸こ酯部位用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在50度下濃縮至膏狀，將膏狀物質(zhì)用S印hadex LH-20分離得到含有四個環(huán)ニ肽的活性餾分，活性餾分用Sephadex LH-20反復(fù)分離后，再用硅膠分離得到四個環(huán)ニ肽單體； (2)制備菌絲表面帶嗜根寡營養(yǎng)單胞菌的少孢節(jié)叢孢: a.少孢節(jié)叢孢接種于液體CMB中，在28°C下培養(yǎng)7天，CMB培養(yǎng)基配方為:玉米粉:20克，水100...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李蕾，羅俊，張克勤，馬明川，
申請(專利權(quán))人：云南大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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