柑橘生物類黃酮中橙皮甙含量的測定方法技術

柑橘生物類黃酮中橙皮甙含量的測定方法，包括以下步驟：（1）稀釋溶液的制備；（2）對照品溶液的制備；（3）供試品溶液的制備；（4）確定色譜條件；（5）檢驗程序。本發明專利技術操作簡便、專屬性和重復性好、回收率高，能夠準確測定橙皮甙的含量，從而有效控制柑橘生物類黃酮混合物的質量。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及生物測試領域，尤其涉及柑橘生物類黃酮中橙皮甙的測定方法。
技術介紹
柑橘類黃酮是從柑橘果實中提取出來的一系列具有顯著生物活性的黃酮類化合物，柑橘類黃酮具有獨特的芳香性、良好的水溶性和顯著的藥理作用。臨床研究證實，柑橘類黃酮功能有:1、調節血脂，降低血液粘稠度，改善血清脂質，延長紅血球壽命并增強造血功能，預防心腦血管疾病。2、抑制HL-60白血病細胞生長和溶解癌細胞的作用。3、能夠有效清除體內的自由基及毒素，預防、減少疾病的發生。4、消炎、抗過敏、廣譜抗菌、抗病毒作用。黃酮類物質既是藥理因子又是重要的營養因子，是ー類新發現的營養素，人體主要依靠從蔬菜、水果和谷物等食物中攝取一定量的黃酮，而黃酮類物質在體內代謝快需要不斷的補充，柑橘類黃酮特有的生理活性已經得到了世界公認，目前市場上已有大量的以柑橘類黃酮作為膳食補充劑制成的各種保健品和食品，同時在化妝品以及醫藥產品中也得到了廣泛應用。柑橘生物類黃酮混合物尚未有正式的國家標準，在主要活性成分橙皮甙定量檢測方面沒有系統、完善的檢測方法?！吨袊幍洹分嘘惼さ某绕み皽y定方法為:色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇:醋酸:水(35:4:61)為流動相，供試品提取:在索氏提取器中，加石油醚(60 90°C ) 80ml，加熱回流2 3小時，棄去石油醚，藥渣揮干，加甲醇80ml，再加熱回流至提取液無色，放冷，濾過，濾液置IOOml量瓶中，用少量甲醇分數次洗滌容器，洗液濾入同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。該方案如用于柑橘生物類黃酮混合物中橙皮甙的測定，一是柑橘生物類黃酮混合物供試品溶液雜質太多，等度洗脫不能將雜質完全清除，ニ是索氏提取樣品前處理復雜，前處理時間過長，該方法并不完全適用于柑橘生物類黃酮混合物橙皮甙的測定。因此，有必要針對柑橘生物類黃酮混合物的特點制定其中橙皮甙的檢測方法。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種柑橘生物類黃酮中橙皮甙含量的測定方法，它操作筒便、專屬性和重復性好、回收率高，能夠準確測定橙皮甙的含量，從而有效控制柑橘生物類黃酮混合物的質量。本專利技術是通過以下方式實現的:柑橘生物類黃酮中橙皮甙含量的測定方法，其特征在于包括以下步驟: (1)、稀釋溶液的制備:取20mmol/l的氫氧化鈉溶液和50%甲醇溶液按0.5 1.5:1.5 0.5比例混合均勻； (2)、對照品溶液的制備:精密稱取橙皮甙和柚皮甙對照品適量，加稀釋溶液制成橙皮甙和柚皮甙濃度均為0.10mg/ml的對照品溶液； (3)、供試品溶液的制備:精密稱取10-15mg樣品于IOOml容量瓶中，加入80ml稀釋溶液，60 70°C超聲10-20min，取出，冷卻至室溫后，用稀釋溶液定容至刻度，取部分溶液用0.45um微孔濾膜過濾后備用； (4)、確定色譜條件:色譜柱:C18色譜柱，4.6mmX250mm，5iim ;流動相和梯度:流動相用0.45 m微孔濾膜過濾后，脫氣；流動相A:0.1%三氟こ酸水溶液；流動相B:0.1%三氟こ酸的甲醇-こ腈1:1溶液；梯度洗脫時間見圖1 ;柱溫:35°C ;流速:lml/min ；檢測波長:292nm ;保留時間:柚皮苷約17.6min ；橙皮甙約18.0min ; (5)、檢驗程序: 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20 u 1，注入液相色譜儀，測定，在規定條件下，每針運行時間應三倍于橙皮甙的保留時間； 系統適應性條件:完全分離兩種系統適應性物質，柱效應達到:理論塔板數大于2000，橙皮式和柚皮式的分離度大于1.5 ； 通過測得數據計算橙皮甙含量橙皮甙％=A# XC5tfX 100/A^ Xff# X 100% 式中:C :橙皮甙標準工作溶液濃度mg/ml ；A#:樣品峰面積；AW:橙皮甙標準工作溶液峰面積平均值；W#:樣品的質量mg。本專利技術操作簡便、專屬性和重復性好、回收率高，能夠準確測定橙皮甙的含量，從而有效控制柑橘生物類黃酮混合物的質量。附圖說明圖1是本專利技術的梯度洗脫時間。具體實施方式 柑橘生物類黃酮中橙皮甙含量的測定方法，其特征在于包括以下步驟:(I)、稀釋溶液的制備:取20mmol/l的氫氧化鈉溶液和50%甲醇溶液按0.5 1.5:1.5 0.5比例混合均勻；(2)、對照品溶液的制備:精密稱取橙皮甙和柚皮甙對照品適量，加稀釋溶液制成橙皮甙和柚皮甙濃度均為0.10mg/ml的對照品溶液； (3)、供試品溶液的制備:精密稱取10-15mg樣品于IOOml容量瓶中，加入80ml稀釋溶液，60 70°C超聲10-20min，取出，冷卻至室溫后，用稀釋溶液定容至刻度，取部分溶液用0.45 U m微孔濾膜過濾后備用；(4)、確定色譜條件:色譜柱:C18色譜柱，4.6mmX 250mm,m ;流動相和梯度:流動相用0.45 iim微孔濾膜過濾后，脫氣；流動相A:0.1%三氟こ酸水溶液；流動相B:0.1%三氟こ酸的甲醇-こ腈1:1溶液；梯度洗脫時間見圖1 ;柱溫:35°C ；流速:lml/min ；檢測波長:292nm ;保留時間:柚皮苷約17.6min ；橙皮式約18.0min ;(5)、檢驗程序:分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20 yl，注入液相色譜儀，測定，在規定條件下，每針運行時間應三倍于橙皮甙的保留時間；系統適應性條件:完全分離兩種系統適應性物質，柱效應達到:理論塔板數大于2000，橙皮甙和柚皮甙的分離度大于1.5 ;通過測得數據計算橙皮甙含量橙皮甙％=A樣X C對XlOOAw XW樣X 100% 式中:C :橙皮甙標準工作溶液濃度mg/ml ；A#:樣品峰面積；AW:橙皮甙標準工作溶液峰面積平均值;W#:樣品的質量mg。具體實施時，使用氫氧化鈉溶液和50%甲醇溶液的混合溶液作為提取溶液，60 70°C超聲提取10 20分鐘，堿溶液有效地提高了橙皮甙的提取效率，50%甲醇溶液改善橙皮甙峰形的対稱性，流動相加入0.1%三氟こ酸既調節了流動相PH值，三氟こ酸本身也是離子對試劑。梯度洗脫通過改善流動相比例，最短時間內完成了所有成分的洗脫，橙皮甙和柚皮甙的分離度、柱效測試，有效地監測了色譜條件，本專利技術專屬性好、重復性好、回收率高，對柑橘生物類黃酮橙皮甙的檢測更為有效。下面用實驗例進ー步說明本專利技術: 實施例1、柑橘生物類黃酮混合物批號:20110918 以橙皮甙為含量測定指標，按如下方法進行含量測定: (I)稀釋溶液的制備:加20mmol/l的氫氧化鈉溶液和50%甲醇溶液按(I:1)比例均勻混合； (2 )對照品溶液的制備:精密稱取橙皮甙和柚皮甙對照品適量，加稀釋溶液制成橙皮甙和柚皮甙濃度均為0.10mg/ml的對照品溶液； (3)供試品溶液的制備:精密稱取12.5mg樣品于IOOml容量瓶中，加入80ml稀釋溶液，65°C超聲15min，取出，冷卻至室溫后，用稀釋溶液定容至刻度。取部分溶液用0.45iim微孔濾膜過濾后備用； (4)確定色譜條件:色譜柱:C18色譜柱，4.6mmX250mm，5iim ;流動相和梯度:流動相用0.45 m微孔濾膜過濾后，脫氣；流動相A:0.1%三氟こ酸水溶液；流動相B:0.1%三氟こ酸的甲醇-こ腈1:1溶液；梯度洗脫時間見圖1;柱溫:35°C ;流速:本文檔來自技高網...

【技術保護點】
柑橘生物類黃酮中橙皮甙含量的測定方法，其特征在于包括以下步驟：（1）、稀釋溶液的制備：?取20mmol/l的氫氧化鈉溶液和50%甲醇溶液按（0.5～1.5：1.5～0.5）比例混合均勻；（2）、對照品溶液的制備：精密稱取橙皮甙和柚皮甙對照品適量，加稀釋溶液制成橙皮甙和柚皮甙濃度均為0.10mg/ml的對照品溶液；（3）、供試品溶液的制備：精密稱取10?15mg樣品于100ml容量瓶中，加入80ml稀釋溶液，60～70℃超聲10?20min，取出，冷卻至室溫后，用稀釋溶液定容至刻度，取部分溶液用0.45μm微孔濾膜過濾后備用；（4）、確定色譜條件：色譜柱：C18色譜柱，4.6mm×250mm，5μm；流動相和梯度：流動相用0.45μm微孔濾膜過濾后，脫氣；流動相A：0.1%三氟乙酸水溶液；流動相B：0.1%三氟乙酸的甲醇?乙腈1:1溶液；梯度洗脫時間見圖1；柱溫：35℃?；流速：1ml/min?；?檢測波長：292nm；保留時間：柚皮苷約?17.6min?；?橙皮甙約?18.0min；（5）、檢驗程序：????分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，在規定條件下，每針運行時間應三倍于橙皮甙的保留時間；系統適應性條件：完全分離兩種系統適應性物質，柱效應達到：理論塔板數大于2000，橙皮甙和柚皮甙的分離度大于1.5；通過測得數據計算橙皮甙含量??橙皮甙%=A樣×C對×100/A對×W樣×100%??式中：C對：橙皮甙標準工作溶液濃度mg/ml；A樣：樣品峰面積；A對：橙皮甙標準工作溶液峰面積平均值；W樣：樣品的質量mg。...

【技術特征摘要】
1.橘生物類黃酮中橙皮甙含量的測定方法，其特征在于包括以下步驟: (1)、稀釋溶液的制備:取20mmol/l的氫氧化鈉溶液和50%甲醇溶液按(0.5 1.5:`1.5 0.5)比例混合均勻； (2)、對照品溶液的制備:精密稱取橙皮甙和柚皮甙對照品適量，加稀釋溶液制成橙皮甙和柚皮甙濃度均為0.10mg/ml的對照品溶液； (3)、供試品溶液的制備:精密稱取10-15mg樣品于IOOml容量瓶中，加入80ml稀釋溶液，60 70°C超聲10-20min，取出，冷卻至室溫后，用稀釋溶液定容至刻度，取部分溶液用`0.45um微孔濾膜過濾后備用； (4)、確定色 譜條件:色譜柱:C18色譜柱，4.6mmX250mm，5iim;流動相和梯度:流動相用0.45 m微孔濾膜過濾后，脫氣；流動相A...

【專利技術屬性】
技術研發人員：朱偉，包亞君，張沛霞，
申請(專利權)人：江蘇艾蘭得營養品有限公司，
類型：發明
國別省市：