多孔牙齒羥基磷灰石的檢測方法及試劑盒技術

本發明專利技術涉及一種用于檢測多孔牙齒羥基磷灰石的試劑盒和探針，包括可以與多孔牙齒羥基磷灰石結合的蛋白質或其檢測物。本發明專利技術還涉及一種用于檢測涉及多孔牙齒羥基磷灰石的狀況的方法，包括在受體的牙齒或牙齒試樣的內部或表面，檢測與多孔牙齒羥基磷灰石結合的蛋白質。本發明專利技術還涉及一種檢測低礦化發育性牙齒缺陷(DDD)或檢測完整的和/或受損MIH牙釉質的方法，并且涉及一種去除與多孔牙齒羥基磷灰石結合的蛋白質的試劑盒和方法。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及ー種用于檢測牙齒多孔羥基磷灰石的試劑盒及探針，以及ー種用于檢測涉及牙齒多孔羥基磷灰石的狀況的方法。
技術介紹
牙齒的彈性取決于礦物質(稱為羥基磷灰石)與有機成分(蛋白質、細胞和組織)之間的復雜的相互作用。在正常情況下，牙釉質和牙本質中的羥基磷灰石構成極其致密的結構，這種結構提供了維持牙齒完整性所需的硬度和韌性。牙釉質和牙本質中礦物質密度的流失導致異常的多孔羥基磷灰石，進而導致牙齒物理彈性的下降及結構破損。多孔羥基磷灰石是由幾種普遍的情況所引起的，包括齲齒和發育性牙齒缺陷(DDD)。齲齒(蛀牙)是ー種由分泌酸的細菌引起的疾病。由致齲細菌產生的酸能在ー種稱為脫礦化作用的過程中溶解羥基磷灰石。脫礦化作用的初始過程(稱為初期齲病)會導致羥基磷灰石的不連續區域，稱為白斑病變。隨著時間的流逝，白斑病變會發展成為洞(即牙齒材料的流失)，或者其有可能停止發展(稱為不活躍齲病)并在ー種稱為重礦化作用的過程中重新形成致密的羥基磷灰石売。在洞的形式之前，該過程是可逆的(即，重礦化作用)，但是一旦牙釉質流失，其將不會再生。齲病通過外觀檢查，物理檢查(即使用牙用探針劃痕)和X射線照相(用以檢測牙齒之間或牙齦線以下的齲齒)的結合來診斷。令人擔憂的是，這些診斷途徑會錯失大約一半的早期齲病，而使用這些方法診斷為齲病的牙齒診斷中高達13%事實上并不是齲病。改善診斷的最新嘗試包括使用測量電阻的設備、定量光導熒光技術(QLF)和紅外激光熒光技術(DIAGNOdent ),但是由于裝置的成本和尺`寸以及個體之間的差異，沒有ー個能獲得廣泛的應用。另ー種途徑是使用了染料來檢測牙本質中的齲病。然而，這些染料對多孔羥基磷灰石是非選擇性的:它們與蛋白質結合(推測為與牙本質中感染細菌有關的蛋白質)，或者它們占據胞間隙，這降低了特異性與敏感性。此外，這些染料會引起口腔變色、附著于健康的牙齒或需要輻照器才能被觀測到。齲病有兩種主要的治療方法，它們的選擇是以疾病的程度來決定的。白斑病變可以通過重礦化的途徑治療(如，氟化物療法或對生物活性分子穩定的無定形磷酸鈣)。牙洞需要常規的修復牙醫學手段治療(即，填充)。DDD是另ー種引起多孔羥基磷灰石的普遍原因。它們令人不安的流行并潛在影響超過50%的具有包括牙痛，外形損傷和増加的齲病風險多重負擔的人群。兩種最普遍的DDD是牙齒氟中毒(以擴散的池斑為特征)和臼齒/門齒的低礦化(Hypomineralisation)(MIH，以界限清楚的濁斑為特征)；它們都是由環境因素引起的(即后天缺陷)。另ー種嚴重但是不常見的可以導致多孔羥基磷灰石的DDD是遺傳性的牙釉質發生不全疾病。MIH典型地影響10-20%的兒童并且是齲齒的ー個主要風險因素，畸齒矯正的一個風險因素，對社會來講代價昂貴。MIH被認為是起因于牙釉質形成細胞的多因子系統性紊舌し。然而，MIH的起因除了與排除氟化物和與幼年時期的疾病相關之外，仍然是個迷。目前沒有可用的用于診斷和修復MIH或其他DDD的產品，齲齒和不同類型的DDD的鑒別診斷是困難的，并且在很大程度上依賴于每個牙科專業人士的經驗和技能。目前為齲齒重礦化而開發的程序和/或產品對MIH效果不好。恢復性治療經常受阻，這是因為MIH的釉質是軟的，多孔的并且與正常的牙組織分界不清。因此，需要ー種用于診斷、劃界和修復由齲齒和DDD引起的多孔性性牙齒羥基磷灰石的新工具。這里我們通過對新技術的詳述來對這種需求進行說明，這種新技術是基于我們在涉及多孔羥基磷灰石的狀況的致病機理的最新發現。
技術實現思路
本專利技術的第一方面是提供一種試劑盒，當用于檢測多孔牙齒羥基磷灰石時，包括:能與多孔牙齒羥基磷灰石結合的蛋白質；或者能檢測結合到所述多孔牙齒羥基磷灰石的所述蛋白質的檢測物(detector)。本專利技術的第二方 面提供一種探針，當用于檢測多孔牙齒羥基磷灰石時，包括:能與多孔牙齒輕基磷灰石結合的蛋白質；和報告物(reporter)。本專利技術的第三方面提供一種制備第二方面中的探針的方法，包括連接(i)能與多孔牙齒羥基磷灰石結合的蛋白質和(ii)報告物。本專利技術的第四方面提供一種用于檢測涉及多孔牙齒羥基磷灰石的狀況的方法，包括在受體的牙齒或該牙齒試樣的內部或表面，檢測與多孔牙齒羥基磷灰石結合的蛋白質。本專利技術的第五方面提供ー種用于檢測低礦化DDD的方法，包括檢測蛋白質，其與牙齒或該牙齒試樣的測試羥基磷灰石結合的濃度相比于其與對照牙齒樣本或對照牙齒的對照羥基磷灰石結合的濃度提高了，并且檢測牙釉蛋白，其與所述測試羥基磷灰石結合的濃度接近于其與對照羥基磷灰石結合的濃度。本專利技術的第六方面提供一種用于檢測完整的和/或受損MIH釉質的方法，包括檢測與MIH羥基磷灰石結合的白蛋白和血紅蛋白，其中只檢測到白蛋白而未檢測到血紅蛋白表示完整的MIH釉質，而檢測到血紅蛋白表示受損的MIH釉質。本專利技術的第七方面提供一種用于去除與多孔牙齒羥基磷灰石結合的蛋白質的試劑盒，包括:(a) (i) 一種或多種沖洗液或(ii)干組分，用干與水混合以制備ー種或多種沖洗液，其中所述ー種或多種沖洗液適用于去除與多孔牙齒羥基磷灰石結合的蛋白質；和(b) 一種重礦化劑或矯正礦化劑。本專利技術的第八方面提供一種用于去除與多孔牙齒羥基磷灰石結合的蛋白質的方法，包括使用一種或多種沖洗液清洗牙齒或該牙齒試樣。本專利技術的第九方面提供一種用于去除與多孔牙齒羥基磷灰石結合的蛋白質的試劑盒，包括:一種或多種沖洗液；一種或多種干組分，用干與水混合制備ー種或多種沖洗液，其中所述ー種或多種沖洗液適用于去除牙齒或該牙齒試樣的內部或表面的蛋白質，所述牙齒或牙齒試樣通過第四方面中的方法檢測為具有多孔羥基磷灰石的牙齒或牙齒試樣。第一至第六方面中的試劑盒、探針或方法允許原位檢測或非原位診斷。第一至第六方面中的試劑盒、探針或方法，其可用于檢測齲的和/或MIH/DDD以及劃分齲的和/或MIH/DDD的邊界，以為牙齒的恢復做準備。而后臨床醫生可以明確地去除由此而顯示的齲的或MIH組織，確保了清晰邊界的制備并且提高了恢復成功的可能性。 第一方面中的試劑盒或第二方面中的探針提供了關鍵的工具，第四方面中的方法可用于多孔牙齒羥基磷灰石的例行篩查。此外，第一至第六方面中的試劑盒、探針或方法可以用于暴露的牙齒羥基磷灰石的早期檢測。以這樣的方式，第一至第六方面中的試劑盒、探針或方法可以用于牙齒變化的例行篩查，這種牙齒變化若未檢測到，可能最終導至齲齒(齲病的前兆)。因此，可以精確并及時地確定目標進行恢復和/或重礦化，以阻止齲病的發展和/或促進重礦化。在一些實施例中，第一至第六方面中的試劑盒、探針或方法尤其適用于兒童第一永久大白齒長出之后的例行篩查。由此，第一至第六方面中的試劑盒、探針或方法也適用于早期檢測多孔羥基磷灰石的牙齒例行篩查。定期的例行篩查提供了在可行的最早時間檢測到可能導致齲齒的牙齒變化的極好機會。而且，第一至第六方面中的試劑盒、探針和方法可對任何治療進行監控，例如已知的重礦化治療法，其包括被生物活性分子穩定的氟化物或磷酸鈣。第八方面中的方法以及第七和第九方面中的試劑盒能夠溫和地和/或特異性地去除過量的強カ留存在多孔羥基磷灰石上的蛋白質，例如在MIH病變中，在重礦化治療之前或期間使用。第一至第五或第七至第九方面中的蛋白本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2010.03.19 AU 20109011711.一種用于檢測多孔牙齒羥基磷灰石的試劑盒，包括:能與多孔牙齒羥基磷灰石結合的蛋白質；或者檢測與多孔牙齒羥基磷灰石結合的所述蛋白質的檢測物。2.根據權利要求1所述的試劑盒，其中所述蛋白質選自以下群組:血清白蛋白、補體03β鏈、α-l-抗胰蛋白酶、蛋白S100-A9、乳運鐵蛋白、白細胞彈性蛋白酶抑制劑、抗凝血酶-1I1、血紅蛋白亞α亞基、血紅蛋白β亞基、血紅蛋白δ亞基、催乳素誘導蛋白、α-淀粉酶l、IgK鏈V-1II區SIE、Iga-2鏈C區、非典型蛋白c6或f 58、絲氨酸蛋白酶抑制劑B3、和牙釉蛋白。3.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其中所述蛋白質特異性地與多孔牙齒羥基磷灰石結合。4.根據權利要求1至3任一項所述的試劑盒，其中所述檢測物包括特異性地與所述蛋白質結合的抗體。5.根據權利要求1至4任一項所述的試劑盒，還包括報告物，所述報告物特異性地結合或連接到所述蛋白質或檢測物。6.根據權利要求5所述的試劑盒，其中所述報告物為顯色的。7.根據權利要求6所述的試劑盒，其中所述顯色的報告物為氨基黑。8.根據權利要求5所述的試劑盒，其中報告物為射線不透過的。9.根據權利要求5至8任一項所述的試劑盒，還包括連接物，所述連接物用于將所述報告物連接到所述蛋白質或檢測物。10.根據權利要求9所述的 試劑盒，其中所述連接物為異型雙功能交聯劑。11.根據權利要求10所述的試劑盒，其中所述異型雙功能交聯劑為琥珀酰亞胺基4-[N-馬來酰亞胺基甲基]環己烷甲酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(SMCC)。12.根據權利要求1至11任一項所述的試劑盒，其中所述蛋白質為血紅蛋白或其亞基。13.根據權利要求1至12任一項所述的試劑盒，還包括第二檢測物，所述第二檢測物檢測第二蛋白質。14.一種用于檢測多孔牙齒羥基磷灰石的探針，包括:能與多孔牙齒羥基磷灰石結合的蛋白質；和報告物。15.根據權利要求14所述的探針，其中所述蛋白質選自以下群組:血清白蛋白、補體03β鏈、a-1-抗胰蛋白酶、蛋白S100-A9、乳運鐵蛋白、白細胞彈性蛋白酶抑制劑、抗凝血酶_111、血紅蛋白a亞基、血紅蛋白β亞基、血紅蛋白δ亞基、/[隹乳素誘導蛋白、Ct _淀粉酶l、IgK鏈V-1II區SIE、Iga-2鏈C區、非典型蛋白C6或f 58、絲氨酸蛋白酶抑制劑B3、和牙釉蛋白。16.根據權利要求14或15所述的探針，其中所述蛋白質為血紅蛋白或其亞基。17.根據權利要求14至16任一項所述的探針，其中所述報告物為顯色的。18.根據權利要求17所述的探針，其中所述顯色的報告物為氨基黑。19.根據權利要求14至16任一項所述的探針，其中所述報告物為射線不透過的。20.根據權利要求14至19任一項所述的探針，還包括連接物，所述連接物用于將所述蛋白質連接到所述報告物。21.根據權利要20所述的探針，其中所述連接物為交聯劑。22.根據權利要21所述的探針，其中所述交聯劑為異型雙功能交聯劑。23.根據權利要22所述的探針，其中所述異型雙功能交聯劑為SMCC。24.一種用于制備如權利要求14至23任一項所述的探針的方法，包括連接(i)能與多孔牙齒羥基磷灰石結合的蛋白質和(ii)報告物。25.一種用于檢測涉及多孔牙齒羥基磷灰石狀況的方法，包括在受體的牙齒或牙齒試樣的內部或表面，檢測與多孔牙齒羥基磷灰石結合的蛋白質。26.根據權利要求25所述的方法，其中所述蛋白質選自以下群組:血清白蛋白、補體C33鏈、a-1-抗胰蛋白酶、蛋白S100-A9、乳運鐵蛋白、白細胞彈性蛋白酶抑制劑、抗凝血酶_111、血紅蛋白a亞基、血紅蛋白0亞基、血紅蛋白S亞基、丨隹乳素誘導蛋白、Ct _淀粉酶l、IgK鏈V-1II區SIE、Iga-2鏈C區、非典型蛋白c6或f 58、絲氨酸蛋白酶抑制劑B3、和牙釉蛋白。27.根據權利要求25或26 所述的方法，其中檢測包括使用如權利要求1至13任ー項所述的試劑盒，或權利要求14至23任一項所述的探針。28.根據權利要求25或26所述的方法，其中檢測包括免疫檢測、色譜分析、電泳或質譜分析。29...

【專利技術屬性】
技術研發人員：邁克爾·詹姆斯·哈伯德，喬納森·愛德華·曼格姆，
申請(專利權)人：墨爾本大學，
類型：
國別省市：