人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒制造技術(shù)

本實用新型專利技術(shù)公開了一種人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，包括設(shè)有加樣孔和檢測窗的塑卡，塑卡內(nèi)插裝HIV試紙條，且所述HIV試紙條結(jié)構(gòu)為底板上粘貼上樣墊、標(biāo)記物墊、硝酸纖維膜和吸水紙，同時硝酸纖維膜上包被有1號檢測線、2號檢測線、3號檢測線和質(zhì)控線。本實用新型專利技術(shù)的有益效果是，可同時檢測并分型HIV病毒抗體I型或II型，同時檢測出P24抗原，進一步縮短了檢測窗口期，提高了檢測靈敏度和特異性。（*該技術(shù)在2022年保護過期，可自由使用*）

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒
本技術(shù)涉及生物應(yīng)用
，特別是一種人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒。
技術(shù)介紹
人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV),顧名思義它會造成人類免疫系統(tǒng)的缺陷。1981年，人類免疫缺陷病毒在美國首次發(fā)現(xiàn)。它是一種感染人類免疫系統(tǒng)細(xì)胞的慢病毒(Lentivirus)，屬反轉(zhuǎn)錄病毒的一種。至今無有效療法的致命性傳染病。該病毒破壞人體的免疫能力，導(dǎo)致免疫系統(tǒng)失去抵抗力，從而各種疾病及癌癥得以在人體內(nèi)生存，發(fā)展到最后，導(dǎo)致艾滋病(獲得性免疫缺陷綜合癥)。自美國1981年診斷出首例艾滋病患者以來，至2009年全球新增艾滋病感染者260萬人，180萬人死于艾滋病，截止到2009年底，全球共有艾滋病感染者3330萬人。截至2010年10月底，中國累計報告艾滋病病毒感染者和病人37萬余例，其中死亡6.8萬余例。局部地區(qū)和特定人群疫情嚴(yán)重，云南、廣西、河南、四川、新疆和廣東6省區(qū)累計報告感染者和病人數(shù)占全國77.1%人類免疫缺陷病毒有I型和II型，即HIV-1和HIV-2兩種類型，其生物學(xué)特征很相似，HIV-1是引起全球艾滋病流行的病原，HIV-2是后來在西非發(fā)現(xiàn)的，最初只在西非流行，現(xiàn)已擴散到世界很多地區(qū)。由于HIV的易變性，目前控制HIV傳播最有效的手段就是盡早發(fā)現(xiàn)病毒攜帶者，盡早隔絕傳染源。現(xiàn)有檢測HIV的方法有聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、HIV抗體檢測和P24抗原檢測。HIV抗體檢測最常用的試劑為酶聯(lián)免疫試劑盒免疫層析類試劑，一般靈敏度和特異性都很高，最短在HIV感染后十余天即可檢測出來。但由于部分HIV感染在5-8個月才開始出現(xiàn)抗體，世界衛(wèi)生組織將HIV感染的窗口期定為6個月。HIV在窗口期內(nèi)已經(jīng)具有傳染性，為了進一步減少窗口期傳染情況的發(fā)生，目前已出現(xiàn)可同時檢測HIV抗體和抗原的方法，能較HIV感染后抗體轉(zhuǎn)陽前4-7天檢測出HIV感染。HIV感染后最早出現(xiàn)的是P24抗原，然后才出現(xiàn)相應(yīng)的特異性HIV抗體，隨抗體滴度的升高P24逐漸下降至檢測不出。在病情發(fā)展后期P24抗原在血液中又可檢測出。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本技術(shù)的目的是為了解決上述問題，設(shè)計了一種人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒。實現(xiàn)上述目的本技術(shù)的技術(shù)方案為，一種人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，包括設(shè)有加樣孔和檢測窗的塑卡，塑卡內(nèi)插裝HIV試紙條，且所述HIV試紙條的結(jié)構(gòu)為底板上粘貼上樣墊、標(biāo)記物墊、硝酸纖維膜和吸水紙，且標(biāo)記物墊和吸水紙分別搭接在硝酸纖維素膜的兩端，上樣墊搭接在標(biāo)記物墊的另一端上，同時硝酸纖維膜上包被有I號檢測線、2號檢測線和3號檢測線及質(zhì)控線。所述I號檢測線是由HIVgp41抗原和gpl20抗原包被在硝酸纖維膜上構(gòu)成的。所述2號檢測線是由HIV gp36型抗原包被在硝酸纖維膜上構(gòu)成的。所述3號檢測線是由HIV P24抗體包被在硝酸纖維膜上構(gòu)成的。所述質(zhì)控線是由羊抗鼠IgG抗體包被在硝酸纖維膜上構(gòu)成的。所述標(biāo)記物墊上標(biāo)記有HIVgp41抗原、HIVgpl20抗原和HIVgp36抗原以及P24抗體構(gòu)成的。利用本技術(shù)的技術(shù)方案制作的人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，進一步縮短了檢測窗口期，提高檢測靈敏度和特異性，操作簡單、省時、判斷直觀，適用于血清、血漿、全血樣本中HIV病毒抗體和P24抗原的快速檢測。附圖說明圖1是本技術(shù)所述人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖；圖2是本技術(shù)所述HIV試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖；圖中，1、加樣孔；2、檢測窗；3、塑卡；4、底板；5、上樣墊；6、標(biāo)記物墊；7、硝酸纖維膜；8、吸水紙；9、1號檢測線；10、2號檢測線；11、3號檢測線；12、質(zhì)控線。具體實施方式以下結(jié)合附圖對本技術(shù)進行具體描述，圖1是本技術(shù)所述人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖，圖2是本技術(shù)所述HIV試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖，如圖1所示，一種人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，包括設(shè)有加樣孔I和檢測窗2的塑卡3，塑卡內(nèi)插裝HIV試紙條；如圖2所示，所述HIV試紙條結(jié)構(gòu)為底板4上粘貼上樣墊5、標(biāo)記物墊6、硝酸纖維膜7和吸水紙8，且標(biāo)記物墊和吸水紙分別搭接在硝酸纖維素膜的兩端，上樣墊搭接在標(biāo)記物墊的另一端上，同時硝酸纖維膜上包被有I號檢測線9、2號檢測線10、3號檢測線11和質(zhì)控線12。其中，所述I號檢測線是由HIVgp41抗原和gpl20抗原包被在硝酸纖維膜上構(gòu)成的；所述2號檢測線是由HIVgp36型抗原包被在硝酸纖維膜上構(gòu)成的；所述3號檢測線是由HIVP24抗體包被在硝酸纖維膜上構(gòu)成的。所述質(zhì)控線是由羊抗鼠IgG抗體包被在硝酸纖維膜上構(gòu)成的；所述標(biāo)記物墊是由無紡布上標(biāo)記HIVgp41抗原、HIVgpl20抗原和HIVgp36抗原以及P24抗體構(gòu)成的。標(biāo)記物墊的制備:用氯金酸-檸檬酸三鈉還原法制備直徑為40nm的膠體金溶液，制備完成后取IOOml膠體金溶液，用0.2MK2C03將溶液pH調(diào)到pH9.0,然后將溶液置于磁力攪拌器上緩慢攪拌，按每IOOml溶液加入0.5mg、l.0mg、l.5mg重組抗原或抗體緩慢滴加到膠體金溶液中，繼續(xù)攪拌I小、時，再加入終濃度為0.2% BSA,0.1%聚乙二醇20000進行封閉30分鐘，12000轉(zhuǎn)離心30分鐘，棄上清，用膠體金工作液復(fù)溶至76.5ml，按Iml溶液鋪16cm2的比例均勻地鋪在無紡布上，再置于溫度20 25°C、濕度小于30%的干燥間干燥2 4小時，制成標(biāo)記物墊。HIVgp41抗原和HIVgp 120抗原、HIVgp36抗原和P24抗體的包被:用0.0lMpH9.0CBS 將 HIVgp41 抗原、HIVgpl20 抗原、HIVgp36 抗原分別稀釋成 0.5mg/ml、l.0mg/ml、1.5mg/ml，然后將稀釋后的HIVgp41抗原和HIVgpl20抗原包被液用噴膜儀在硝酸纖維膜上按1.0ul/cm劃線包被，構(gòu)成I號檢測線；將稀釋后的HIVgp36抗原包被液用噴膜儀在硝酸纖維膜上按1.0ul/cm劃線包被，構(gòu)成2號檢測線；用0.0lM pH7.2PBS將HIVP24抗體分別稀釋成1.0mg/ml> 1.5mg/ml、2.0mg/ml,然后用噴膜儀將包被液在NC膜上按1.0ul/cm劃線包被，構(gòu)成3號檢測線，最后包被羊抗鼠IgG抗體在硝酸纖維膜上作為質(zhì)控線，包被完成后將硝酸纖維膜置于干燥間干燥3 4小時。HIV試紙條的裝配:在溫度20 25°C、濕度小于30%的干燥室內(nèi)，取底板，將已包被的硝酸纖維膜放置在底板的中部粘貼，在硝酸纖維膜I號檢測線一側(cè)搭接標(biāo)記物墊，在標(biāo)記物墊另一側(cè)搭接粘貼上樣墊，在硝酸纖維膜質(zhì)控線一側(cè)距邊緣搭接吸樣墊；然后用裁剪機將貼好的底板切成適當(dāng)寬度的試紙條。本技術(shù)在實際檢測時，首先撕開鋁箔袋取出試劑卡平放，取2-3滴樣本滴加至加樣孔中，靜止20-30分鐘觀察結(jié)果。若出現(xiàn)兩條紅線，其中一條為質(zhì)控線，另一條為I號檢測線時，說明待檢樣本中含有HIV-1型抗體；若也出現(xiàn)兩條紅線，其中一條為質(zhì)控線，另一條為2號檢測線時，說明待檢樣本中含有HIV-2型抗體；若出現(xiàn)兩條紅線，其中一條為質(zhì)控線，另一條為3號檢測線時，說明待檢樣本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，包括設(shè)有加樣孔(1)和檢測窗(2)的塑卡(3)，其特征在于，塑卡內(nèi)插裝HIV試紙條，且所述HIV試紙條的結(jié)構(gòu)為底板(4)上粘貼上樣墊(5)、標(biāo)記物墊(6)、硝酸纖維膜(7)和吸水紙(8)，且標(biāo)記物墊和吸水紙分別搭接在硝酸纖維素膜的兩端，上樣墊搭接在標(biāo)記物墊的另一端上，同時硝酸纖維膜上包被有1號檢測線(9)、2號檢測線(10)、3號檢測線(11)和質(zhì)控線(12)。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，包括設(shè)有加樣孔(I)和檢測窗(2)的塑卡(3)，其特征在于，塑卡內(nèi)插裝HIV試紙條，且所述HIV試紙條的結(jié)構(gòu)為底板(4)上粘貼上樣墊(5)、標(biāo)記物墊￠)、硝酸纖維膜(7)和吸水紙(8)，且標(biāo)記物墊和吸水紙分別搭接在硝酸纖維素膜的兩端，上樣墊搭接在標(biāo)記物墊的另一端上，同時硝酸纖維膜上包被有I號檢測線(9)、2號檢測線(10)、3號檢測線(11)和質(zhì)控線(12)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，其特征在于，所述I號檢測線是由HIVgp41抗原和gpl20抗原包被在硝酸纖維膜上構(gòu)成的。3.根據(jù)權(quán)利要...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李洲，許俊艷，
申請(專利權(quán))人：天津中新科炬生物制藥有限公司，
類型：實用新型
國別省市：