一種檢測(cè)STED2基因突變的試劑盒制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種檢測(cè)STED2基因突變的試劑盒，該試劑盒包括擴(kuò)增STED2基因的試劑和檢測(cè)STED2基因突變的試劑。所述擴(kuò)增STED2基因的試劑包括擴(kuò)增STED2基因的PCR引物及相應(yīng)的PCR反應(yīng)試劑，其中所述擴(kuò)增STED2基因的PCR引物為針于STED2基因21個(gè)外顯子設(shè)計(jì)的PCR引物，所述PCR引物序列包括SEQ?ID?NO:1-SEQ?ID?NO:64的序列。所述檢測(cè)STED2基因突變的試劑包括用于檢測(cè)STED2突變的測(cè)序引物，所述測(cè)序引物序列包括SEQ?ID?NO:65-SEQ?ID?NO:103的序列。本發(fā)明專利技術(shù)試劑盒可以對(duì)STED2基因所有已知或未知的突變進(jìn)行篩選和檢測(cè)。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及一種檢測(cè)試劑盒，特別涉及一種檢測(cè)STED2基因突變的試劑盒。
技術(shù)介紹
STED2基因位于人類3號(hào)染色體短臂，編碼一個(gè)重要的組蛋白修飾酶，可對(duì)組蛋白H3K36位點(diǎn)進(jìn)行甲基化修飾。研究表明，H3K36以及另一位點(diǎn)H3K79是關(guān)鍵的兩個(gè)組蛋白修飾位點(diǎn)，他們?cè)诨蜣D(zhuǎn)錄延伸過(guò)程中起重要的調(diào)節(jié)作用[Berger S., 2007 ；Nature,447(7143):407-412]。對(duì)12例急性淋巴細(xì)胞系白血病進(jìn)行全基因組測(cè)序發(fā)現(xiàn)，48 %的病例含有組蛋白修飾酶基因的突變，SETD2突變是其中之一 [Zhang J.，etal,2012 ；Nature,481(7380):157-163] 0我們課題組對(duì)一對(duì)三歲同卵雙胞姐妹(一個(gè)發(fā)白血病，另一個(gè)則健康)，進(jìn)行DNA全基因組測(cè)序。發(fā)現(xiàn)白血病女童組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶基因MLL (作用于H3K79位點(diǎn))發(fā)生重排形成MLL-NRIP3融合基因。除此之外，還發(fā)現(xiàn)STED2基因也發(fā)生了兩個(gè)無(wú)義突變。接下來(lái)我們對(duì)134例急性髓系白血病(AML)和107例急性淋巴細(xì)胞系白血病(ALL)進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)STED2突變?cè)贏ML和ALL中都有發(fā)生，并且在MLL重排和非重排的病例中也均有發(fā)生，其突變幾率占總病例(241例)的5.4%。我們的研究發(fā)現(xiàn)，STED2在白血病中的突變類型有截短突變(truncating mutation)和錯(cuò)意突變(missense mutation),這些類型的突變均使STED2酶蛋白發(fā)生結(jié)構(gòu)破壞，失去功能。另外在STED2基因中可發(fā)生多重突變。由于STED2基因突變的類型和多重性符合腫瘤抑制基因的特點(diǎn)，因此其功能的缺失在急性白血病的發(fā)病中起重要作用。因此檢測(cè)病人血細(xì)胞中的STED2基因突變對(duì)白血病的診斷，分子病理分型，預(yù)后分析，用藥指導(dǎo)和病程監(jiān)測(cè) 都有重要的臨床意義。然而，迄今為止，市場(chǎng)上還沒有一種成熟的STED2的檢測(cè)方法以及試劑盒
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
:本專利技術(shù)要解決的技術(shù)問題克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種檢測(cè)STED2基因突變的試劑盒。本專利技術(shù)采用的技術(shù)方案為:一種檢測(cè)STED2基因突變的試劑盒，該試劑盒包括擴(kuò)增STED2基因的試劑和檢測(cè)STED2基因突變的試劑。所述擴(kuò)增STED2基因的試劑包括擴(kuò)增STED2基因的PCR引物及相應(yīng)的PCR反應(yīng)試齊U，其中所述擴(kuò)增STED2基因的PCR引物為針于STED2基因21個(gè)外顯子設(shè)計(jì)的PCR引物，所述引物序列包括SEQID NO: 1-SEQ ID NO:64的序列。所述檢測(cè)STED2基因突變的試劑包括用于檢測(cè)STED2突變的測(cè)序引物，所述測(cè)序引物序列包括SEQ ID NO:65-SEQ ID NO:103的序列。所述試劑盒用于檢測(cè)STED2基因突變的步驟包括:收集和用流式細(xì)胞儀分選病理血細(xì)胞，以及用作對(duì)照的正常細(xì)胞，然后提取這些細(xì)胞的基因組DNA作為模版待用，利用上述針對(duì)21個(gè)外現(xiàn)子的寡聚核苷酸引物，對(duì)所述DNA模板進(jìn)行多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增，然后對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DNA序列測(cè)定。將病理血細(xì)胞的STED2序列和正常對(duì)照細(xì)胞的STED2序列進(jìn)行比對(duì)，找出候選突變序列。然后通過(guò)和已有的DNA序列數(shù)據(jù)庫(kù)相比對(duì)，剔除人群多態(tài)序列，確定STED2突變結(jié)果。本專利技術(shù)所具有的有益效果:使用本專利技術(shù)涉及的方法和試劑盒，可以對(duì)STED2基因所有已知或未知的突變進(jìn)行篩選和檢測(cè)。其敏感性高，特異性強(qiáng)。本專利技術(shù)涉及的方法和試劑盒對(duì)STED2基因突變進(jìn)行檢測(cè)是迄今市場(chǎng)上比較全面準(zhǔn)確的方法，其操作步驟簡(jiǎn)明扼要，非常適合臨床使用的要求，因此具有顯著的優(yōu)點(diǎn)。本專利技術(shù)中涉及的試劑盒及檢測(cè)方法適用于臨床診斷為急性白血病患者的SETD2基因突變檢測(cè)。 急性白血病患者的確定:臨床診斷急性白血病的標(biāo)準(zhǔn)參照WH02008《造血與淋巴系統(tǒng)腫瘤分類》(Swerdlow，Steven H.Who Classification of Tumours of Haematopoietic and LymphoidTissues.4th ed.Lyon，F(xiàn)rance:1nternational Agency for Research on Cancer，2008.)。附圖說(shuō)明圖1為試劑盒的檢測(cè)流程圖。圖2顯示在STED2基因中可發(fā)生多種突變。突變的種類有:截?cái)嗤蛔?truncatingmutation),錯(cuò)義突變(missense mutation)。突變?cè)贏ML和ALL中均有發(fā)生；突變可以發(fā)生在MLL重排病例，也可發(fā)生在非MLL重排病例。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本專利技術(shù)作進(jìn)一步說(shuō)明，但不限定本專利技術(shù)的保護(hù)范圍。實(shí)施例1一、白血病細(xì)胞的取材收集急性白血病患者的外周血5ml，提取單個(gè)核細(xì)胞置_70°C超低溫冰箱或液氮中保存。 二、正常對(duì)照組織的取材本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種檢測(cè)STED2基因突變的試劑盒，其特征在于：該試劑盒包括擴(kuò)增STED2基因的試劑和檢測(cè)STED2基因突變的試劑。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種檢測(cè)STED2基因突變的試劑盒，其特征在于:該試劑盒包括擴(kuò)增STED2基因的試劑和檢測(cè)STED2基因突變的試劑。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種檢測(cè)STED2基因突變的試劑盒，其特征在于:所述擴(kuò)增STED2基因的試劑包括擴(kuò)增STED2基因的PCR引物及相應(yīng)的PCR反應(yīng)試劑，其中所述擴(kuò)增STED2基因的PCR引物為針于STED2基因21個(gè)外顯子設(shè)計(jì)的PCR引物，所述PCR引物序列包括 SEQ ID N0:1-SEQ ID N0:64 的序列。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述一種檢測(cè)STED2基因突變的試劑盒，其特征在于:所述檢測(cè)STED2基因突變的試劑包括用于檢測(cè)S...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：程濤，王前飛，竺曉凡，袁衛(wèi)平，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液病醫(yī)院血液學(xué)研究所，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：