白細(xì)胞或單核細(xì)胞的分離方法、分離材技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)的課題是提供從含有各血細(xì)胞成分的體液有效率地分離白細(xì)胞或單核細(xì)胞的分離系統(tǒng)和分離材。通過使含有各血細(xì)胞成分的體液與平均纖維直徑為2.0μm～6.0μm且透氣性系數(shù)M為6.2～35以下的分離材接觸而將白細(xì)胞捕集到分離材，使用剝離溶液回收被捕集的白細(xì)胞或單核細(xì)胞，從而能夠更有效率地分離白細(xì)胞或單核細(xì)胞。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】
本專利技術(shù)涉及用于從含有各血細(xì)胞成分的體液選擇性地回收白細(xì)胞或單核細(xì)胞的分離材、分離方法。
技術(shù)介紹
近年來，伴隨著血液學(xué)、科學(xué)技術(shù)的迅速進(jìn)步，如下治療方式得到廣泛普及，S卩，通過從以全血、骨髓、臍帶血、組織提取物為代表的體液僅分離需要的血液組分并供患者使用來提高治療效果，進(jìn)而，通過不給予治療所不需要的部分來抑制副作用。例如，血液輸血也是其中之一。紅細(xì)胞制劑是在出血和紅細(xì)胞不足的情況下、或在由于紅細(xì)胞的功能降低而導(dǎo)致氧缺乏的情況下得到使用的血液制劑。紅細(xì)胞制劑中不需要會誘導(dǎo)異常的免疫反應(yīng)、移植物抗宿主病(GVHD)等副作用的白細(xì)胞，需要用過濾器除去白細(xì)胞。根據(jù)情況，有時除白細(xì)胞之外，也要除去血小板。另一方面，血小板制劑是由存在血液凝固因子的缺乏而導(dǎo)致的出血或有出血趨勢的患者所使用的血液制劑。為了制造血小板制劑，通過離心分離來除去血小板以外的不需要的細(xì)胞、成分，僅采集需要的血小板成分。而且，近年來，開始積極進(jìn)行面向白血病、實體癌治療的造血干細(xì)胞移植，可采取將治療所需要的含有造血干細(xì)胞的白細(xì)胞群分離并給予的方法。作為該造血干細(xì)胞的來源，從供體的負(fù)擔(dān)少、增殖能力優(yōu)異等優(yōu)點出發(fā)，除骨髓、外周血之外，臍帶血也備受關(guān)注。另外，近年來，啟示了在月經(jīng)血中也存在豐富的干細(xì)胞，存在此前被廢棄的月經(jīng)血也可作為珍貴的干細(xì)胞來源而被利用的可能性。對于骨髓、外周血 ，期望除去不需要的細(xì)胞，將白細(xì)胞分離、純化后給予，另一方面，對于臍帶血，用于血緣者的血液銀行開始盛行，需要冷凍保存至使用時，所以出于防止由冷凍保存而導(dǎo)致的紅細(xì)胞溶血的目的，也要將白細(xì)胞分離、純化。作為白細(xì)胞的分離方法，提出了利用使用了聚蔗糖(Ficoll)的比重液進(jìn)行的離心分離法、使用了作為紅細(xì)胞沉降劑的羥乙基淀粉的離心分離法，但存在無法進(jìn)行封閉體系內(nèi)的處理而混入異物、菌，處理需要長時間等問題。作為不使用離心分離法的細(xì)胞分離方法，最近還報告了使用不捕集紅細(xì)胞和血小板而僅捕集白細(xì)胞的過濾材料來回收白細(xì)胞的方法(專利文獻(xiàn)1、專利文獻(xiàn)2)。然而，以往，報告了為了將白細(xì)胞捕集到過濾器，纖維直徑需要小于3 μ m(非專利文獻(xiàn)I )，在各文獻(xiàn)的報告中使用的分離材的纖維直徑也小于2.5 μ m (專利文獻(xiàn)1、專利文獻(xiàn)2、專利文獻(xiàn)3)。這是由于以往的白細(xì)胞除去過濾器以最大限度地除去白細(xì)胞為目的，白細(xì)胞的捕集率高，另一方面，存在進(jìn)行體液處理時容易堵塞，回收操作時引起壓力上升而誘發(fā)細(xì)胞回收率的降低、工藝問題等問題。因此，作為用于回收白細(xì)胞的過濾器，即使轉(zhuǎn)用以往的白細(xì)胞除去過濾器，也無法實現(xiàn)充分的功能。專利文獻(xiàn)1:日本特表2001-518792號公報專利文獻(xiàn)2:國際公開第98/32840號公報專利文獻(xiàn)3:日本特開平10-313855號公報非專利文獻(xiàn)1:纖維學(xué)會志 Vol.61，N0.8ρ.Ρ215-216 (2005)
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于提供一種用于從含有各血細(xì)胞成分的體液在避免壓力上升的同時，以高效率回收白細(xì)胞或單核細(xì)胞的分離材，以及使用了該分離材的細(xì)胞分離方法。本專利技術(shù)人等對能夠有效率地從體液分離白細(xì)胞或單核細(xì)胞且不易引起壓力上升的分離材、細(xì)胞分離方法進(jìn)行了深入研究。其結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過使用特定的分離材，能夠有效率地分離白細(xì)胞或單核細(xì)胞，從而完成了本專利技術(shù)。即，本專利技術(shù)涉及一種用于從體液分離白細(xì)胞或單核細(xì)胞的分離材，其特征在于，由平均纖維直徑為2.Ομπι 6.Ομπι且透氣性系數(shù)M為6.2 35的無紡布構(gòu)成。無紡布優(yōu)選由選自聚烯烴、聚酰胺以及聚酯中的至少I種構(gòu)成。體液優(yōu)選為選自外周血、臍帶血、骨髓、月經(jīng)血以及組織提取物中的至少I種。另外，本專利技術(shù)涉及一種細(xì)胞分離用容器，其是由將上述分離材填充于具有體液的入口和體液的出口的容器而得到的。在細(xì)胞分離用容器中，優(yōu)選將分離材在體液的流動方向上填充有I片分離材或者以層疊的方式填充有多片分離材，并優(yōu)選在體液的流動方向上以被壓縮的狀態(tài)進(jìn)行填充。細(xì)胞分離用容器優(yōu)選為柱型。另外，本專利技術(shù)涉及一種細(xì)胞分離方法，其包括使體液與上述分離材接觸而分離白細(xì)胞或單核細(xì)胞的工序。另外，本專利技術(shù)涉及白細(xì)胞或單核細(xì)胞的細(xì)胞分離方法，其包括使體液與上述細(xì)胞分離用容器接觸而將白細(xì)胞或單 核細(xì)胞捕集到分離材的第一工序；和使用剝離溶液從分離材回收白細(xì)胞或單核細(xì)胞的第二工序。在該細(xì)胞分離方法中，優(yōu)選第一工序為從上述細(xì)胞分離用容器的入口導(dǎo)入體液并從出口排出的工序，優(yōu)選第二工序為從細(xì)胞分離用容器的出口導(dǎo)入剝離溶液并從入口回收白細(xì)胞或單核細(xì)胞的工序。進(jìn)一步優(yōu)選在第一工序之后并在第二工序之前，包括通過從入口導(dǎo)入生理鹽水或緩沖液來除去細(xì)胞分離用容器內(nèi)的夾雜成分的工序。進(jìn)一步優(yōu)選在第一工序之前，包括使分離材與生理鹽水或緩沖液接觸的工序。進(jìn)一步優(yōu)選在第一工序之前，包括將細(xì)胞分離容器的體液的入口固定在低于細(xì)胞分離容器的體液的出口的高度的工序。優(yōu)選白細(xì)胞和血小板實質(zhì)上被分離材捕集而紅細(xì)胞實質(zhì)上不被捕集。優(yōu)選被分離的白細(xì)胞或單核細(xì)胞包含造血干細(xì)胞和/或間充質(zhì)干細(xì)胞。另外，本專利技術(shù)涉及一種冷凍保存方法，其特征在于，將利用上述細(xì)胞分離方法得到的細(xì)胞置于液氮環(huán)境下。液氮環(huán)境下優(yōu)選為_196°C -30°C。在該冷凍保存方法中，優(yōu)選使用選自二甲基亞砜、右旋糖酐、白蛋白以及羥乙基淀粉中的至少I種冷凍保護(hù)劑。優(yōu)選冷凍保存過的干細(xì)胞的成活率為80%以上。另外，本專利技術(shù)涉及白細(xì)胞、單核細(xì)胞或干細(xì)胞，它們是利用上述細(xì)胞分離方法得到的。干細(xì)胞優(yōu)選包含選自⑶34陽性細(xì)胞、⑶133陽性細(xì)胞、⑶34陰性且⑶133陽性細(xì)胞、⑶34陽性且⑶133陽性細(xì)胞、⑶34陽性且⑶133陰性細(xì)胞、⑶45陰性且⑶44陽性且⑶73陽性且⑶90陽性細(xì)胞、⑶45陰性且⑶235a陰性且⑶33陰性且⑶7陰性細(xì)胞、⑶45陽性且⑶133陽性且CDl 17陽性細(xì)胞、CD45陽性且CD 133陰性且CDl 17陽性細(xì)胞、CD45陽性且CD 133陽性且CD 164陽性細(xì)胞、CD45陽性且CD 133陰性且CD 164陽性細(xì)胞、以及CD45陰性且⑶309陽性細(xì)胞中的任一細(xì)胞。白細(xì)胞優(yōu)選包含⑶45陽性且⑶164陽性細(xì)胞、或⑶45陽性且⑶117陽性細(xì)胞。根據(jù)本專利技術(shù)，能夠從以全血、骨髓、臍帶血、月經(jīng)血、組織提取物為代表的體液，簡便且迅速地在不易引起堵塞、壓力上升的情況下有效率地分離白細(xì)胞或單核細(xì)胞。如果使用本專利技術(shù)的分離材和細(xì)胞分離方法，則與以往報告的方案相比，具有不易引起堵塞，而且白細(xì)胞、單核細(xì)胞的回收率高的多方面的優(yōu)點。進(jìn)而，該技術(shù)也可以在形成白細(xì)胞層(buffy coat)等前處理后使用，但在基本上不進(jìn)行這樣的前處理的情況下也能夠從外周血、臍帶血、骨髓、月經(jīng)血、組織提取物分離白細(xì)胞或單核細(xì)胞。將本專利技術(shù)的分離材填充于容器而得到的過濾器也能夠在用無菌封閉體系進(jìn)行的處理中使用。被回收的含白細(xì)胞的液體或含單核細(xì)胞的液體是含有豐富的造血干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞群，能夠作為用于白血病治療、心肌再生、血管再生等再生醫(yī)療的治療細(xì)胞制備用過濾器而提供。就使用本專利技術(shù)的分離材而得到的白細(xì)胞而言，紅細(xì)胞的混入率極低，即使冷凍保存至使用時，由溶血等引起的影響也非常少。另外，白細(xì)胞被無菌分離，所以也能夠直接擴(kuò)增來制備細(xì)胞。因此，本發(fā)·明的分離材除輸血用制劑制備用途之外，作為用于制備再生醫(yī)療用本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點】

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：佐藤伸彥，塚本彩子，
申請(專利權(quán))人：株式會社鐘化，
類型：
國別省市：