一種用于結(jié)核分枝桿菌感染檢測、臨床治療療效跟蹤和抗結(jié)核疫苗開發(fā)的試劑及其應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種用于結(jié)核分枝桿菌感染檢測、臨床治療療效跟蹤和抗結(jié)核疫苗開發(fā)的試劑。通過γ-干擾素釋放實(shí)驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附方法，公開了一種新型結(jié)核桿菌來源的試劑Rv3006(LPPZ)，包括抗原或多肽及其類似物，所述Rv3006抗原的氨基酸序列從N端到C端如SEQ?ID?NO：1所示。利用本發(fā)明專利技術(shù)試劑能較好地檢測出活動期結(jié)核病人和結(jié)核潛伏感染者；并隨著結(jié)核病患者治療開展和病情緩解，Rv3006特異性免疫應(yīng)答水平降低，表明本發(fā)明專利技術(shù)能較好示蹤結(jié)核病人的臨床治療情況。因而，本發(fā)明專利技術(shù)具有較好的臨床應(yīng)用前景；此外，本發(fā)明專利技術(shù)試劑對小鼠感染結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)有毒株H37Rv具有保護(hù)作用，因而具有較好的抗結(jié)核疫苗的開發(fā)前景。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
—種用于結(jié)核分枝桿菌感染檢測、臨床治療療效跟蹤和抗結(jié)核疫苗開發(fā)的試劑及其應(yīng)用
本專利技術(shù)屬于生物醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域，具體涉及一種用于結(jié)核分枝桿菌感染檢測、臨床治療療效跟蹤和抗結(jié)核疫苗開發(fā)的試劑及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
結(jié)核病是我國，同時(shí)也是全球三大傳染性疾病之一，2013年，世界衛(wèi)生組織(WHO)估測中國結(jié)核病總病例約140萬人，占全球總病例中的12%，僅次于印度位居全球第二，結(jié)核病嚴(yán)重阻礙我國經(jīng)濟(jì)和社會發(fā)展。現(xiàn)階段，結(jié)核病的診斷、預(yù)后和抗結(jié)核疫苗開發(fā)仍然面臨巨大挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)的結(jié)核菌素皮試試驗(yàn)(TST)、結(jié)核菌痰涂片或結(jié)核菌痰培養(yǎng)等診斷方法的特異性或敏感性較低，有待改進(jìn)。免疫學(xué)檢測方法是現(xiàn)階段診斷結(jié)核分枝桿菌感染的重要輔助手段之一，其中以抗原特異性Y-干擾素的釋放實(shí)驗(yàn)(IGRA)為主。現(xiàn)有的商用試劑盒有T-SP0T.TB和QuantiFERON-TB Gold In-Tube (QFT-1T)。其中，T-SP0T.TB 使用的抗原是ESAT-6 和 CFP-10，而QFT-1T使用的抗原是ESAT-6、CFP-10和TB7.7。這些抗原都由結(jié)核分枝桿菌特異性的RD區(qū)(RegionofDifference)基因編碼,能較好地避免接種卡介苗(BCG)的干擾。但是，現(xiàn)有研究表明ESAT-6，CFP-1O和TB7.7主要表達(dá)于結(jié)核分枝桿菌的早期感染階段，而且其他非結(jié)核分枝桿菌類的M.marinum, M.kansasii, M.szulgai或Μ.gordonae等也表達(dá)ESAT-6，CFP-10或TB7.7，所以當(dāng)患者感染此類細(xì)菌時(shí)會出現(xiàn)假陽性結(jié)果。而且，研究表明我國人群存在較嚴(yán)重的非結(jié)核分枝桿菌感染情況，所以T-SP0T.TB和QFT-1T的結(jié)核病診斷價(jià)值在我國不理想，表現(xiàn)為其診斷的敏感性和特異性均介于80% — 90%之間。同時(shí)，特異性免疫學(xué)檢測在結(jié)核病的臨床治療療效跟蹤中的尚未得到廣泛應(yīng)用。研究表明，篩選新的T細(xì)胞反應(yīng)性抗原在結(jié)核病的診斷、預(yù)后和疫苗開發(fā)中具有重要意義。人體感染結(jié)核分枝菌后，體內(nèi)會生成結(jié)核分枝桿菌特異性和記憶性T細(xì)胞。抗原特異性T細(xì)胞不僅在結(jié)核病的診斷中具有重要意義，在臨床抗結(jié)核治療病程中，隨著患者體內(nèi)結(jié)核分枝桿菌荷載量的下降或消失，體內(nèi)的抗原特異性T細(xì)胞大量凋亡而進(jìn)入收縮期，只保留少數(shù)抗原特異性的記憶性T細(xì)胞，因而，體外用相同抗原刺激不同治療階段的患者T細(xì)胞時(shí)，分泌細(xì)胞因子的細(xì)胞數(shù)量以及細(xì)胞因子的分泌量與治療前相比都會下降，并與疾病進(jìn)程相一致，因而具有較好的臨床預(yù)后價(jià)值。同時(shí)，與結(jié)核分枝桿菌毒性株中特有的RD區(qū)抗原相比，BCG表達(dá)的抗原安全性更高。因而具有更好的亞單位疫苗或重組疫苗的開發(fā)價(jià)值。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù) 要解決的技術(shù)問題之一是提供一種新的用于結(jié)核分枝桿菌感染檢測、臨床治療療效跟蹤和抗結(jié)核疫苗開發(fā)的試劑。本專利技術(shù)要解決的技術(shù)問題之二是提供上述試劑的用途。本專利技術(shù)的內(nèi)容之一是提供一種用于結(jié)核分枝桿菌感染檢測、臨床治療療效跟蹤和抗結(jié)核疫苗開發(fā)的試劑，包括Rv3006抗原或多肽或其類似物；所述Rv3006抗原的氨基酸序列從N端到C端如下:MWTTRLVRSGLAALCAAVLVSSGCARFNDAQSQPFTTEPELRPQPSSTPPPPPPLPPVPFPKECPAPGVMQGCLESTSGLIMGIDSKTALVAERITGAVEEISISAEPKVKTVIPVDPAGDGGLMDIVLSPTYSQDRLMYAYISTPTDNRVVRVAD⑶IPKDILTGIPKGAAGNTGALIFTSPTTLVVMTGDAGDPALAADPQSLAGKVLRIEQPTTIGQTPPTTALSGIGSGGGLCIDPVDGSLYVADRTPTADRLQRITKNSEVSTVWTWPDKPGVAGCAAMDGTVLVNLINTKLTVAVRLAPSTGAVTGEPDVVRKDTHAHAWALRMSPDGNVWGATVNKTAGDAEKLDDVVFPLFPQGGGFPRNNDDKT,如SEQ ID NO:1 所示；所述多肽為一種氨基酸聚合物，其長度包含但不限于20個(gè)氨基酸殘基；所述其類似物為與其同源性在75%以上的多肽及經(jīng)過天然或人工修飾后的氨基酸聚合物。所述多肽為編號LPPZ0-LPPZ35的氨基酸聚合物，其氨基酸順序從N端到C端列于下:LPPZO:MWTTRLVRSG LAALCAAVLV,如 SEQ ID NO: 2 所示；LPPZl:LAALCAAVLV SSGCARFNDA,如 SEQ ID NO: 3 所示；LPPZ2:SSGCARFNDA QSQPFTTEPE,如 SEQ ID NO: 4 所示；LPPZ3:QSQPFTTEPE LRPQPSSTPP,如 SEQ ID NO: 5 所示；LPPZ4:LRPQP SSTPP PPPPLPPVPF,如 SEQ ID NO: 6 所示；LPPZ5:PPPPLPPVPF PKECPAPGVM,如 SEQ ID NO: 7 所示；LPPZ6:PKECPAPGVM QGCLESTSGL,如 SEQ ID NO: 8 所示；LPPZ7:QGCLESTSGL IMGIDSKTAL,如 SEQ ID NO: 9 所示；LPPZ8:IMGIDSKTAL VAERITGAVE,如 SEQ ID NO: 10 所示；LPPZ9:VAERITGAVE EISISAEPKV,如 SEQ ID NO: 11 所示；LPPZlO:EISISAEPKV KTVIPVDPAG,如 SEQ ID NO: 12 所示；LPPZll:KTVIPVDPAG DGGLMDIVLS,如 SEQ ID NO: 13 所示；LPPZ12:DGGLMDIVLS PTYSQDRLMY,如 SEQ ID NO: 14 所示；LPPZ13:PTYSQDRLMY AYISTPTDNR,如 SEQ ID NO: 15 所示；LPPZ14:AYISTPTDNR WRVAD⑶IP，如 SEQ ID NO: 16 所示；LPPZ15:WRVAD⑶IP KDILTGIPKG,如 SEQ ID NO: 17 所示；LPPZ16:KDILTGIPKG AAGNTGALIF,如 SEQ ID NO: 18 所示。LPPZ17:AAGNTGALIF TSPTTLVVMT,如 SEQ ID NO: 19 所示；LPPZ18:TSPTTLVVMT GDAGDPALAA,如 SEQ ID NO:20 所示；LPPZ19:GDAGDPALAA DPQSLAGKVL,如 SEQ ID NO: 21 所示；LPPZ20:DPQSLAGKVL RIEQPTTIGQ,如 SEQ ID NO: 22 所示；LPPZ21:RIEQPTTIGQ TPPTTALSGI，如 SEQ ID NO: 23 所示；LPPZ22:TPPTTALSGI GSGGGLCIDP,如 SEQ ID NO: 24 所示；LPPZ23:GSGGGLCIDP VDGSLYVADR,如 SEQ ID NO: 25 所示；LPPZ24:VDGSLYVADR TPTADRLQRI，如 SEQ ID NO: 26 所示；LPPZ25:TPTADRLQRI TKN本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種用于結(jié)核分枝桿菌感染檢測、臨床治療療效跟蹤和抗結(jié)核疫苗開發(fā)的試劑，包括Rv3006抗原或多肽或其類似物；所述Rv3006抗原的氨基酸序列從N端到C端如下：MWTTRLVRSGLAALCAAVLVSSGCARFNDAQSQPFTTEPELRPQPSSTPPPPPPLPPVPFPKECPAPGVMQGCLESTSGLIMGIDSKTALVAERITGAVEEISISAEPKVKTVIPVDPAGDGGLMDIVLSPTYSQDRLMYAYISTPTDNRVVRVADGDIPKDILTGIPKGAAGNTGALIFTSPTTLVVMTGDAGDPALAADPQSLAGKVLRIEQPTTIGQTPPTTALSGIGSGGGLCIDPVDGSLYVADRTPTADRLQRITKNSEVSTVWTWPDKPGVAGCAAMDGTVLVNLINTKLTVAVRLAPSTGAVTGEPDVVRKDTHAHAWALRMSPDGNVWGATVNKTAGDAEKLDDVVFPLFPQGGGFPRNNDDKT，如SEQ?ID?NO:1所示；所述多肽為一種氨基酸聚合物，其長度約為20個(gè)氨基酸殘基；所述其類似物為與其同源性在75％以上的多肽及經(jīng)過天然或人工修飾后的氨基酸聚合物。...

【技術(shù)特征摘要】
1.一種用于結(jié)核分枝桿菌感染檢測、臨床治療療效跟蹤和抗結(jié)核疫苗開發(fā)的試劑，包括RV3006抗原或多肽或其類似物；所述RV3006抗原的氨基酸序列從N端到C端如下:MffTTRLVRSGLAALCAAVLVSSGCARFNDAQSQPFTTEPELRPQPSSTPPPPPPLPPVPFPKECPAPGVMQGCLESTSGLIMGIDSKTALVAERITGAVEEISISAEPKVKTVIPVDPAGDGGLMDIVLSPTYSQDRLMYAYISTPTDNRWRVAD⑶IPKDILTGIPKGAAGNTGALIFTSPTTLVVMTGDAGDPALAADPQSLAGKVLRIEQPTTIGQTPPTTALSGIGSGGGLCIDPVDGSLYVADRTPTADRLQRITKNSEVSTVWTWPDKPGVAGCAAMDGTVLVNLINTKLTVAVRLAPSTGAVTGEPDVVRKDTHAHAWALRMSPDGNVWGATVNKTAGDAEKLDDVVFPLFPQGGGFPRNNDDKT，如 SEQID NO:1 所示； 所述多肽為一種氨基酸聚合物，其長度約為20個(gè)氨基酸殘基；所述其類似物為與其同源性在75%以上的多肽及經(jīng)過天然或人工修飾后的氨基酸聚合物。2.如權(quán)利要求1所述的試劑，其特征在于，所述多肽為編號LPPZ0-LPPZ35的氨基酸聚合物，其氨基酸順序從N端到C端列于下:LPPZO:MWTTRLVRSG LAALCAAVLV,如 SEQ ID NO: 2 所示；LPPZl:LAALCAAVLV SSGCARFNDAjn SEQ ID NO:3 所示；LPPZ2:SSGCARFNDA QSQPFTTEPE,如 SEQ ID NO: 4 所示；LPPZ3:QSQPFTTEPE LRPQPSSTPP，如 SEQ ID NO: 5 所示； LPPZ4:LRPQPSSTPP PPPPLPPVPF,如 SEQ ID NO: 6 所示；LPPZ5:PPPPLPPVPF PKECPAPGVM,如 SEQ ID NO: 7 所示；LPPZ6:PKECPAPGVM QGCLESTSGL,如 SEQ ID NO: 8 所示；LPPZ7: QGCLESTSGL MGIDSKTALjn SEQ ID NO: 9 所示；LPPZ8:IMGIDSKTAL VAERITGAVE,如 SEQ ID NO: 10 所示；LPPZ9:VAERITGAVE EISISAEPKV,如 SEQ ID NO: 11 所示；LPPZlO:EISISAEPKV KTVIPVDPAG,如 SEQ ID NO: 12 所示；LPPZll:KTVIPVDPAG DGGLMDIVLS,如 SEQ ID NO: 13 所示；LPPZ12:DGGLMDIVLS PTYSQDRLMY,如 SEQ ID NO: 14 所示；LPPZ13:PTYSQDRLMY AYISTPTDNR,如 SEQ ID NO: 15 所示；LPPZ14:AYISTPTDNR WRVAD⑶IP，如 SEQ ID NO: 16 所示；LPPZ15:VVRVAD⑶IP KDILTGIPKG,如 SEQ ID NO: 17 所示；LPPZ16:KDILTGIPKG AAGNTGALIF,如 SEQ ID NO: 18 所示...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：肖洋炯，王穎，沈浩，王慧宇，田兆峰，賴允鑫，
申請(專利權(quán))人：上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院，
類型：發(fā)明
國別省市：上海;31