本發明專利技術涉及醫藥合成領域，公開了一種合成西那普肽的方法。本發明專利技術所述方法按照西那普肽主鏈C端至N端的氨基酸順序，交替合成Lys和(Leu)4，最終獲得西那普肽。本發明專利技術所述方法調整西那普肽的合成工藝，以較簡便的工藝步驟將西那普肽的總收率提高了一個階段，且能夠保證純度在較高的水平，同時嚴格控制了最大單一雜質含量，相比現有技術更加具有實用價值和應用前景。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及醫藥合成領域，具體涉及。
技術介紹
西那普肽是一種人工設計的21肽，于2012年3月被美國FDA批準上市，臨床用于 治療新生兒呼吸窘迫綜合征，其氨基酸肽序如下：H-Lys1-Leu2-Leu3-Leu4-Leu5-Lys6-Leu7-Leu8-Leu9-Leu10-Lys11-Leu12-Leu13-Leu14-Leu15-Lys16-Leu17-Leu18-Leu19-Leu20-Lys21-〇H 新生兒呼吸窘迫綜合征，又稱新生兒肺透明膜病，指新生兒出生后不久即出現進 行性呼吸困難和呼吸衰竭等癥狀，主要是由于缺乏肺泡表面活性物質所引起，導致肺泡進 行性萎陷，患兒于生后4~12小時內出現進行性呼吸困難、呻吟、發紺、吸氣三凹征，嚴重者 發生呼吸衰竭。發病率與胎齡有關，胎齡越小，發病率越高，體重越輕病死率越高。 現有關于西那普肽的合成方法國內外均有報道。美國專利US5260273采用基因工 程進行制備，該方法工藝成本較高且繁瑣。限制了西那普肽的生產效率。為此，我國專利 CN102850440A以及CN104098656A均公開了一種西那普肽的合成方法，以此降低成本和工 藝繁瑣程度。其中CN104098656A公開的是按照西那普肽C端到N端的肽序逐一合成的技 術方案，但是這種合成策略一方面周期長，另一方面總收率較低，為47. 9% ;CN102850440A 公開了一種片段合成策略，但是根據其記載的技術方案合成的多肽和最終的西那普肽并不 一致，而且其總收率更低，僅為40%。 不同的合成策略對最終產品的純度、雜質含量和收率有很大影響，如何在保證純 度和收率的前提下，盡可能的降低合成工藝的復雜程度、雜質以及縮短合成周期，是當下技 術人員的研宄重點。
技術實現思路
有鑒于此，本專利技術的目的在于提供，使得本專利技術所述方 法能夠顯著提高西那普肽合成的總收率，并保證西那普肽具有較高純度和較低的單一雜質 含量，同時縮短合成周期。 為實現上述目的，本專利技術提供如下技術方案： ，包括以下步驟： 步驟1、將保護的LyS與樹脂偶聯，獲得在Lys的N端及其側鏈上偶聯有保護基、在 其C端偶聯有樹脂的肽樹脂1 ; 步驟2、將在SEQIDNO: 1所示氨基酸序列N端偶聯有保護基的多肽片段1的C 端與肽樹脂1的N端進行偶聯，而后將保護的Lys再與片段1的N端偶聯，獲得在SEQID NO: 2所示氨基酸序列N端、Lys側鏈上偶聯有保護基，在C端偶聯有樹脂的肽樹脂2 ; 步驟3、將在SEQIDNO: 1所示氨基酸序列N端偶聯有保護基的多肽片段1的C 端與肽樹脂2的N端進行偶聯，而后將保護的Lys再與片段1的N端偶聯，獲得在SEQID NO: 3所示氨基酸序列N端、Lys側鏈上偶聯有保護基，在C端偶聯有樹脂的肽樹脂3 ; 步驟4、將在SEQIDNO: 1所示氨基酸序列N端偶聯有保護基的多肽片段1的C 端與肽樹脂3的N端進行偶聯，而后將保護的Lys再與片段1的N端偶聯，獲得在SEQID NO: 4所示氨基酸序列N端、Lys側鏈上偶聯有保護基，在C端偶聯有樹脂的肽樹脂4 ; 步驟5、將在SEQIDNO: 1所示氨基酸序列N端偶聯有保護基的多肽片段1的C 端與肽樹脂4的N端進行偶聯，而后將保護的Lys再與片段1的N端偶聯，獲得在SEQID NO: 5所示氨基酸序列N端、Lys側鏈上偶聯有保護基，在C端偶聯有樹脂的西那普肽樹脂； 步驟6、西那普肽樹脂酸解脫除C端樹脂和所有保護基得到西那普肽粗品，粗品純 化轉醋酸鹽，獲得西那普肽成品。 西那普肽主鏈氨基酸有21個，采用片段方法進行合成存在很多種形式，但只有合 適的片段方法才能保證較高的西那普肽的總收率以及純度，同時又能降低雜質的產生。為 此，申請人根據長期的試驗研宄，提出了本專利技術所述方法來制備西那普肽，在保證純度的前 提下，進一步提高總收率以及降低合成方法的雜質的產生。 在本專利技術所述方法中，按照西那普肽主鏈C端至N端的氨基酸順序交替合成Lys 和（Leu) 4，以西那普肽主鏈N端到C端的氨基酸順序編號，如下式： H-Lys1-Leu2-Leu3-Leu4-Leu5-Lys6-Leu7-Leu8-Leu9-Leu10-Lys11-Leu12-Leu13-Leu14-Leu15-Lys16-Leu17-Leu18-Leu19-Leu20-Lys21-〇H SEQIDN0:1所示氨基酸序列即為上式中編號2-5、7-10、12-15、17-20的多肽序 列，SEQIDN0:2所示氨基酸序列即為上式中編號16-21的多肽序列，SEQIDN0:3所示氨 基酸序列即為上式中編號11-21的多肽序列，SEQIDN0:4所示氨基酸序列即為上式中編 號6-21的多肽序列，SEQIDN0:5所示氨基酸序列即為上式中編號1-21的多肽序列。 本專利技術合成的肽樹脂2是在SEQIDNO: 2所示氨基酸序列基礎上，在其N端、Lys 側鏈上分別偶聯有保護基，在其C端偶聯有樹脂；合成的肽樹脂3是在SEQIDNO: 3所示氨 基酸序列基礎上，在其N端、Lys側鏈上分別偶聯有保護基，在其C端偶聯有樹脂；合成的肽 樹脂4是在SEQIDNO:4所示氨基酸序列基礎上，在在其N端、Lys側鏈上分別偶聯有保護 基，在其C端偶聯有樹脂；合成的西那普肽樹脂是在SEQIDNO: 5所示氨基酸序列基礎上， 在其N端、Lys側鏈上分別偶聯有保護基，在其C端偶聯有樹脂； 本專利技術所述保護基是在氨基酸合成領域常用的保護氨基酸主鏈以及側鏈上氨基、 羧基等干擾合成的基團的保護基團，防止氨基、羧基等在制備目標產物過程中發生反應，生 成雜質，而被保護基保護的氨基酸稱為保護氨基酸，如保護的Lys。對于本專利技術中需要保護 側鏈的氨基酸來說，本領域技術人員公知其側鏈結構以及知曉采用常用保護基來保護氨基 酸側鏈上的氨基、羧基等基團，作為優選，本專利技術以Fmoc保護基保護Lys以及（1^11)4的N 端，以Boc保護基保護Lys的側鏈。 在合成肽樹脂1中，保護的Lys與樹脂偶聯所形成的肽樹脂取代值優選為0. 2~ 1. 0mmol/g肽樹脂，更優選的取代值為0. 3~0. 5mmol/g肽樹脂。 本專利技術偶聯時，每個保護氨基酸或多肽片段用量優選為肽樹脂摩爾數的1-6倍， 更優選為2. 5-3. 5倍；所述偶聯反應時間優選為60~300分鐘，更優選為100~140分鐘。 在偶聯中，由于每個氨基酸N端都有保護基，因此需要先脫除N端保護基再偶聯， 這對本領域技術人員來說是公知常識。本專利技術優選用PIP/DMF(哌啶/N，N-二甲基甲酰胺） 混合溶液脫除N端保護基，混合溶液中含哌啶為10~30% (V)，其余為DMF。去N端保護基 試劑的用量為每克肽樹脂5~15mL，更優選的為每克肽樹脂8~12mL;去N端保護基時間 為10~60分鐘，優選的為15~25分鐘。 需要說明的是，本專利技術所述肽樹脂指任意個數保護氨基酸或氨基酸按照西那普肽 氨基酸順序和樹脂相連接形成的肽樹脂，這其中不僅包括獨立權利要求中的肽樹脂1-4、西 那普肽樹脂，還包括在合成肽樹脂1-4、西那普肽樹脂過程中形成的肽樹脂。 作為優選，所述樹脂為Trityl-Cl(三苯甲基氯）類樹脂或羥基類樹脂。更優選地， 所本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種合成西那普肽的方法，其特征在于，包括以下步驟：步驟1、將保護的Lys與樹脂偶聯，獲得在Lys的N端及其側鏈上偶聯有保護基、在其C端偶聯有樹脂的肽樹脂1；步驟2、將在SEQ?ID?NO:1所示氨基酸序列N端偶聯有保護基的多肽片段1的C端與肽樹脂1的N端進行偶聯，而后將保護的Lys再與片段1的N端偶聯，獲得在SEQ?ID?NO:2所示氨基酸序列N端、Lys側鏈上偶聯有保護基，在C端偶聯有樹脂的肽樹脂2；步驟3、將在SEQ?ID?NO:1所示氨基酸序列N端偶聯有保護基的多肽片段1的C端與肽樹脂2的N端進行偶聯，而后將保護的Lys再與片段1的N端偶聯，獲得在SEQ?ID?NO:3所示氨基酸序列N端、Lys側鏈上偶聯有保護基，在C端偶聯有樹脂的肽樹脂3；步驟4、將在SEQ?ID?NO:1所示氨基酸序列N端偶聯有保護基的多肽片段1的C端與肽樹脂3的N端進行偶聯，而后將保護的Lys再與片段1的N端偶聯，獲得在SEQ?ID?NO:4所示氨基酸序列N端、Lys側鏈上偶聯有保護基，在C端偶聯有樹脂的肽樹脂4；步驟5、將在SEQ?ID?NO:1所示氨基酸序列N端偶聯有保護基的多肽片段1的C端與肽樹脂4的N端進行偶聯，而后將保護的Lys再與片段1的N端偶聯，獲得在SEQ?ID?NO:5所示氨基酸序列N端、Lys側鏈上偶聯有保護基，在C端偶聯有樹脂的西那普肽樹脂；步驟6、西那普肽樹脂酸解脫除C端樹脂和所有保護基得到西那普肽粗品，粗品純化轉醋酸鹽，獲得西那普肽成品。...
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：文永均，郭德文，董華建，曾德志，
申請(專利權)人：成都圣諾生物科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：四川;51
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