痛寧凝膠指紋圖譜的建立方法及其指紋圖譜技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種痛寧凝膠指紋圖譜的建立方法，包括以下步驟：步驟1，利用醇溶液對痛寧凝膠樣品進行提取，獲得樣品溶液；利用相同的醇溶液溶解5?O?甲基維斯阿米醇苷以制備參照物溶液；步驟2，對樣品溶液和參照物溶液進行高效液相色譜分析；分別精密吸取樣品溶液與參照物溶液各10μl，注入液相色譜儀測定，記錄60min圖譜。利用本發(fā)明專利技術(shù)所提供的方法所建立的痛寧凝膠指紋圖譜，能有效地表征痛寧凝膠藥物的質(zhì)量，有利于全面監(jiān)控藥材的質(zhì)量。同時，本發(fā)明專利技術(shù)方法具有方法簡便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點。該方法可快速、準確地鑒別產(chǎn)品的真?zhèn)蝺?yōu)劣。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)屬于中藥質(zhì)量鑒定
，特別是涉及痛寧凝膠指紋圖譜的建立方法，以及利用該方法建立的痛寧凝膠指紋圖譜。
技術(shù)介紹
指紋圖譜是指某些復雜物質(zhì)，比如中藥，某種生物體或某種組織或細胞的DNA，蛋白質(zhì)經(jīng)適當處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標示其化學特征的色譜圖或光譜圖。中藥指紋圖譜是一種綜合的，可量化的鑒定手段，它是建立在中藥化學成分系統(tǒng)研究的基礎上，主要用于評價中藥材以及中藥制劑半成品質(zhì)量的真實性、優(yōu)良性和穩(wěn)定性。中藥及其制劑均為多組分復雜體系，因此評價其質(zhì)量應采用與之相適應的，能提供豐富鑒別信息的檢測方法，建立中藥指紋圖譜將能較為全面地反映中藥及其制劑中所含化學成分的種類與數(shù)量，進而對藥品質(zhì)量進行整體描述和評價。中藥指紋圖譜技術(shù)已涉及眾多方法，包括薄層掃描(TLCS)、高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法(GC)和高效毛細管電泳法(HPCE)等色譜法以及紫外光譜法(UV)、紅外光譜法(IR)、質(zhì)譜法(MS)、核磁共振法(NMR)和X—射線衍射法等光譜法。其中色譜方法為主流方法，尤其是HPLC、TLCS和GC已成為公認的三種常規(guī)分析手段。由于HPLC具有分離效能高、選擇性高、檢測靈敏度高、分析速度快、應用范圍廣等特點。中藥成分絕大多數(shù)可在高效液相色譜儀上進行分析檢測，且積累較豐富的應用經(jīng)驗。因此高效液相色譜法已成為中藥指紋圖譜技術(shù)的首選方法。隨著HPLC—MS和GC—MS等聯(lián)用技術(shù)的應用，中藥指紋圖譜技術(shù)r>更趨完善。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的第一目的是提供一種痛寧凝膠指紋圖譜的建立方法。本專利技術(shù)的第二目的是提供一種痛寧凝膠指紋圖譜。為了實現(xiàn)上述第一目的，本專利技術(shù)提供一種痛寧凝膠指紋圖譜的建立方法，其包括以下步驟：步驟1，利用醇溶液對痛寧凝膠樣品進行提取，獲得樣品溶液；利用相同的醇溶液溶解5-O-甲基維斯阿米醇苷以制備參照物溶液；步驟2，對樣品溶液和參照物溶液進行高效液相色譜分析；分別精密吸取樣品溶液與參照物溶液各10μl，注入液相色譜儀測定，記錄60min圖譜；高效液相色譜條件如下：流動相A和B分別為，乙腈-0.1v/v％磷酸溶液、乙腈-水、乙腈-0.1v/v％甲酸溶液、乙腈-含0.1v/v％甲酸與10mM乙酸銨的水、乙腈-0.02v/v％三乙胺溶液；優(yōu)選的，以乙腈為流動相A，以0.1v/v％磷酸溶液為流動相B。流速為0.8ml/min～1.2ml/min；優(yōu)選的，流速為1.0ml/min。柱溫為25℃～35℃；優(yōu)選的，柱溫為30℃。檢測波長為230nm～300nm；優(yōu)選的，檢測波長為240nm。本專利技術(shù)如上所述的痛寧凝膠指紋圖譜的建立方法，優(yōu)選的，在步驟1中，所述醇溶液為20～80v/v％的甲醇，或者為20～80v/v％的乙醇。更優(yōu)選的，所述醇溶液為70v/v％的甲醇。11.本專利技術(shù)如上所述的痛寧凝膠指紋圖譜的建立方法，優(yōu)選的，步驟1的具體過程為：取痛寧凝膠樣品1.5g，精密稱定，精密加入70v/v％甲醇25ml，超聲提取30min，冷卻，離心，取上清液，即得樣品溶液；取5-O-甲基維斯阿米醇苷適量，加70v/v％甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得參照物溶液。本專利技術(shù)如上所述的痛寧凝膠指紋圖譜的建立方法，優(yōu)選的，高效液相色譜條件如下：以乙腈為流動相A，以0.1v/v％磷酸溶液為流動相B；流速為1.0ml/min；柱溫為30℃；檢測波長為240nm。為了實現(xiàn)上述第一目的，本專利技術(shù)提供一種痛寧凝膠指紋圖譜，其特征峰為5號峰升麻素苷、8號峰5-O-甲基維斯阿米醇苷和12號峰延胡索乙素，其保留時間分別為19.5min、28.1min、31.3min。進一步，痛寧凝膠指紋圖譜還包括1號峰、2號峰、3號峰、4號峰、6號峰、7號峰、9號峰、10號峰、11號峰、13號峰、14號峰、15號峰、16號峰、17號峰和18號峰，其保留時間分別為10.2min、13.2min、14.0min、16.9min、26.1min、27.4min、28.7min、29.5min、30.1min、38.3min、44.6min、50.5min、50.8min、53.8min、57.6min。本專利技術(shù)的有益效果是：1、用本專利技術(shù)所提供的方法所建立的痛寧凝膠指紋圖譜，能有效地表征痛寧凝膠藥物的質(zhì)量，有利于全面監(jiān)控藥材的質(zhì)量。2、指紋圖譜注重各個構(gòu)成指紋特征峰的前后順序和相互關(guān)系，注重整體面貌特征，既避免了因測定個別化學成分而判定痛寧凝膠整體質(zhì)量的片面性，又減少了為質(zhì)量達標而認為處理的可能性。3、本專利技術(shù)方法具有方法簡便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點。4、該方法可快速、準確地鑒別產(chǎn)品的真?zhèn)蝺?yōu)劣。附圖說明圖1為本專利技術(shù)檢測波長的選擇試驗所獲得的色譜圖；圖2為本專利技術(shù)流動相的選擇試驗所獲得的色譜圖；圖3為本專利技術(shù)柱溫的考察試驗所獲得的色譜圖；圖4為本專利技術(shù)流速的考察試驗所獲得的色譜圖；圖5為本專利技術(shù)不同色譜柱的考察試驗所獲得的色譜圖；圖6為本專利技術(shù)滯后峰測試試驗所獲得的色譜圖；圖7為本專利技術(shù)空白溶劑測試試驗所獲得的色譜圖；圖8為本專利技術(shù)色譜峰指認試驗所獲得的色譜圖；圖9為本專利技術(shù)藥材相關(guān)性考察試驗所獲得的色譜圖；圖10為本專利技術(shù)痛寧凝膠指紋圖譜生成試驗所獲得的色譜圖；圖11為本專利技術(shù)指紋圖譜的獲得試驗所獲得的色譜圖。具體實施方式下面將結(jié)合實施例對本專利技術(shù)的實施方案進行詳細描述，實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。一種痛寧凝膠指紋圖譜的建立方法，其包括以下步驟：步驟1，取痛寧凝膠樣品1.5g，精密稱定，精密加入70v/v％甲醇25ml，超聲提取30min，冷卻，離心，取上清液，即得樣品溶液；取5-O-甲基維斯阿米醇苷適量，加70v/v％甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得參照物溶液。所述醇溶液為20～80v/v％的甲醇，或者為20～80v/v％的甲醇乙醇。優(yōu)選的，所述醇溶液為70v/v％的甲醇。步驟2，對樣品溶液和參照物溶液進行高效液相色譜分析；分別精密吸取樣品溶液與參照物溶液各10μl，注入液相色譜儀測定，記錄60min圖譜；高效液相色譜條件如下：流動相A和B分別為，乙腈-0.1v/v％磷酸溶液、乙腈-水、乙腈-0.1v/v％甲酸溶液、乙腈-含0.1v/v％甲酸與10mM乙酸銨的水、乙腈-0.02v/v％三乙胺溶液；優(yōu)選的，以乙腈為流動相A，以0.1v/v％本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種痛寧凝膠指紋圖譜的建立方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：步驟1，利用醇溶液對痛寧凝膠樣品進行提取，獲得樣品溶液；利用相同的醇溶液溶解5?O?甲基維斯阿米醇苷以制備參照物溶液；步驟2，對樣品溶液和參照物溶液進行高效液相色譜分析；分別精密吸取樣品溶液與參照物溶液各10μl，注入液相色譜儀測定，記錄60min圖譜；高效液相色譜條件如下：流動相A和B分別為，乙腈?0.1v/v％磷酸溶液、乙腈?水、乙腈?0.1v/v％甲酸溶液、乙腈?含0.1v/v％甲酸與10mM乙酸銨的水、乙腈?0.02v/v％三乙胺溶液；流速為0.8ml/min～1.2ml/min；柱溫為25℃～35℃；檢測波長為230nm～300nm。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種痛寧凝膠指紋圖譜的建立方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
步驟1，利用醇溶液對痛寧凝膠樣品進行提取，獲得樣品溶液；利用相同的醇溶液溶解
5-O-甲基維斯阿米醇苷以制備參照物溶液；
步驟2，對樣品溶液和參照物溶液進行高效液相色譜分析；分別精密吸取樣品溶液與參
照物溶液各10μl，注入液相色譜儀測定，記錄60min圖譜；
高效液相色譜條件如下：
流動相A和B分別為，乙腈-0.1v/v％磷酸溶液、乙腈-水、乙腈-0.1v/v％甲酸溶液、乙
腈-含0.1v/v％甲酸與10mM乙酸銨的水、乙腈-0.02v/v％三乙胺溶液；
流速為0.8ml/min～1.2ml/min；
柱溫為25℃～35℃；
檢測波長為230nm～300nm。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的痛寧凝膠指紋圖譜的建立方法，其特征在于，在步驟1中，所述
醇溶液為20～80v/v％的甲醇，或者為20～80v/v％的乙醇；步驟1的具體過程為：取痛寧凝
膠樣品1.5g，精密稱定，精密加入70v/v％甲醇25ml，超聲提取30min，冷卻，離心，取上清液，
即得樣品溶液；取5-O-甲基維斯阿米醇苷適量，加70v/v％甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即
得參照物溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的痛寧凝膠指紋圖譜的建立方法，其特征在于，所述醇溶液為
70v/v％的甲醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的痛寧凝膠指紋圖譜的...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：蕭偉，秦建平，潘有智，朗悅，林夏，李家春，黃文哲，王振中，
申請(專利權(quán))人：江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：江蘇;32