一種癌胚抗原特異性TCR基因修飾的T細胞及其抑癌用途，包括轉錄因子T?bet、Eomes及CEA?TCR的慢病毒載體。本發明專利技術的癌胚抗原特異性TCR基因修飾的T細胞及其抑癌用途通過蹄選和克隆腫瘤特異性TCR基因,隨后以之轉染T細胞賦予其抗原特異性,從而獲得基因工程化抗原特異性T細胞,最終將TCR基因轉染T細胞回輸患者體內,重建針對抗原陽性腫瘤的T細胞免疫反應。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及基因修飾細胞及腫瘤治療
，尤其是一種癌胚抗原特異性TCR基因修飾的T細胞及其抑癌用途。
技術介紹
過繼細胞治療(adoptive cell therapy，ACT)是生物治療技術的一種，對自體免疫細胞(主要是T細胞)進行體外擴增，然后將其回輸給腫瘤患者以達到治療目的的方法，被認為是繼手術、放、化療后的第4種治療方式，在臨床治療中受到廣泛應用。過繼細胞治療廣泛應用的主要是：淋巴因子活化的殺傷細胞(1ymphokine activated“11er cell，LAK)，與幾—2聯合治療晚期惡性腫瘤取得了一定療效：腫瘤浸潤淋巴細胞(tumor infiltrating lymphocytes，TIL)，臨床試驗中治療轉移性黑色素瘤取得了較好的效果：細胞因子誘導的殺傷細胞(cytokine induced killer cell，CIK)，目前國內開展較多的臨床試驗，對肝癌、肺癌等腫瘤取得了顯著的效果。但是目前上述三種治療方法均需活化T細胞，T細胞活化需要兩種活化信號，即T細胞表面的TCR-CD3與MHC-1分子結合為活化的第一信號，決定“田胞對腫瘤細胞的殺傷活性”田胞表面的共刺激分子與相應配體結合為活化的第二信號，決定T細胞增殖。但腫瘤細胞、腫瘤微環境可下調MHC、配體分子，從而抑制T細胞對腫瘤細胞的殺傷活性。因此需要可對其進行基因改造。
技術實現思路
本專利技術要解決的技術問題是：為了解決上述
技術介紹
中存在的問題，提供一種改進的癌胚抗原特異性TCR基因修飾的T細胞及其抑癌用途，解決腫瘤細胞、腫瘤微環境可下調MHC、配體分子，從而抑制T細胞對腫瘤細胞的殺傷活性的問題。本專利技術解決其技術問題所采用的技術方案是：一種癌胚抗原特異性TCR基因修飾的T細胞，包括轉錄因子T-bet、Eomes及CEA-TCR的慢病毒載體，所述的CEA-TCR包含TCRα鏈及TCRβ鏈，所述的CEA-TCR TCRα鏈序列為第一序列，所述的CEA-TCR TCRβ鏈序列為第二序列，所述的轉錄因子T-bet的序列為第三序列，所述的轉錄因子Eomes的序列為第四序列。癌胚抗原特異性TCR基因修飾的T細胞的抑癌用途，所述以穩定表達螢火蟲熒光蛋白luciferase的CEA陽性結直腸細胞系W480,HT29作為靶細胞，以穩定表達熒光素酶的CEA陰性的肝癌細胞系HuH7作為對照，效應細胞為慢病毒載體lv-EF1a-TCR-WPRE感染的T細胞，將靶細胞按照密度1X105個/ml接種96孔板中，每孔100ul，按照1:1效靶比將效應細胞加入靶細胞，置于5％CO2,37℃培養箱培養24h，利用熒光素酶檢測系統試劑盒(E4550)檢測孔板中剩余細胞內Luciferase含量，計算殺傷效率，結果表明，表達CEA-TCR的T淋巴細胞對CEA陽性腫瘤細胞具有殺傷作用，而對CEA陰性細胞無殺傷作用；以穩定表達螢火蟲熒光蛋白luciferase的CEA陽性結直腸細胞系W480,HT29作為靶細胞，分別用慢病毒載體lv-EF1a-TCR-WPRE和lv-EF1a-TCR(CEA)-T-bet-Eomes-WPRE感染的T細胞制得效應細胞，將靶細胞按照密度2.5X 105個/m1,5X105個/ml,10X 105個/ml的密度接種96孔板中，每孔100ul，按照10:1,5:1,2.5:1效靶比將效應細胞加入靶細胞，置于5％CO2,37℃培養箱培養6h；利用熒光素酶檢測系統試劑盒(E4550)檢測孔板中剩余細胞內Luciferase含量，計算殺傷效率，結果表明，表達轉錄因子T-bet和Eomes及CEA TCR的T淋巴細胞較未表達轉錄因子T-bet和Eomes及CEA TCR的T淋巴細胞對CEA陽性腫瘤細胞具有更強殺傷作用。本專利技術的有益效果是，本專利技術的癌胚抗原特異性TCR基因修飾的T細胞及其抑癌用途通過蹄選和克隆腫瘤特異性TCR基因,隨后以之轉染T細胞賦予其抗原特異性,從而獲得基因工程化抗原特異性T細胞,最終將TCR基因轉染T細胞回輸患者體內,重建針對抗原陽性腫瘤的T細胞免疫反應。附圖說明下面結合附圖和實施例對本專利技術進一步說明。圖1是本專利技術中質粒lv-EF1a-TCR(CEA)-WPRE設計示意圖。圖2是本專利技術中質粒lv-EF1a-TCR(CEA)-T-bet-Emoes-WPRE設計示意圖。圖3是本專利技術中慢病毒載體lv-EF1a-TCR(CEA)-WPRE和lv-EF1a-TCR(CEA)-T-bet-Eomes-WPRE感染的T細胞制得效應細胞對靶細胞SW480的殺傷效果示意圖。圖4是本專利技術中慢病毒載體lv-EF1a-TCR(CEA)-WPRE和lv-EF1a-TCR(CEA)-T-bet-Eomes-WPRE感染的T細胞制得效應細胞對靶細胞HT29的殺傷效果示意圖。具體實施方式現在結合附圖對本專利技術作進一步詳細的說明。這些附圖均為簡化的示意圖，僅以示意方式說明本專利技術的基本結構，因此其僅顯示與本專利技術有關的構成。圖1、圖2、圖3和圖4所示的癌胚抗原特異性TCR基因修飾的T細胞，包括轉錄因子T-bet、Eomes及CEA-TCR的慢病毒載體，所述的CEA-TCR包含TCRα鏈及TCRβ鏈，所述的CEA-TCR TCRα鏈序列為第一序列，所述的CEA-TCR TCRβ鏈序列為第二序列，所述的轉錄因子T-bet的序列為第三序列，所述的轉錄因子Eomes的序列為第四序列。第一序列:atgtaggacgcccctccggtcacggcatttctgatagtgcatcgacgtgactcacccgccgacacaggaagagggtggagaaccgtctcgggttccaatggctttttcctagtgttttgagggaaagaaacaatctatatatatactcttctaggcgggcgcccccttcccctcaaactcttttttttcctcctctgccaagctttgtttgttgagaaaaaacaaaaaattcgctcctggtaactctctttccgcctccaggggagtccccaacccggaaaaaacccccccccccccccccccaagtttttttaatctaggtaggcccgcggttggaaaactccccccccccccccccctgaagcctcacacagcccagtaactttgctagtacctcttgagtgcaaggtggagaattaagatctggatttgagacggagcacggaacatttcactcaggggaagagctatgaacatgctgactgccagcctgttgagggcagtcatagcctccatctgtgttgtatccagcatggctcagaaggtaactcaagcgcagactgaaatttctgtggtggagaaggaggatgtgaccttggactgtgtgtatgaaacccgtgatactacttattacttattctggtacaagcaaccaccaagtggagaattggttttccttattcgtcggaactcttttgatgagcaaaatgaaataagtggtcggtattcttggaacttccagaa本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種癌胚抗原特異性TCR基因修飾的T細胞，包括轉錄因子T?bet、Eomes及CEA?TCR的慢病毒載體，其特征是：所述的CEA?TCR包含TCRα鏈及TCRβ鏈，所述的CEA?TCRTCRα鏈序列為第一序列，所述的CEA?TCRTCRβ鏈序列為第二序列，所述的轉錄因子T?bet的序列為第三序列，所述的轉錄因子Eomes的序列為第四序列。
【技術特征摘要】
1.一種癌胚抗原特異性TCR基因修飾的T細胞，包括轉錄因子T-bet、Eomes及CEA-TCR的慢病毒載體，其特征是：所述的CEA-TCR包含TCRα鏈及TCRβ鏈，所述的CEA-TCRTCRα鏈序列為第一序列，所述的CEA-TCRTCRβ鏈序列為第二序列，所述的轉錄因子T-bet的序列為第三序列，所述的轉錄因子Eomes的序列為第四序列。2.癌胚抗原特異性TCR基因修飾的T細胞的抑癌用途，其特征是：所述以穩定表達螢火蟲熒光蛋白luciferase的CEA陽性結直腸細胞系W480,HT29作為靶細胞，以穩定表達熒光素酶的CEA陰性的肝癌細胞系HuH7作為對照，效應細胞為慢病毒載體lv-EF1a-TCR-WPRE感染的T細胞，將靶細胞按照密度1X105個/ml接種96孔板中，每孔100ul，按照1:1效靶比將效應細胞加入靶細胞，置于5％CO2,37℃培養箱培養24h，利用熒光素酶檢測系統試劑盒(E4550)檢測孔板中剩余細胞內Luciferas...
【專利技術屬性】
技術研發人員：雷菁，唐小琴，其他發明人請求不公開姓名，
申請(專利權)人：武漢賽云博生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：湖北;42
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