一種脫細胞異種真皮及其制取方法技術

本發明專利技術公開了一種脫細胞異種真皮及其制備方法，其制備方法包括豬真皮片獲取保存以及脫細胞處理，豬真皮片保存時添加有冷凍防護劑，脫細胞處理采用溫和洗滌劑打破細胞。本發明專利技術無需反復凍融，冷凍的過程中添加有冷凍防護劑，減少了對膠原蛋白的生物活性的破壞，有利于創面的盡快恢復；通過核糖核酸酶溶液有效去除殘留核糖核酸，避免了殘留核糖核酸引起不良的反應；通過alpha-半乳糖苷酶溶液有效的去除alpha-半乳糖，減輕甚至避免了alpha-半乳糖引起人體的急性免疫反應；通過在防輻射保護劑里進行電子束端滅菌或者在干冰條件下的γ輻照，滅菌的同時降低了輻射對豬真皮片的損害；通過采用鋁箔里外雙層袋包裝，便于醫生打開使用。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及醫學燒傷及整形專科臨床應用醫用材料領域，具體是指一種脫細胞異種真皮及其制取方法。
技術介紹
眾所周知，在醫學燒傷及整形專科臨床中，嚴重創傷及大面積燒傷患者存在皮膚缺失的巨大創面，在治療中消滅創面需要進行皮膚移植，使用的皮源可以為同種真皮和異種真皮。由于同種真皮來源不足，目前，皮膚移植主要采用異種真皮。使用異種真皮進行皮膚移植存在一個關鍵的技術要點：要在脫細胞時最小限度的損壞真皮基質的三維結構，同時保障膠原蛋白具有充分的生物活性，以提供必要的環境和生長因子促進創面的修復。以公開號為CN103520773A和CN103520772A的專利申請為例，目前對于異種真皮脫細胞處理通常采用的反復凍融達到破壞細胞的目的。反復凍融技術雖然能夠有效的破壞細胞，但是在每次凍融的過程中均會導致膠原蛋白損傷，不利于創面的恢復。
技術實現思路
本專利技術的目的在于：克服現有技術上述缺陷，提供一種脫細胞異種真皮及其制備方法。該種脫細胞異種真皮，在實現脫細胞的同時，避免了反復凍融，能夠最大限度的保障膠原蛋白的生物活性，利于創面的恢復。本專利技術通過下述技術方案實現：一種脫細胞異種真皮制備方法，依次包括以下步驟，步驟A：制取豬真皮片；步驟B：對豬真皮片進行消毒處理；步驟C：使用磷酸鹽緩沖鹽水充分清洗消毒后的豬真皮片；步驟D：將豬真皮片與冷凍防護劑充分混合后保存在凍箱中備用；步驟E：取出冷凍豬真皮片在室溫下融化，然后加入磷酸鹽緩沖鹽水充分清洗豬真皮片；步驟F：加入脫細胞液，將豬真皮片與脫細胞液充分混合以及反應，所述脫細胞液含有溫和洗滌劑；步驟G：吸出脫細胞液，然后加入磷酸鹽緩沖鹽水充分清洗豬真皮片。作為一種優選的方式，所述冷凍防護劑為甘油水溶液或多糖，當冷凍防護劑為甘油水溶液時，甘油的體積百分比濃度為20%或大于等于30%；當冷凍防護劑為多糖時，所述冷凍防護劑為葡聚糖凝膠、蔗糖和天然蜂蜜中的一種或者幾種。作為一種優選的方式，所述步驟D中還添加有乙二胺四乙酸。作為一種優選的方式，所述脫細胞液為4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液，其PH值為8，每升4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液含20毫摩爾4-羥乙基哌嗪乙磺酸，所述溫和洗滌劑為十二烷基聚乙二醇醚、乙基苯基聚乙二醇和脫氧膽酸鈉中的一種或者幾種，當所述溫和洗滌劑為脫氧膽酸鈉時，脫氧膽酸鈉的質量體積百分比溶度為2%。作為一種優選的方式，所述脫細胞液中還添加有乙二胺四乙酸。作為一種優選的方式，所述脫細胞液體積與豬真皮片體積之比為30:1。作為一種優選的方式，步驟G之后還依次具有下列步驟，步驟H：加入核糖核酸酶溶液，并進行充分混合以及反應，所述核糖核酸酶溶液內的核糖核酸酶通過人工重組合成或直接從動物組織提取，所述核糖核酸酶溶液為4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液，每升4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液含20毫摩爾4-羥乙基哌嗪乙磺酸、2.5毫摩爾氯化鎂、0.5毫摩爾氯化鈣以及0.5克核糖核酸酶，其PH值為8，核糖核酸酶溶液體積與豬真皮片體積之比為20:1；步驟I：吸出核糖核酸酶溶液，然后加入磷酸鹽緩沖鹽水充分清洗豬真皮片。作為一種優選的方式，步驟I之后還依次具有下列步驟，步驟J：加入alpha-半乳糖苷酶溶液進行充分混合以及反應，所述alpha-半乳糖苷酶溶液通過檸檬酸鹽緩沖液添加alpha-半乳糖苷酶制得；步驟K：吸出alpha-半乳糖苷酶溶液，然后加入磷酸鹽緩沖鹽水充分清洗豬真皮片。作為一種優選的方式，步驟K之后還依次具有下列步驟，步驟M：加入保存液進行充分混合，保存液為磷酸鹽緩沖鹽水，其內含乙二胺四乙酸以及體積百分比溶度為20%的甘油；步驟N：取出豬真皮片，包裝在鋁箔里外雙層袋中；步驟O：對步驟N中包裝好的鋁箔里外雙層袋進行滅菌處理，所述滅菌處理為在防輻射保護劑里進行電子束滅菌、在干冰條件下的γ輻照滅菌、超臨界二氧化碳處理和環氧乙烷滅菌中的一種。一種脫細胞異種真皮，采用上述方法制得。本專利技術與現有技術相比，具有以下優點及有益效果：（1）本專利技術與反復凍融技術相比，采用溫和洗滌劑打破細胞，無需反復凍融，且在冷凍的過程中添加有冷凍防護劑，有效的阻止了冰晶的生產，減少了對膠原蛋白的生物活性的破壞，有利于創面的盡快恢復；（2）本專利技術通過核糖核酸酶溶液能夠有效的去除殘留的核糖核酸，避免殘留的核糖核酸引起燒傷創面的不良反應；（3）本專利技術通過alpha-半乳糖苷酶溶液能夠有效的去除alpha-半乳糖，減輕甚至避免了alpha-半乳糖引起的人體急性免疫反應，減少了alpha-半乳糖對燒傷創面的負面影響，有利于盡快恢復；（4）本專利技術通過在防輻射保護劑里進行的電子束端滅菌或者在干冰條件下的γ輻照，能夠在滅菌的同時降低了輻射對豬真皮片的損害；（5）本專利技術通過采用鋁箔里外雙層袋包裝豬真皮片，便于醫生在手術臺上打開內袋使用。附圖說明圖1為豬真皮片獲取保存流程圖；圖2為脫細胞處理流程圖；圖3為殘留核糖核酸去除流程圖；圖4為alpha-半乳糖去除流程圖；圖5為脫細胞異種真皮的保存流程圖。具體實施方式為了使本專利技術的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合實施例，對本專利技術進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本專利技術，并不用于限定本專利技術。本說明書中公開的所有特征，或公開的所有方法或過程中的步驟，除了相互排斥的特質和/或步驟以外，均可以以任何方式組合，除非特別敘述，均可被其他等效或具有類似目的的替代特征加以替換，即，除非特別敘述，每個特征之一系列等效或類似特征中的一個實施例而已。實施例1：參見圖1和圖2，一種脫細胞異種真皮制備方法，依次包括以下步驟，步驟A：制取豬真皮片。具體操作為清洗成熟大白豬（約克夏豬種）豬背部皮，去毛刀去毛后，以取皮鼓切取厚度為0.25毫米厚的皮片拋棄不用（作用：除去表皮，毛發及毛囊），再用取皮鼓取厚度為0.50-0.75毫米厚真皮片備用。本領域內的技術人員應知，原料不受豬種、豬齡限制，成熟大白豬豬背部皮僅為一種優選方式，優選原因為其取材方便，可取原料多。步驟B：對豬真皮片進行消毒處理。具體操作為將豬真皮片放入無菌瓶中，加入質量分數為0.5%的過氧乙酸消毒液里浸泡40分鐘。步驟C：使用磷酸鹽緩沖鹽水充分清洗消毒后的豬真皮片。具體操作為使用磷酸鹽緩沖鹽水清洗3次，每次均在搖床上搖30分鐘。步驟D：將豬真皮片與冷凍防護劑充分混合后保存在凍箱中備用。冷凍防護劑為甘油水溶液或多糖，當冷凍防護劑為甘油水溶液時，甘油的體積百分比濃度為20%或大于等于30%；當冷凍防護劑為多糖時，所述冷凍防護劑為葡聚糖凝膠、蔗糖和天然蜂蜜中的一種或者幾種。冷凍防護劑的主要作用在于阻止冰晶的生成，避免冰晶生成損害豬真皮內的膠原蛋白。作為優選，步驟D中還可加入乙二胺四乙酸，乙二胺四乙酸的添加可抑制細菌的生長，乙二胺四乙酸與冷凍防護劑的配比優選為每升冷凍防護劑含20毫摩爾乙二胺四乙酸。步驟E：取出冷凍豬真皮片在室溫下融化，然后加入磷酸鹽緩沖鹽水充分清洗豬真皮片。具體操作為使用磷酸鹽緩沖鹽水清洗3次，每次均在搖床上搖30分鐘。步驟F：加入脫細胞液，將豬真皮片與脫細胞液充分混合以及反應，具體操作為在搖床上混合10小時，所述脫細胞液含有溫和洗滌劑。作為一種優選的方式，所述脫細胞液為4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液，其PH值為8，每升4-羥乙基哌本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種脫細胞異種真皮制備方法，其特征在于：依次包括以下步驟，步驟A：制取豬真皮片；步驟B：對豬真皮片進行消毒處理；步驟C：使用磷酸鹽緩沖鹽水充分清洗消毒后的豬真皮片；步驟D：將豬真皮片與冷凍防護劑充分混合后保存在凍箱中備用；步驟E：取出冷凍豬真皮片在室溫下融化，然后加入磷酸鹽緩沖鹽水充分清洗豬真皮片；步驟F：加入脫細胞液，將豬真皮片與脫細胞液充分混合以及反應，所述脫細胞液含有溫和洗滌劑；步驟G：吸出脫細胞液，然后加入磷酸鹽緩沖鹽水充分清洗豬真皮片。

【技術特征摘要】
1.一種脫細胞異種真皮制備方法，其特征在于：依次包括以下步驟，步驟A：制取豬真皮片；步驟B：對豬真皮片進行消毒處理；步驟C：使用磷酸鹽緩沖鹽水充分清洗消毒后的豬真皮片；步驟D：將豬真皮片與冷凍防護劑充分混合后保存在凍箱中備用；步驟E：取出冷凍豬真皮片在室溫下融化，然后加入磷酸鹽緩沖鹽水充分清洗豬真皮片；步驟F：加入脫細胞液，將豬真皮片與脫細胞液充分混合以及反應，所述脫細胞液含有溫和洗滌劑；步驟G：吸出脫細胞液，然后加入磷酸鹽緩沖鹽水充分清洗豬真皮片。2.根據權利要求1所述的一種脫細胞異種真皮制備方法，其特征在于：所述冷凍防護劑為甘油水溶液或多糖，當冷凍防護劑為甘油水溶液時，甘油的體積百分比濃度為20%或大于等于30%；當冷凍防護劑為多糖時，所述冷凍防護劑為葡聚糖凝膠、蔗糖和天然蜂蜜中的一種或者幾種。3.根據權利要求2所述的一種脫細胞異種真皮制備方法，其特征在于：所述步驟D中還添加有乙二胺四乙酸。4.根據權利要求1所述的一種脫細胞異種真皮制備方法，其特征在于：所述脫細胞液為4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液，其PH值為8，每升4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液含20毫摩爾4-羥乙基哌嗪乙磺酸，所述溫和洗滌劑為十二烷基聚乙二醇醚、乙基苯基聚乙二醇和脫氧膽酸鈉中的一種或者幾種，當所述溫和洗滌劑為脫氧膽酸鈉時，脫氧膽酸鈉的質量體積百分比溶度為2%。5.根據權利要求4所述的一種脫細胞異種真皮制備方法，其特征在于：所述脫細胞液中還添加有乙二胺四乙酸。6.根據權利要求1所述的一種脫細胞異種真皮制備方法，其特征在于：所述脫細胞液體積與豬真皮片體積之比...

【專利技術屬性】
技術研發人員：雷良偉，
申請(專利權)人：江西瑞諾健醫學科技有限公司，
類型：發明
國別省市：江西;36