一種以醬香型白酒糟制備新型細菌培養基的方法技術

本發明專利技術屬于生物培養基制備領域。本發明專利技術涉及一種新型細菌培養基制備方法，包括：(1)將新鮮醬香型白酒糟加水后酶解；過濾得到濾液；(2)將上述濾液濃縮至膏狀或繼續干燥；(3)將上述濃縮物以不同比例替代細菌培養基中的蛋白胨，進行典型細菌培養驗證。本發明專利技術的突出優點是以釀酒副產物白酒糟為原料酶解后以不同比例替代蛋白胨作為氮源培養細菌，既節約了蛋白胨，又防止白酒糟污染環境，同時提升了白酒糟的使用價值。經濃縮物不同比例替代蛋白胨作為氮源，培養受試菌18～24h，其生物量(OD值)普遍高于純蛋白胨為氮源時的生物量。本發明專利技術在微生物培養基氮源的生產領域具有良好的應用前景。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于微生物培養基的制備領域，特別涉及一種以醬香型白酒糟制備單細胞微生物培養基的方法。技術背景白酒糟是白酒固態發酵和固態蒸餾傳統釀造工藝的下腳料，其中殘存許多未能完全利用的營養成分，特別是富含微生物生長的所需的生長因子，而醬香型白酒丟糟因醬香型白酒固態發酵獨特生產工藝導致其粗蛋白明顯高于其它香型白酒丟糟，經測量，粗蛋白含量可高達23%。因此本專利技術考慮使用主要原料為醬香型白酒丟糟。目前白酒糟的利用主要有生產化工產品；培養食用菌；釀醋以及生產飼料等，其利用率及附加值尚有待于進一步提高，而且白酒丟糟保管不當還易污染環境。我國是一個傳統釀酒大國，酒糟資源非常豐富，然而酒糟的深度利用率卻非常低，白酒丟糟，尤其是醬香型白酒丟糟的資源化利用的潛力還很大。限制酒糟資源利用的主要制約因素有以下兩個方面：一是鮮酒糟酸度大（pH小于4），水分含量高（55%~60%），易腐敗變質，不易于運輸和儲藏。二是在釀造過程中摻合了大量的稻殼，在干物質中稻殼占干物質重量的36%左右，體積占50%左右，粗纖維含量高達18%以上。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種以醬香型白酒糟制備新型細菌培養基的方法。該方法變廢為寶，工藝簡單、成本低，易于操作，適合規模化生產。本專利技術的一種以醬香型白酒糟制備新型細菌培養基的方法，包括：（1）將新鮮醬香型白酒糟直接加水并用固堿調節pH，在適宜溫度下分步進行酶解；新鮮醬香型白酒糟與水的質量體積比為1g:8~12ml，充分混勻，進行一級酶解,酶解完成后于90~95℃,10~15min滅酶；然后進行二級酶解，酶解完成后于90~95℃，10~15min滅酶，過濾得到水解液；（2)將上述水解液濃縮至膏狀,或繼續干燥至固體；(3)將上述水解產物等量替代或部分替代細菌基本培養基中的蛋白胨，配置成培養基，接種后進行細菌培養，培養18~24h后測定菌體的生物量(OD值)。步驟（1）中酶包括堿性蛋白酶(1×105U/g)和木瓜蛋白酶(1×105U/g)；其添加量依次為500~2500U/g干酒糟、250~2000U/g干酒糟酶解順序依次為堿性蛋白酶和木瓜蛋白酶或木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶。步驟（1）中的固堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀或氫氧化鈣。步驟（1）中調節pH包括堿性蛋白酶酶解pH7.0~13.0，木瓜蛋白酶酶解pH6.0~7.0。步驟（1）中適宜溫度為堿性蛋白酶40~55℃，木瓜蛋白酶50~55℃。步驟（1）中酶解時間為堿性蛋白酶酶解2~4h、木瓜蛋白酶1~3h。步驟（2）中所述步驟（2）中水解液濃縮至膏狀條件為低溫濃縮，溫度小于80℃，濃縮至水分含量為40~50%，得到膏狀物；或繼續干燥，干燥溫度為70~90℃，真空度為0.008~0.012MPa，干燥至含水量低于5%即可。步驟（3）中水解產物替代培養基中蛋白胨的比例依次為0%、50%、100%。步驟（3）中基本培養基為牛肉膏蛋白胨培養基：牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、NaCl20.0g、水1000.0ml、pH7.0~7.2。步驟（3）中的細菌為大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和蘇云金芽孢桿菌。步驟（3）中接種量為0.5%~3%。本專利技術利用白酒工業下腳料醬香型白酒糟為原料制備新型細菌培養基，用酒糟的酶解產物替代蛋白胨，既降低了使用蛋白胨作為培養基氮源的成本，又防止了酒糟對環境的污染，提高了酒糟的使用價值，變廢為寶。本專利技術生產出的氮源占原材料總氮的48~61%，干燥后的含氮量4.0%~6.5%。在經等質量替代和部分替代氮源蛋白胨后，等質量替代的或部分替代蛋白胨后菌體的生物量增加了1.5~3.2倍。醬香型酒糟不僅可以替代蛋白胨作為細菌培養中的氮源，而且有利于降低培養基成本，又為解決白酒固態酒糟污染多提供了一條途徑，故本專利技術及其方法具有潛在很好的推廣價值。下面結合實施例對本專利技術做進一步說明。附圖說明圖1為醬香型白酒糟酶解后代替或部分代替培養基中的蛋白胨培養細菌的結果。具體實施方式下面結合具體實施例，進一步闡述本專利技術。應理解，這些實施例僅用于說明本專利技術而不用于限制本專利技術的范圍。次外應理解，在閱讀了本專利技術講授的內容之后，本領域技術人員可以對本專利技術作改動或是修改，這些等價形式同樣落于本專利技術申請所附權利要求書所限定的范圍。實施例1醬香型白酒糟水解物的制備包括以下步驟：（1）將新鮮醬香型白酒糟直接加水并用固堿調節pH，在適宜溫度下分步進行酶解；新鮮醬香型白酒糟與水的質量體積比為1g:8~12ml（例1g：8ml、1g：10ml、1g：12ml）充分混勻，進行一級酶解,酶解完成后于90~95℃,10~15min滅酶；然后進行二級酶解，酶解完成后于90~95℃，10~15min滅酶，過濾得到水解液；（2)將上述水解液濃縮至膏狀,或繼續干燥至固體；步驟（1）中酶包括堿性蛋白酶(1×105U/g)和木瓜蛋白酶(1×105U/g)；其添加量依次為500~2500U/g干酒糟(例1000U/g、1500U/g、2000U/g)、250~2000U/g干酒糟（例500U/g、1000U/g、2000U/g）酶解順序依次為堿性蛋白酶和木瓜蛋白酶或木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶。步驟（1）中的堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀或氫氧化鈣。步驟（1）中調節pH包括堿性蛋白酶酶解pH7.0~13.0（例pH7.0、pH9.0、pH11.0），木瓜蛋白酶酶解pH6.0~7.0（例pH6.0、pH7.0）。步驟（1）中適宜溫度為堿性蛋白酶40~55℃（例45℃、50℃、55℃），木瓜蛋白酶50~55℃（例50℃、55℃）。步驟（1）中酶解時間為堿性蛋白酶酶解2~4h（例2h、3h、4h）、木瓜蛋白酶1~3h（例1h、2h、3h）。步驟（2）中水解液濃縮至膏狀條件為低溫濃縮，溫度小于80℃（例60℃、70℃、80℃），濃縮至水分含量為40~50%（例40%、45%、50%），得到膏狀物；或繼續干燥，干燥溫度為70~90℃（例70℃、80℃、90℃），真空度為0.008~0.012MPa（例0.008MPa、0.010MPa、0.012MPa），干燥至含水量低于5%即可。實施例2醬香型白酒糟水解物替代氮源蛋白胨培養大腸桿菌將得到的醬香型白酒糟水解物替代培養基中氮源蛋白胨設置處理如下：CK（牛肉膏蛋白胨培養基）水解物替代量50%、100%共3個處理，培養基pH統一調至7.2，250ml三角瓶裝50ml試驗培養基，121℃滅菌20min。取已經活化的大腸桿本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種以醬香型白酒糟制備新型細菌培養基的方法法，包括：（1）將新鮮醬香型白酒糟直接加水并用固堿氫氧化鈉、氫氧化鉀或氫氧化鈣調節pH，在適宜溫度下分步進行酶解；新鮮醬香型白酒糟與水的質量體積比為1g?:?8~12ml，充分混勻，進行一級酶解,酶解完成后于90~95℃,10~15min滅酶；然后進行二級酶解，酶解完成后于90~95℃，10~15min滅酶，過濾得到水解液；（2)將上述水解液濃縮至膏狀,或繼續干燥至固體；(3)將上述水解產物等量替代或部分替代細菌基本培養基中的蛋白胨，配置成培養基，接種后進行細菌培養，培養18~24h后測定菌體的生物量(OD值)。

【技術特征摘要】
1.一種以醬香型白酒糟制備新型細菌培養基的方法法，包括：
（1）將新鮮醬香型白酒糟直接加水并用固堿氫氧化鈉、氫氧化鉀或氫氧化鈣調節pH，在
適宜溫度下分步進行酶解；新鮮醬香型白酒糟與水的質量體積比為1g:8~12ml，充分混
勻，進行一級酶解,酶解完成后于90~95℃,10~15min滅酶；然后進行二級酶解，酶解完成后
于90~95℃，10~15min滅酶，過濾得到水解液；
（2)將上述水解液濃縮至膏狀,或繼續干燥至固體；
(3)將上述水解產物等量替代或部分替代細菌基本培養基中的蛋白胨，配置成培養基，
接種后進行細菌培養，培養18~24h后測定菌體的生物量(OD值)。
2.根據權利要求1所述的一種以醬香型白酒糟制備新型細菌培養基的方法，其特征在
于：所述步驟（1）中酶包括堿性蛋白酶(1×105U/g)和木瓜蛋白酶(1×105U/g)；其添加量依
次為500~2500U/g干酒糟、250~2000U/g干酒糟酶解順序依次為堿性蛋白酶和木瓜蛋白酶或
木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶。
3.根據權利要求1所述的一種以醬香型白酒糟制備新型細菌培養基的方法，特征在于：
所述步驟（1）中調節pH和適宜溫度包括堿性蛋白酶酶解pH7.0~13.0，適宜溫度為40~55℃；
木瓜蛋白酶酶解pH6.0~7.0，適宜溫度為50~55℃...

【專利技術屬性】
技術研發人員：胡承，文章，李克亞，
申請(專利權)人：四川大學，
類型：發明
國別省市：四川;51