本發明專利技術公開了一種靶向表達EGFR腫瘤細胞的前抗體偶聯藥物及其應用，在本發明專利技術中，通過穩定的非還原硫醚鍵將美登素衍生物（DM1）連接到PanP上，制備得到靶向表達EGFR腫瘤細胞的前抗體偶聯藥物PanP?DM1。本發明專利技術提供的一種靶向表達EGFR腫瘤細胞的前抗體偶聯藥物PDC，其具有高效能及腫瘤的選擇性，且經實驗證明前抗體偶聯藥物具有較小的對正常組織的毒副作用。
Pre antibody coupling medicine for targeting EGFR tumor cell and its application
The invention discloses a targeted expression of EGFR tumor cells before antibody drug conjugates and its application in the invention, by the non maytansine derivatives thioether bond reduction stable (DM1) connected to the PanP, prepared before targeting antibody drug conjugates PanP DM1 expression of EGFR in tumor cells. The invention provides a targeted first antibody drug conjugates PDC EGFR expression in tumor cells, which has high efficiency and tumor selectivity, and the experiments prove that the toxicity to normal tissue before antibody drug conjugates have smaller.
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物
，更具體地，本專利技術公開了一種靶向表達EGFR腫瘤細胞的前抗體偶聯藥物及其應用。
技術介紹
表皮生長因子受體(EGFR)是一種跨膜受體酪氨酸激酶，在腫瘤進展中有著重要作用。過度的EGFR激活和腫瘤的發生及轉移相關。據報道，60%-80%的結腸癌有EGFR的過度表達。另外，EGFR也是預測結直腸癌和乳腺癌的重要標志物。更重要的是EGFR位于癌細胞表面，因此是開發靶向抗體的理想靶點。抗體可以特定地結合到EGFR的胞外區III結構域，不僅阻止了配體的結合,而且阻止了在結構域II上延伸結構域的二聚體化（LiS,etal.Structuralbasisforinhibitionoftheepidermalgrowthfactorreceptorbycetuximab[J].CancerCell,2005,7(4):301-311.；IidaM,etal.Sym004,anovelEGFRantibodymixture,canovercomeacquiredresistancetocetuximab[J].Neoplasia,2013,15(10):1196-1206.）經FDA批準的靶向EGFR的抗體包括西妥昔單抗和帕妥木單抗。它們被用于在臨床上治療KRAS野生型的進展性結腸癌。表皮生長因子受體（即EGFR）也稱作c-erbBl/Herl，其家族成員都是生長因子受體酪氨酸激酶，它們在細胞表面與特異的生長因子或天然配體相互作用，如與EGF或TGFa相互作用，由此活化受體酪氨酸激酶。已發現的該家族第一個成員是表觀分子量為165KD的糖蛋白。EGFR在調節腫瘤細胞的生長、修復和生存、新生血管生成、侵襲和轉移中具有重要的作用，同時在相當一部分的人類腫瘤中都有表達。在很多惡性腫瘤中，EGFR的表達往往與較差的預后和較低的生存率相關。由此可知，如果有藥物能阻斷EGFR的活性，將會抑制其磷酸化和信號傳導，從而起到多重途徑的抗腫瘤作用，同時也能增加化療和放療的抗腫瘤療效。在一些研究中，EGFR抑制劑與多種化療藥物和放療藥物聯合作用于一些腫瘤細胞株時，表現出累加和協同作用。EGFR抑制劑主要包括單克隆抗體、酪氨酸激酶抑制劑、喹唑啉pyralo-/吡咯并-/吡啶并嘧啶、配體-毒素和免疫毒素聯結物，以及反義核苷酸和EGFR/配體主導的疫苗等。一些體內和體外實驗顯示抗EGFR抗體成功的抑制了表達EGFR的腫瘤細胞株的生長。在實體瘤的治療中，一些抗EGFR單克隆抗體單獨應用或與傳統治療方法合并應用的治療結果令人鼓舞?，F有技術中已經描述了多種小鼠的抗EGFR單克隆抗體，可與EGFR高特異的結合，這些抗體大致可分為兩類，一類是可與受體結合但不抑制EGF結合的抗體，另一類是可與受體結合并且還抑制EGF結合的抗體。但是患者對鼠源抗體產生的免疫應答限制了這些抗體在人類治療和體內診斷中的應用。患者會產生人抗小鼠抗體反應（HAMA），從而限制了抗體到達其抗原靶標的能力，使抗體的效能降低。一些研究人員為了減少HAMA反應，研制出了人鼠嵌合的抗體，其中小鼠可變區（V）與人恒定區（C）連接。該抗體證明在臨床上好于鼠源抗體，但是嵌合抗體的小鼠V區中仍然含有使患者產生免疫原性的成分，限制了其應用。目前已有全人源抗體Panitumumab（WO9850433）被應用于治療生長因子過度表達的疾病中。Panitumumab（E7.6.3，ABX-EGF，AMG954，商品名：Vectibix，中文名：帕尼單抗）為全人源單克隆抗體，其結構為IgG2κ，其作用靶點為表皮生長因子受體（EGFR，ErbB-1或HER1），該抗體主要用于治療表達表皮生長因子受體的轉移性結直腸癌。Panitumumab是利用XenoMouse技術制備的全人源抗體，不良免疫應答的發生幾率很低。通過結合到EGFR的胞外區，單克隆抗體介導了直接的效應機制，導致了封閉配體結合，受體下調，細胞周期阻滯及誘導凋亡的作用，并且引起了針對癌細胞的免疫調節機制，例如ADCC效應及CDC效應。然而并非所有的抗體都可以介導ADCC效應，IgG1比IgG2有更強的引發ADCC效應的能力。盡管EGFR是抗癌治療中一個有效的靶點，但針對EGFR的抗體也可以靶向其他正常組織，如：肝臟，皮膚和胃腸道等正常組織，這可能形成劑量限制性的副反應及不同類型的毒副作用。帕尼單抗是一種全人的IgG2型單克隆抗體，可以特異性地結合EGFR，且有較高的親和力。使用帕尼單抗進行治療具有免疫原性低及超敏反應發生率低的優勢。Vogit等的實驗結果表明了帕尼單抗在EGFR上的結合位點與西妥昔并非完全一致（VoigtM,Functionaldissectionoftheepidermalgrowthfactorreceptorepitopestargetedbypanitumumabandcetuximab.Neoplasia2012;14:1023-31），但對西妥昔耐藥的患者對帕尼治療敏感（西妥昔耐藥：第492位絲氨酸突變為精氨酸），與上述結論相一致，這解釋了對西妥昔耐藥的患者對帕尼治療敏感的原因（MontagutC,IdentificationofamutationintheextracellulardomainoftheEpidermalGrowthFactorReceptorconferringcetuximabresistanceincolorectalcancer.NatMed2012;18:221-3）然而，作為一種IgG2型抗體，它缺乏了巨噬細胞和NK-細胞介導的經典的ADCC效應。最近的研究結果表明，缺乏ADCC效應可能會限制帕尼單抗在體內發揮功能效應。在此之前，帕尼單抗選擇了IgG2的亞型被認為可以盡量降低潛在的因ADCC效應及CDC效應引起的皮膚毒性（KasperS,OncogenicRASsimultaneouslyprotectsagainstanti-EGFRantibody-dependentcellularcytotoxicityandEGFRsignalingblockade.Oncogene2012）。因此，考慮到增強這些效應可能增加的皮膚毒性，尚未有通過改造帕尼單抗增加其ADCC效應的報道。包括帕尼單抗在內的抗-EGFR的抗體引起皮膚毒性的主要特征是紅疹，痤瘡，瘙癢及皮膚干燥。盡管由EGFR抑制劑導致的皮膚毒性的機制尚不清楚，越來越多研究都認為在角質細胞中的EGFR信號通路對于皮膚炎癥反應的發生起到了關鍵的作用。因此，識別腫瘤特異性EGFR表位的抗體有可能消除潛在的相關副作用。最近的研究顯示了在臨床前研究中使用的新型probody技術能夠在一定程度上限制EGFR抗體對皮膚的毒副作用。probody技術（WO2010096838）是由美國Cytomx生物公司開發的一種“抗體前藥”或稱作“基于抗體的前藥”技術。其通過對傳統抗體的改造使之具有在人的正常組織保持“沉默”，即減少其對正常組織表達的相應靶點的結合；而在抗體達到腫瘤部位后借助腫瘤微環境中特異性表達的蛋白酶如：uPA（尿激酶型纖溶酶原激活物）激活而成為和改造前抗體等效的治療用藥物。它在抗腫瘤治療中可以提高抗體的靶本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種靶向表達EGFR腫瘤細胞的前抗體偶聯藥物，其特征在于，含有蛋白酶激活型抗體和細胞毒性藥物。
【技術特征摘要】
1.一種靶向表達EGFR腫瘤細胞的前抗體偶聯藥物，其特征在于，含有蛋白酶激活型抗體和細胞毒性藥物。2.根據權利要求1所述一種靶向表達EGFR腫瘤細胞的前抗體偶聯藥物，其特征在于，所述的前抗體重鏈具有SEQIDNO：2所示的氨基酸序列，所述前抗體輕鏈具有SEQIDNO：4所示的氨基酸序列。3.根據權利要求1所述一種靶向表達EGFR腫瘤細胞的前抗體偶聯藥物，其特征在于，所述細胞毒性...
【專利技術屬性】
技術研發人員：錢衛珠，
申請(專利權)人：上海張江生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：上海;31
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