包含修飾的包膜蛋白E3的病毒樣顆粒制造技術(shù)

包含含有修飾的包膜蛋白E3的病毒結(jié)構(gòu)蛋白的病毒樣顆粒。所述病毒結(jié)構(gòu)蛋白可為來(lái)源于甲病毒屬或黃病毒屬的病毒結(jié)構(gòu)蛋白。特別地，所述病毒結(jié)構(gòu)蛋白可來(lái)源于基孔肯雅病毒或委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒。

Virus like particles containing modified envelope protein E3

Virus like particles containing viral structural proteins containing modified envelope protein E3. The virus structural protein for virus structure derived from alphavirus or flavivirus protein. In particular, the virus structural protein derived from chikungunya virus or Venezuelan equine encephalitis virus.

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國(guó)外來(lái)華專利技術(shù)】包含修飾的包膜蛋白E3的病毒樣顆粒
本申請(qǐng)涉及包含修飾的包膜蛋白E3的病毒樣顆粒及其用途。
技術(shù)介紹
病毒樣顆粒(VLP)為模仿真實(shí)天然病毒的組織和構(gòu)象但缺乏病毒基因組的多蛋白結(jié)構(gòu)，潛在地產(chǎn)生更安全和更便宜的疫苗候選物。少量預(yù)防性的基于VLP的疫苗當(dāng)前已在全世界商品化：葛蘭素史克(GlaxoSmithKline)的EngerixR(乙型肝炎病毒)和CervarixR(人類乳頭瘤病毒)以及默克(MerckandCo.,Inc.)的RecombivaxHBR(乙型肝炎病毒)和GardasilR(人類乳頭瘤病毒)為一些例子。其它基于VLP的疫苗候選物處在臨床試驗(yàn)中或處于臨床前評(píng)估，例如，流感病毒、細(xì)小病毒、諾瓦克病毒和各種嵌合VLP。許多其它候選物仍限于小規(guī)模基礎(chǔ)研究，盡管其在臨床前試驗(yàn)中成功。大規(guī)模VLP產(chǎn)生的問(wèn)題在工藝控制、監(jiān)測(cè)和優(yōu)化背景中討論。相應(yīng)地確定和討論了主要的上游和下游技術(shù)挑戰(zhàn)。伴隨來(lái)自臨床試驗(yàn)的最新結(jié)果和用于治療性或預(yù)防性接種的基于嵌合VLP的技術(shù)的近期進(jìn)展，簡(jiǎn)要地提出了成功的基于VLP的一鳴驚人的疫苗。迄今為止，已經(jīng)對(duì)超過(guò)30種感染人類和其它動(dòng)物的不同病毒產(chǎn)生基于VLP的疫苗。實(shí)例包括AAV(腺伴隨病毒)、H5N3(禽流感)、BFDV(虎皮鸚鵡幼雛病病毒)、BTV(藍(lán)舌病毒)、埃博拉、腸道病毒71、GHPV(鵝出血性多瘤病毒)、HBV(乙型肝炎病毒)、HCV(丙型肝炎病毒)、HDV(丁型肝炎病毒)、HEV(戊型肝炎病毒)、HIV、HPV(人類乳頭瘤病毒)、IBDV(傳染性法氏囊病病毒)、甲型流感、甲型流感H1N1、甲型流感H3N2、JC多瘤病毒、Margurg、MS2、IPCV(印度花生叢簇病毒)、NDV(新城疫病毒)、No(諾如病毒)、Nv(諾瓦克病毒)、PhMV(酸漿斑駁病毒)、多瘤病毒、PPV(豬細(xì)小病毒)、RHDV(兔出血癥病毒)、輪狀病毒、SARS、SIV(猴免疫缺陷病毒)、SV40(猴病毒40)、SVDV(豬水皰病病毒)等。(ExpertRev.Vaccines9(10),1149-1176,2010)。為了迅速產(chǎn)生大量用于臨床前和臨床試驗(yàn)的VLP或疫苗，幾乎所有的藥物開(kāi)發(fā)將會(huì)面對(duì)相同的挑戰(zhàn)性難題，即快速產(chǎn)生高穩(wěn)定性生產(chǎn)者。發(fā)展和鑒定穩(wěn)定細(xì)胞系是開(kāi)發(fā)的決定性部分。然而，產(chǎn)生具有高滴度和良好產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定細(xì)胞系至今仍不能容易地完成。自從2004年基孔肯雅病毒(CHIKV)從肯尼亞再度出現(xiàn)以來(lái)，該甲病毒在非洲、歐洲和亞洲感染了數(shù)百萬(wàn)人群。在缺乏疫苗或抗病毒治療的情況下，疾病的嚴(yán)重性和該流行性病毒的傳播造成嚴(yán)重的公眾健康威脅。據(jù)報(bào)道，用于流行性基孔肯雅病毒的VLP疫苗保護(hù)非人靈長(zhǎng)類免于感染(NatMed.2010March;16(3):334-338)。美國(guó)專利公開(kāi)號(hào)2012/0003266公開(kāi)一種包含一種或多種基孔肯雅病毒結(jié)構(gòu)蛋白的病毒樣顆粒(VLP)，其可用于配制誘導(dǎo)對(duì)感染或至少一種感染癥狀的免疫的基孔肯雅疫苗或抗原組合物。WO2012/106356公開(kāi)了修飾的甲病毒屬或黃病毒屬病毒樣顆粒(VLP)和用于提高用于預(yù)防或治療甲病毒屬和黃病毒屬介導(dǎo)的疾病的修飾VLP的產(chǎn)生的方法。(這些引用的文獻(xiàn)通過(guò)引用結(jié)合到本文中)。引文列表專利文獻(xiàn)[PTL1]US2012/0003266[PTL2]WO2012/106356非專利文獻(xiàn)[NPL1]ExpertRev.Vaccines9(10),1149-1176,2010[NPL2]NatMed.2010March;16(3):334-338。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
根據(jù)本申請(qǐng)，提供以下：(1)病毒樣顆粒，其包含含有修飾的包膜蛋白E3的病毒結(jié)構(gòu)蛋白。(2)(1)的病毒樣顆粒，其中所述病毒結(jié)構(gòu)蛋白來(lái)源于甲病毒屬或黃病毒屬。(3)(2)的病毒樣顆粒，其中所述病毒結(jié)構(gòu)蛋白來(lái)源于基孔肯雅病毒或委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒。(4)(3)的病毒樣顆粒，其中所述病毒樣顆粒來(lái)源于基孔肯雅病毒株37997或毒株OPY-1或者委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒株TC-83。(5)(1)-(4)中任一項(xiàng)的病毒樣顆粒，其中在病毒結(jié)構(gòu)蛋白的氨基酸序列中置換、添加和/或缺失包膜蛋白E3中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基。(6)(5)的病毒樣顆粒，其中在包膜蛋白E3的弗林蛋白酶位點(diǎn)的氨基酸序列中置換、添加和/或缺失一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基。(7)(1)-(6)中任一項(xiàng)的病毒樣顆粒，其中所述病毒結(jié)構(gòu)蛋白包括衣殼、包膜蛋白E1、包膜蛋白E2和包膜蛋白E3。(8)(1)-(7)中任一項(xiàng)的病毒樣顆粒，其中至少一種抗原插入包膜蛋白E3中。(9)(8)的病毒樣顆粒，其中所述至少一種抗原進(jìn)一步插入包膜蛋白E2中。(10)(8)或(9)的病毒樣顆粒，其中所述至少一種抗原插入SEQIDNO:1的321和326對(duì)應(yīng)的殘基、SEQIDNO:2的殘基321和326或SEQIDNO:3的殘基330和335之間。(11)(8)-(10)中任一項(xiàng)的病毒樣顆粒，其中所述至少一種抗原來(lái)源于惡性瘧原蟲(chóng)環(huán)子孢子蛋白、PD-1、PD-L1、CTLA-4、DISC1、IL-2、HER2、BTLA或HVEM。(12)(11)的病毒樣顆粒，其中選自(NPNA)n(n=4-30)、SEQIDNO:6-9和15-29表示的氨基酸序列的肽插入包膜E3蛋白中。(13)(8)-(12)中任一項(xiàng)的病毒樣顆粒，其中所述病毒樣顆粒為包含下列氨基酸序列或與下列序列具有90%或更多同一性的氨基酸序列的基孔肯雅病毒樣顆粒：SEQIDNO:31或SEQIDNO:75表示的氨基酸序列組成的衣殼；SEQIDNO:32或SEQIDNO:76表示的氨基酸序列組成的E1；和SEQIDNO:33或SEQIDNO:77表示的氨基酸序列組成的E2和E3的復(fù)合體，其中至少一種抗原的氨基酸序列插入SEQIDNO:2的殘基321和326對(duì)應(yīng)的殘基之間。(14)(8)-(12)中任一項(xiàng)的病毒樣顆粒，其中所述病毒樣顆粒為包含下列氨基酸序列或與下列序列具有90%或更多同一性的氨基酸序列的委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒樣顆粒：SEQIDNO:35表示的氨基酸序列組成的衣殼；SEQIDNO:36表示的氨基酸序列組成的E1；和SEQIDNO:37表示的氨基酸序列組成的E2和E3的復(fù)合體，其中至少一種抗原的氨基酸序列插入SEQIDNO:3的殘基330和335對(duì)應(yīng)的殘基之間。(15)(8)-(12)中任一項(xiàng)的病毒樣顆粒，其中所述病毒樣顆粒為基孔肯雅病毒樣顆粒，并且所述病毒樣顆粒的結(jié)構(gòu)包含下列序列(1)-(4)的任一項(xiàng)或與下列序列(1)-(4)的任一項(xiàng)具有90%或更多同一性的氨基酸序列：(1)SEQIDNO:32表示的氨基酸序列組成的E1；插入了瘧疾抗原的E2和E3的復(fù)合體，其由SEQIDNO:46表示的氨基酸序列組成；和SEQIDNO:31表示的氨基酸序列組成的衣殼；(2)SEQIDNO:32表示的氨基酸序列組成的E1；插入了PD-1抗原的E2和E3的復(fù)合體，其由SEQIDNO:47表示的氨基酸序列組成；和SEQIDNO:31表示的氨基酸序列組成的衣殼；(3)SEQIDNO:32表示的氨基酸序列組成的E1；插入了PD-L1配體抗原的E2和E3的復(fù)合體，其由SEQIDNO:48表示的氨基酸序列組成；和SEQIDNO:31表示的氨基酸序本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
病毒樣顆粒，其包含含有修飾的包膜蛋白E3的病毒結(jié)構(gòu)蛋白。

【技術(shù)特征摘要】
【國(guó)外來(lái)華專利技術(shù)】2014.08.08 US 62/035037;2014.11.13 US 62/079128;201.病毒樣顆粒，其包含含有修飾的包膜蛋白E3的病毒結(jié)構(gòu)蛋白。2.權(quán)利要求1的病毒樣顆粒，其中所述病毒結(jié)構(gòu)蛋白來(lái)源于甲病毒屬或黃病毒屬。3.權(quán)利要求2的病毒樣顆粒，其中所述病毒結(jié)構(gòu)蛋白來(lái)源于基孔肯雅病毒或委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒。4.權(quán)利要求3的病毒樣顆粒，其中所述病毒樣顆粒來(lái)源于基孔肯雅病毒株37997或毒株OPY-1或者委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒株TC-83。5.權(quán)利要求1的病毒樣顆粒，其中在所述病毒結(jié)構(gòu)蛋白的氨基酸序列中置換、添加和/或缺失包膜蛋白E3中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基。6.權(quán)利要求5的病毒樣顆粒，其中在包膜蛋白E3的弗林蛋白酶位點(diǎn)的氨基酸序列中置換、添加和/或缺失一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基。7.權(quán)利要求1的病毒樣顆粒，其中所述病毒結(jié)構(gòu)蛋白包括衣殼、包膜蛋白E1、包膜蛋白E2和包膜蛋白E3。8.權(quán)利要求1的病毒樣顆粒，其中至少一種抗原插入包膜蛋白E3中。9.權(quán)利要求8的病毒樣顆粒，其中所述至少一種抗原進(jìn)一步插入包膜蛋白E2中。10.權(quán)利要求8的病毒樣顆粒，其中所述至少一種抗原插入SEQIDNO:1的321和326對(duì)應(yīng)的殘基、SEQIDNO:2的殘基321和326或SEQIDNO:3的殘基330和335之間。11.權(quán)利要求8的病毒樣顆粒，其中所述至少一種抗原來(lái)源于惡性瘧原蟲(chóng)...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：赤畑涉，上野隆司，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：VLP治療有限責(zé)任公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：美國(guó),US