一種利用microRNA提高抗腫瘤藥物敏感性的應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種可提高抗腫瘤藥物敏感性的應(yīng)用方法。本發(fā)明專利技術(shù)通過將microRNA與它莫昔芬(tamoxifen)聯(lián)合應(yīng)用，大大提高了它莫昔芬對腫瘤細(xì)胞生長的抑制效果。加入microRNA可以使它莫昔芬對腫瘤細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度IC50降至不加microRNA時(shí)的40％以下。

Application of microRNA for improving sensitivity of antineoplastic drugs

The invention discloses an application method which can improve the sensitivity of antineoplastic drugs. The microRNA Mo Xifen (tamoxifen) and its combined application, greatly enhanced the inhibitory effect of tamoxifen on the growth of tumor cells. Half of the addition of microRNA can make tamoxifen on the growth inhibition of tumor cells without microRNA IC50 concentrations to below 40%.

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種利用microRNA提高抗腫瘤藥物敏感性的應(yīng)用
本專利技術(shù)涉及生物
，更具體而言本專利技術(shù)涉及分子醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是微小RNA分子的醫(yī)藥用途。
技術(shù)介紹
microRNA(miRNA，又稱微小RNA)是一類內(nèi)生的、高度保守的、非編碼的小單鏈RNA，長度約18-25個(gè)核苷酸(nt)(Lietal.，2010)。它廣泛存在于生物界，從低等生物到人，甚至在古細(xì)菌和真菌中也能發(fā)現(xiàn)其蹤跡。microRNA通過與蛋白編碼基因的mRNAs反向互補(bǔ)，以調(diào)控其蛋白的表達(dá)(Ambrosetal.，2001)。已有研究報(bào)道m(xù)icroRNA參與調(diào)控多種生物學(xué)過程，例如細(xì)胞的發(fā)育調(diào)控，細(xì)胞增殖、分化、凋亡，腫瘤的發(fā)生和遷移，以及耐藥性的調(diào)節(jié)等過程(Zhaoetal.，2007)。研究表明microRNA能影響化療藥物的敏感性，而且越來越多的研究證實(shí)microRNA的異常表達(dá)可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的耐藥性。Climent等發(fā)現(xiàn)乳腺癌患者由于11q染色體上mir-125b的缺失導(dǎo)致蒽環(huán)霉素類化療藥的耐藥性增加。同時(shí)乳腺癌患者對紫杉醇、5-氟尿嘧啶、拓?fù)涮婵档然熕幰伯a(chǎn)生耐藥性。已有專利公開申請基于microRNA的方法用于乳腺癌的診斷、預(yù)后和治療(US2006/029889，克勞斯等.，；US2010/0297627，Watsonetal.，)。因此microRNA對腫瘤化療藥物的敏感性起著十分重要的作用。乳腺癌的發(fā)病率位居首位，對女性生命造成嚴(yán)重的威脅。化學(xué)治療是目前治療乳腺癌的主要方法，但隨著治療的深入，乳腺癌患者往往會(huì)對藥物產(chǎn)生一定的耐藥性，使得治療難度加大。本所申請的基于代謝組學(xué)方法發(fā)現(xiàn)microRNA在調(diào)控乳腺癌細(xì)胞代謝水平方面的應(yīng)用，是本領(lǐng)域亟待發(fā)現(xiàn)microRNA的治療用途。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)發(fā)現(xiàn)一種microRNA可影響抗腫瘤藥物敏感性，所述治療藥物為它莫昔芬(tamoxifen)。所述microRNA為mir-103a-3p。所述mir-103a-3p的核苷酸序列為序列表中的SEQIDNO：1。因此，本專利技術(shù)的第一方面涉及用于制備一種具有影響腫瘤功能的藥物組合物，所述藥物組合物包括：a)有效量的mir-103a-3p和藥學(xué)上可接受的載體；b)腫瘤治療藥物。在本實(shí)施方案中，所述腫瘤是乳腺癌。本實(shí)施方案中，所述腫瘤治療藥物為化療劑，所述化療劑優(yōu)選為它莫昔芬(tamoxifen)。本專利技術(shù)的第二方面涉及microRNA在制備藥物中的應(yīng)用，尤其涉及mir-103a-3p在制備影響腫瘤細(xì)胞藥物敏感性的藥物組合物的應(yīng)用。在本實(shí)施方案中，所述腫瘤是乳腺癌。本實(shí)施方案中，所述腫瘤治療藥物為化療劑，所述化療劑優(yōu)選為它莫昔芬(tamoxifen)。附圖說明圖1為不同濃度MCF7細(xì)胞在384孔板中的生長曲線。圖2為不同濃度miRNA對細(xì)胞生長的影響。圖3為mir-103a-3p可增強(qiáng)它莫昔芬對腫瘤細(xì)胞生長的抑制效果。具體實(shí)施方式如本文所用，術(shù)語“影響抗腫瘤藥物敏感性”指本專利技術(shù)引起腫瘤細(xì)胞生長降低至一定水平所需的抗腫瘤藥物的顯著變化。如本文所用，術(shù)語“mir-103a-3p”、“miRNA-103a-3p”或“microRNA-103a-3p”可互換使用。本專利技術(shù)的術(shù)語中包含但不限于SEQIDNO：1所示序列或其同源序列。本專利技術(shù)的術(shù)語中還包含已知各種來源的mir-103a-3p的同源序列，例如人、大鼠、小鼠、馬等。如本文所用，術(shù)語“mir-103a-3p”指核酸編碼mir-103a-3p和同源物和其變體，包括對mir-103a-3p的功能或結(jié)構(gòu)不產(chǎn)生不利影響的取代、添加和缺失。本專利技術(shù)的術(shù)語中包含天然存在的mir-103a-3p序列中取代、添加或缺失一個(gè)或幾個(gè)核酸，或經(jīng)生物化學(xué)修飾，且仍具有生物活性的衍生RNA。本專利技術(shù)涉及治療型miRNA的設(shè)計(jì)、合成、構(gòu)建、組成、特性和應(yīng)用以及如此miRNA治療腫瘤的有效方式。更具體地，本專利技術(shù)公開了，人工合成的mir-103a-3p顯著影響腫瘤細(xì)胞藥物敏感性的代謝水平。mir-103a-3p以初始轉(zhuǎn)錄物(pri-miRNA)、miRNA前體、成熟miRNA、片段或其變體(保留成熟miRNA的生物活性)和DNA編碼的初始轉(zhuǎn)錄物(pri-miRNA)、miRNA前體、成熟miRNA、片段或其變體的形式存在，或以miRNA調(diào)控元件的形式存在。本專利技術(shù)所述mir-103a-3p的序列變體包括取代、插入或缺失變體的一種或多種。如本文所用，術(shù)語“核酸或核酸序列的同源性”是指它們天然或人工來源于一個(gè)共同祖先的核酸或核酸序列。一般由兩個(gè)或多個(gè)核酸或蛋白(或其序列)之間的序列相似性來推斷同源性。如本文所用，序列之間相似性的百分比為50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％時(shí)，可建立同源性。確定序列相似性的算法可通過美國國家生物技術(shù)信息中心(www.ncbi.nlm.nih.gov)公開獲得。如本文所用，所述“有效量”是指足以產(chǎn)生生物活性的藥物組合物的量。所選用的劑量水平取決于多種因素，包括藥物組合物的活性、給藥途徑、與其他藥物或治療方法的組合、所治療患者的嚴(yán)重程度等。優(yōu)選地最合適的劑量由本領(lǐng)域內(nèi)普通技術(shù)人員來評定。本專利技術(shù)的藥物組合物在無菌的和無熱源的條件下制備。所述藥物組合物的制備方法在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍之內(nèi)，可參考Remington’sPharmaceuticalScience，第17版，MackPublishingCompany，Easton，Pa.(1985)中其公開內(nèi)容所描述的。合適的藥學(xué)上可接受的載體包括水、緩沖水溶液、生理鹽水、0.4％的鹽水、有機(jī)溶劑等。本專利技術(shù)的藥物組合物包括常規(guī)的藥物賦形劑和/或添加劑。合適的藥物賦形劑包括穩(wěn)定劑、抗氧化劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、緩沖劑和pH調(diào)節(jié)劑。合適的添加劑包括例如生理生物相容性緩沖劑(鹽酸氨丁三醇)、螯合劑(DTPA或DTPA-雙酰胺)或鈣螯合物(DTPA鈣、CaNaDTPA-雙酰胺)，鈣或鈉鹽(氯化鈣、抗壞血酸鈣、葡萄糖酸鈣或乳酸鈣)的加入。本專利技術(shù)的藥物組合物可以液態(tài)形式包裝或凍干。本專利技術(shù)的固體藥物組合物，可用常規(guī)的藥學(xué)上可接受的無毒載體例如藥物級的甘露醇、乳糖、淀粉、纖維素、葡萄糖、蔗糖、碳酸鎂等。用于將核酸導(dǎo)入細(xì)胞的方法在此領(lǐng)域內(nèi)有很多，其包括但不限于脂質(zhì)體包裹RNA法、電穿孔法、磷酸鈣介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、DEAE-葡聚糖介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、病毒和非病毒載體等。本專利技術(shù)所用的材料和試劑均來自市購。實(shí)施例：材料和方法1.細(xì)胞的培養(yǎng)將乳腺癌細(xì)胞系MCF7(航天醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)與應(yīng)用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室張華博士贈(zèng)送)在加入10％胎牛血清的DMEM(高糖)培養(yǎng)基(Hyclone)中，放置于37℃、5％CO2濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2.mir-103a-3p激動(dòng)劑轉(zhuǎn)染mir-103a-3p激動(dòng)劑是直接將mir-103a-3p的成熟序列(SEQIDNO：1)經(jīng)過特殊化學(xué)修飾(如全鏈上的甲基化修飾、5’端和3’端的硫代修飾和3’端的膽固醇修飾)而合成的，它通過模擬內(nèi)源性mir-103a-3p的作用來調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)。將MCF7細(xì)胞鋪板于6孔板中，過夜培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到50％時(shí)，用無血清培養(yǎng)基(Opti-本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種用于影響腫瘤功能的藥物組合物，所述藥物組合物包括：a)有效量的mir?103a?3p和藥學(xué)上可接受的載體，b)腫瘤治療藥物，所述mir?103a?3p的核苷酸序列為序列表中的SEQ?ID?NO：1。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種用于影響腫瘤功能的藥物組合物，所述藥物組合物包括：a)有效量的mir-103a-3p和藥學(xué)上可接受的載體，b)腫瘤治療藥物，所述mir-103a-3p的核苷酸序列為序列表中的SEQIDNO：1。2.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述腫瘤功能為腫瘤細(xì)胞的生長水平。3.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述腫瘤為乳腺癌。4.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述腫...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：熊江輝，梁峰吉，喬文艷，周雄輝，吳安東，元艷宏，曹宏卿，李瑩輝，陳善廣，
申請(專利權(quán))人：中國航天員科研訓(xùn)練中心，
類型：發(fā)明
國別省市：北京,11