紅錐無菌外植體制備及初始芽誘導方法技術

本發明專利技術公開了一種紅錐無菌外植體制備及初始芽誘導方法，包括外植體準備、外植體消毒處理以及初始芽誘導工序，采集紅錐當年生嫩枝作為外植體，進行消毒處理后，獲得的無菌外植體接種于初始芽誘導培養基中，在適宜環境中培養20?30天后，獲得生長快、活力旺盛的紅錐初始芽。本發明專利技術選取當年紅錐生嫩枝為組培繁殖材料，采用一定的濃度及消毒時間的多種藥劑相配合的消毒處理的方式，無菌外植體獲取率高，達到90%以上，使用了優化誘導培養基及培養方式，外植體褐化少，初始芽發生率高，芽苗伸長快、活力旺盛，具有較好的經濟效益和社會效益。

Preparation of red cone aseptic explant and initial bud induction method

The invention discloses a red cone sterile explant preparation and initial bud induction method, including explant preparation, disinfection of explants and the initial bud induction process, then shoots the red cone collection as explants, disinfected, sterile explants were obtained from the bud induction medium, culture 20 in suitable environment in 30 days, get the red cone bud of fast growth, strong vitality. The invention selects the red cone shoots breeding material for tissue culture, combined with various agents with certain concentration and time of disinfection disinfection way, sterile explants obtained high rate reached more than 90%, the use of optimized induction medium and culture method, the explant browning, the initial sprouting rate is high, shoot elongation fast, vigorous, with good economic and social benefits.

【技術實現步驟摘要】
紅錐無菌外植體制備及初始芽誘導方法
本專利技術屬于植物組織培養
，尤其是涉及一種紅錐無菌外植體制備及初始芽誘導方法。
技術介紹
紅錐(CastanopsishystrixA.DC)隸屬殼斗科(Fagaceae)栲屬(Castanopsis)，成年樹高可達30m，胸徑1m以上，是我國南亞熱帶和亞熱帶植被常綠闊葉林的優勢組成樹種，屬華南地區重要的鄉土闊葉珍貴用材和高效多用途生態公益林樹種。紅錐天然分布于東經95°20′～118°00′，北緯18°30′～25°00′，主產地集中于廣東、廣西、福建南部，其周邊分布在海南、云南南部、貴州東南部以及湖南、江西等省南部。紅錐具有生長快、材質優、適應廣、效益高等優良特性。其主干通直，材質堅硬，呈紅色，色澤和紋理美觀，耐腐蝕性強，不開裂、不變形、易加工，是優質珍貴用材，可供建筑、造船、高檔家具、木制地板、軍工用品、體育器材等用。種子富含淀粉，可用于炒食、飼料和釀酒，種實、殼斗均富含單寧，可提制栲膠。紅錐林萌芽力強，萌條生長迅速，一次造林可采伐10次以上，合理經營可獲利上百年。紅錐枝葉濃密，較耐蔭蔽，混生性能好，可作為用材和水源涵養林進行純林種植，亦可為殘次林改造，生態公益林改造的混交造林。目前我國多個省如廣東、廣西、福建等將紅錐推選為當地區經濟價值高、發展前途大的優良樹種進行推廣，造林面積大，推廣應用前景廣。目前紅錐人工林栽培所用苗木多采用混采種子育苗，導致苗木及其造林后的林分個體分化大，參差不齊，進而影響到人工林的造林質量、產量及經濟效益。通過科技工作者近十幾年的研究，已選育出一批紅錐優良單株，但由于所選優株數量有限，加之樹齡年輕，結實率低，所收獲種子遠不能滿足造林需求。前期研究表明，紅錐優樹無論采用嫁接還是扦插進行繁殖，繁殖率低，同時存在程度不同的偏冠現象，所繁育苗木難以用于生產。以紅錐優樹萌枝進行組培研究雖有報道，但仍存在出芽慢，無菌系建立困難等問題，難以用于生產。
技術實現思路
本專利技術針對現有紅錐組織培養中外植體消毒困難、褐化、初始芽發生率低、芽苗活性差等的技術問題，提供一種紅錐無菌外植體制備及初始芽誘導的方法。為了實現上述目的，本專利技術的技術方案如下一種紅錐無菌外植體制備及初始芽誘導方法，包括外植體準備、外植體消毒處理以及初始芽誘導工序，采集紅錐當年生嫩枝作為外植體，進行消毒處理后，獲得的無菌外植體接種于初始芽誘導培養基中，在適宜環境中培養20-30天后，獲得生長快、活力旺盛的紅錐初始芽，其操作步驟如下：（1）外植體準備：在至少連續3天晴朗的氣候里，采集紅錐的樹冠外圍生長健壯的當年生嫩枝作為外植體；（2）外植體消毒處理：將外植體用無菌水沖洗干凈后，置于體積濃度為0.1-0.3%的廣譜殺菌劑中浸泡20-30min，取出外植體將其置于體積濃度為70%酒精中浸泡1-2min，再移入體積濃度為5-8%的氯化汞溶液中浸泡10-20min，取出放于體積濃度為10-25%的雙氧水和2-5滴吐溫的混合液中攪拌浸泡20-30min后，最后用無菌水洗3-4次，每次沖洗3-5min；將外植體裁成帶至少1個腋芽，1.5-3cm長的莖段，視莖段木質化程度分類置放容器內，備用；將步驟（2）得到的外植體接種于誘導培養基中；所述的誘導培養基為：改良1/2MS培養基+IBA0.5-1.5mg·L-1+MT1.0-3.0mg·L-1+6-BA1.0-3.0mg·L-1+葡萄糖30g·L-1+瓊脂3.5g·L-1+0.1-0.3%廣譜殺菌劑；初始芽誘導培養周期為：20-30天，置于溫度：20±3℃，光照培養時間為：16h，光照強度為：≤1000lx的環境中進行初始芽誘導培養，獲得生長健壯、活力旺盛的紅錐初始芽。初始芽萌動率在90%以上。以上所述的改良MS培養基的組成為：KNO31350mg·L-1；NH4NO3650mg·L-1；CaCl2·2H2O180mg·L-1；MgSO4·7H2O380mg·L-1；Ca(NO3)2·4H2O460mg·L-1；KH2PO4220mg·L-1；MnSO4·H2O22.3mg·L-1；ZnSO4·7H2O8.6mg·L-1；CuSO4·5H2O0.025mg·L-1；H3BO36.2mg·L-1；Na2MoO4·2H2O0.025mg·L-1；KI0.83mg·L-1；CoCl2·6H2O0.025mg·L-1；維生素B11.5mg·L-1；維生素B60.6mg·L-1；煙酸0.5mg·L-1；甘氨酸2.0mg·L-1；肌醇200mg·L-1。優選的，以上適宜條件為：溫度：20±3℃，光照培養時間為：12h，光照強度為：≤1000lx。對比于現有技術，本專利技術的優點及積極效果如下：1、本專利技術選取當年紅錐生嫩枝為組培繁殖材料，外植體的萌芽條幼態化程度高，極大地提高了外植體的有效性，從而成功建立一種紅錐莖段組培方法，本方法對加快紅錐優質壯苗的生產，促進國家硬木用材快速發展，調整林業品種結構具有重大意義。2、本專利技術依次采用一定的濃度及消毒時間的廣譜殺菌劑、酒精、氯化汞、雙氧水和吐溫相配合的消毒處理的方式，無菌外植體獲取率高，達到90%以上。3、本專利技術使用優化誘導培養基及培養方式，外植體褐化少，初始芽發生率高，芽苗伸長快、活力旺盛，具有較好的經濟效益和社會效益。具體實施方式下面結合具體實施例對本專利技術進一步說明。實施例1：在至少連續3天晴朗的氣候里，采集紅錐的樹冠外圍生長健壯的當年生嫩枝作為外植體。將外植體用無菌水沖洗干凈后，置于體積濃度為0.1%的廣譜殺菌劑中浸泡30min，取出外植體將其置于體積濃度為70%酒精中浸泡1min，再移入體積濃度為5%的氯化汞溶液中浸泡20min，取出放于體積濃度為10%的雙氧水和2滴吐溫的混合液中攪拌浸泡30min后，最后用無菌水洗3次，每次沖洗5min；將外植體裁成帶至少1個腋芽，1.5-2.0cm長的莖段，視莖段木質化程度分類置放容器內，備用；將消毒處理后得到的外植體接種于誘導培養基中；所述的誘導培養基為：改良1/2MS培養基+IBA0.5mg·L-1+MT1.0mg·L-1+6-BA1.0mg·L-1+葡萄糖30g·L-1+瓊脂3.5g·L-1+0.1%廣譜殺菌劑；初始芽誘導培養周期為：20-35天，置于溫度：20±3℃，光照培養時間為：12h，光照強度為：≤1000lx的環境中進行初始芽誘導培養，獲得生長健壯、活力旺盛的紅錐初始芽，初始芽萌動率95%。所述的改良MS培養基的組成為：KNO31350mg·L-1；NH4NO3650mg·L-1；CaCl2·2H2O180mg·L-1；MgSO4·7H2O380mg·L-1；Ca(NO3)2·4H2O460mg·L-1；KH2PO4220mg·L-1；MnSO4·H2O22.3mg·L-1；ZnSO4·7H2O8.6mg·L-1；CuSO4·5H2O0.025mg·L-1；H3BO36.2mg·L-1；Na2MoO4·2H2O0.025mg·L-1；KI0.83mg·L-1；CoCl2·6H2O0.025mg·L-1；維生素B11.5mg·L-1；維生素B60.6mg·L-1；煙酸0.5mg·L-1；甘氨酸2.0mg·L-1；肌醇200mg·L-1。實施例2：在至少連續3本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種紅錐無菌外植體制備及初始芽誘導方法，其特征在于：包括外植體準備、外植體消毒處理以及初始芽誘導工序，采集紅錐當年生嫩枝作為外植體，進行消毒處理后，獲得的無菌外植體接種于初始芽誘導培養基中，在適宜環境中培養20?30天后，獲得生長快、活力旺盛的紅錐初始芽，其操作步驟如下：（1）外植體準備：在至少連續3天晴朗的氣候里，采集紅錐的樹冠外圍生長健壯的當年生嫩枝作為外植體；外植體消毒處理：將外植體用無菌水沖洗干凈后，置于體積濃度為0.1?0.3?%的廣譜殺菌劑中浸泡20?30?min，取出外植體將其置于體積濃度為70?%酒精中浸泡1?2?min，再移入體積濃度為5?8?%的氯化汞溶液中浸泡10?20?min，取出放于體積濃度為10?25?%的雙氧水和2?5滴吐溫的混合液中攪拌浸泡20?30?min后，最后用無菌水洗3?4次，每次沖洗3?5?min；將外植體裁成帶至少1個腋芽，1.5?3cm長的莖段，視莖段木質化程度分類置放容器內，備用；（3）初始芽誘導：將步驟（2）得到的外植體接種于誘導培養基中；所述的誘導培養基為：改良1/2MS培養基?+?IBA?0.5?1.5?mg·L

【技術特征摘要】
1.一種紅錐無菌外植體制備及初始芽誘導方法，其特征在于：包括外植體準備、外植體消毒處理以及初始芽誘導工序，采集紅錐當年生嫩枝作為外植體，進行消毒處理后，獲得的無菌外植體接種于初始芽誘導培養基中，在適宜環境中培養20-30天后，獲得生長快、活力旺盛的紅錐初始芽，其操作步驟如下：（1）外植體準備：在至少連續3天晴朗的氣候里，采集紅錐的樹冠外圍生長健壯的當年生嫩枝作為外植體；外植體消毒處理：將外植體用無菌水沖洗干凈后，置于體積濃度為0.1-0.3%的廣譜殺菌劑中浸泡20-30min，取出外植體將其置于體積濃度為70%酒精中浸泡1-2min，再移入體積濃度為5-8%的氯化汞溶液中浸泡10-20min，取出放于體積濃度為10-25%的雙氧水和2-5滴吐溫的混合液中攪拌浸泡20-30min后，最后用無菌水洗3-4次，每次沖洗3-5min；將外植體裁成帶至少1個腋芽，1.5-3cm長的莖段，視莖段木質化程度分類置放容器內，備用；（3）初始芽誘導：將步驟（2）得到的外植體接種于誘導培養基中；所述的誘導培養基為：改良1/2MS培養基+IBA0.5-1.5mg·L-1+MT1.0-3.0mg·L-1+6-BA1.0-3.0mg·L-1+葡萄糖30g·L-1+...

【專利技術屬性】
技術研發人員：唐春艷，陳素云，
申請(專利權)人：唐春艷，陳素云，
類型：發明
國別省市：廣西,45