一種檢測革蘭氏陰性細菌耐藥基因的基因芯片試劑盒制造技術

本發明專利技術公開了一種檢測革蘭氏陰性細菌耐藥基因的基因芯片試劑盒。本發明專利技術所提供的試劑盒中含有用于檢測革蘭氏陰性細菌耐藥基因的引物對組，由10個引物對組成，其序列為序列表中序列1-20；同時所述試劑盒中還含有固定有序列21-30所示10個單鏈DNA探針的雜交芯片。本發明專利技術提供的試劑盒支持高通量、快速、準確地檢測多個革蘭氏陰性細菌耐藥基因，對中國人群進行篩查，能有效地起到準確診斷、耐藥溯源、耐藥控制等作用，從而抗生素使用量，減少耐藥產生。

Gene chip kit for detecting gram negative bacteria resistance genes

The invention discloses a gene chip kit for detecting gram negative bacteria resistance genes. The kit provided by the invention contains for the detection of gram negative bacteria resistance gene primer group by 10 primer pairs. The sequence of the sequence in the sequence table 1-20; at the same time the kit also contains a fixed sequence of 21-30 shows 10 single stranded DNA probe hybridization chip. The kit provided by the invention supports high-throughput, rapid and accurate detection of multidrug resistant gram negative bacterial genes, screening for China people, can effectively play the accurate diagnosis and drug resistance, resistance control traceability, and the usage of antibiotics, reducing the resistance of production.

【技術實現步驟摘要】
一種檢測革蘭氏陰性細菌耐藥基因的基因芯片試劑盒
本專利技術屬于核酸擴增
，涉及一種檢測革蘭氏陰性細菌耐藥基因的基因芯片試劑盒。
技術介紹
細菌耐藥基因檢測具有重要臨床意義。臨床診斷中存在抗生素的用量大、起點高、種類較為隨意的缺陷，從而導致耐藥菌種的產生和流行。目前用于耐藥基因檢測仍較為傳統，大致有生理生化試驗、血清學試驗、藥敏試驗等后加以聚合酶鏈式反應(PCR)擴增相應基因的方法，而上述檢測方法需要時間長，方法操作煩瑣、報告結果慢、通量低，且往往先鑒定出菌種，才能相應的進行藥敏等后續試驗，因而難以適應臨床治療的需要。因此開發快速高通量的分子診斷技術檢測，可以協助快速診斷，指導及時準確用藥。生物芯片技術是近年來在生命科學領域中迅速發展并成熟的一項高新技術，主要是通過微加工技術和微電子技術在固相芯片表面構建的微型生物化學分析系統，可實現對細胞、蛋白質、核酸以及其他多種生物成份的準確、快速、大量信息的檢測。生物芯片的主要特點是高通量、微型化和自動化。
技術實現思路
本專利技術的第一個目的是提供一種用于檢測革蘭氏陰性細菌耐藥基因的引物對組。本專利技術所提供的用于檢測革蘭氏陰性細菌耐藥基因的引物對組，由如下10個引物對組成：1)如下(a1)或(a2)所示的引物對，記為引物對1：(a1)由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(a2)由將序列表中序列1和序列2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(a1)中所述引物對功能相同的引物對；2)如下(b1)或(b2)所示的引物對，記為引物對2：(b1)由序列表中序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(b2)由將序列表中序列3和序列4經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(b1)中所述引物對功能相同的引物對；3)如下(c1)或(c2)所示的引物對，記為引物對3：(c1)由序列表中序列5和序列6所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(c2)由將序列表中序列5和序列6經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(c1)中所述引物對功能相同的引物對；4)如下(d1)或(d2)所示的引物對，記為引物對4：(d1)由序列表中序列7和序列8所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(d2)由將序列表中序列7和序列8經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(d1)中所述引物對功能相同的引物對；5)如下(e1)或(e2)所示的引物對，記為引物對5：(e1)由序列表中序列9和序列10所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(e2)由將序列表中序列9和序列10經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(e1)中所述引物對功能相同的引物對；6)如下(f1)或(f2)所示的引物對，記為引物對6：(f1)由序列表中序列11和序列12所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(f2)由將序列表中序列11和序列12經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(f1)中所述引物對功能相同的引物對；7)如下(g1)或(g2)所示的引物對，記為引物對7：(g1)由序列表中序列13和序列14所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(g2)由將序列表中序列13和序列14經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(g1)中所述引物對功能相同的引物對；8)如下(h1)或(h2)所示的引物對，記為引物對8：(h1)由序列表中序列15和序列16所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(h2)由將序列表中序列15和序列16經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(h1)中所述引物對功能相同的引物對；9)如下(i1)或(i2)所示的引物對，記為引物對9：(i1)由序列表中序列17和序列18所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(i2)由將序列表中序列17和序列18經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(i1)中所述引物對功能相同的引物對；10)如下(j1)或(j2)所示的引物對，記為引物對10：(j1)由序列表中序列19和序列20所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(j2)由將序列表中序列19和序列20經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(j1)中所述引物對功能相同的引物對。其中，所述引物對1用于擴增blaDHA-1基因；所述引物對2用于擴增blaOXA-23基因；所述引物對3用于擴增blaOXA-24基因；所述引物對4用于擴增blaOXA-58基因；所述引物對5用于擴增blaKPC-1基因；所述引物對6用于擴增blaIMP-4基因；所述引物對7用于擴增blaVIM-8基因；所述引物對8用于擴增blaNDM-1基因；所述引物對9用于擴增blaCTX-M-1基因；所述引物對10用于擴增blaCTX-M-9基因。本專利技術的第二個目的是提供一種用于檢測革蘭氏陰性細菌耐藥基因的成套單鏈DNA。本專利技術所提供的用于檢測革蘭氏陰性細菌耐藥基因的成套單鏈DNA，具體由探針組和所述引物對組組成；所述探針組由如下10個單鏈DNA探針組成：序列表中序列21所示的單鏈DNA探針1；序列表中序列22所示的單鏈DNA探針2；序列表中序列23所示的單鏈DNA探針3；序列表中序列24所示的單鏈DNA探針4；序列表中序列25所示的單鏈DNA探針5；序列表中序列26所示的單鏈DNA探針6；序列表中序列27所示的單鏈DNA探針7；序列表中序列28所示的單鏈DNA探針8；序列表中序列29所示的單鏈DNA探針9；序列表中序列30所示的單鏈DNA探針10。其中，所述單鏈DNA探針1用于檢測所述引物對1的擴增結果；所述單鏈DNA探針2用于檢測所述引物對2的擴增結果；所述單鏈DNA探針3用于檢測所述引物對3的擴增結果；所述單鏈DNA探針4用于檢測所述引物對4的擴增結果；所述單鏈DNA探針5用于檢測所述引物對5的擴增結果；所述單鏈DNA探針6用于檢測所述引物對6的擴增結果；所述單鏈DNA探針7用于檢測所述引物對7的擴增結果；所述單鏈DNA探針8用于檢測所述引物對8的擴增結果；所述單鏈DNA探針9用于檢測所述引物對9的擴增結果；所述單鏈DNA探針10用于檢測所述引物對10的擴增結果。本專利技術的第三個目的是提供一種用于檢測革蘭氏陰性細菌耐藥基因的試劑盒。本專利技術所提供的用于檢測革蘭氏陰性細菌耐藥基因的試劑盒，含有所述引物對組，以及雜交芯片；所述雜交芯片是按照包括如下步驟的方法制備獲得的：將通式為“NH2-(T)n-雜交探針序列”的3種單鏈檢測探針分別通過氨基與醛基的反應固定到醛基修飾化的固相載體(如玻片)上，獲得所述雜交芯片；所述通式中的(T)n表示n個連續的T，n為大于等于5，且小于等于30的整數；所述通式中對應于所述10種單鏈檢測探針本文檔來自技高網...

【技術保護點】
用于檢測革蘭氏陰性細菌耐藥基因的引物對組，由如下10個引物對組成：1)如下(a1)或(a2)所示的引物對，記為引物對1：(a1)由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(a2)由將序列表中序列1和序列2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(a1)中所述引物對功能相同的引物對；2)如下(b1)或(b2)所示的引物對，記為引物對2：(b1)由序列表中序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(b2)由將序列表中序列3和序列4經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(b1)中所述引物對功能相同的引物對；3)如下(c1)或(c2)所示的引物對，記為引物對3：(c1)由序列表中序列5和序列6所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(c2)由將序列表中序列5和序列6經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(c1)中所述引物對功能相同的引物對；4)如下(d1)或(d2)所示的引物對，記為引物對4：(d1)由序列表中序列7和序列8所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(d2)由將序列表中序列7和序列8經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(d1)中所述引物對功能相同的引物對；5)如下(e1)或(e2)所示的引物對，記為引物對5：(e1)由序列表中序列9和序列10所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(e2)由將序列表中序列9和序列10經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(e1)中所述引物對功能相同的引物對；6)如下(f1)或(f2)所示的引物對，記為引物對6：(f1)由序列表中序列11和序列12所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(f2)由將序列表中序列11和序列12經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(f1)中所述引物對功能相同的引物對；7)如下(g1)或(g2)所示的引物對，記為引物對7：(g1)由序列表中序列13和序列14所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(g2)由將序列表中序列13和序列14經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(g1)中所述引物對功能相同的引物對；8)如下(h1)或(h2)所示的引物對，記為引物對8：(h1)由序列表中序列15和序列16所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(h2)由將序列表中序列15和序列16經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(h1)中所述引物對功能相同的引物對；9)如下(i1)或(i2)所示的引物對，記為引物對9：(i1)由序列表中序列17和序列18所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(i2)由將序列表中序列17和序列18經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(i1)中所述引物對功能相同的引物對；10)如下(j1)或(j2)所示的引物對，記為引物對10：(j1)由序列表中序列19和序列20所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(j2)由將序列表中序列19和序列20經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(j1)中所述引物對功能相同的引物對。...

【技術特征摘要】
1.用于檢測革蘭氏陰性細菌耐藥基因的引物對組，由如下10個引物對組成：1)如下(a1)或(a2)所示的引物對，記為引物對1：(a1)由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(a2)由將序列表中序列1和序列2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(a1)中所述引物對功能相同的引物對；2)如下(b1)或(b2)所示的引物對，記為引物對2：(b1)由序列表中序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(b2)由將序列表中序列3和序列4經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(b1)中所述引物對功能相同的引物對；3)如下(c1)或(c2)所示的引物對，記為引物對3：(c1)由序列表中序列5和序列6所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(c2)由將序列表中序列5和序列6經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(c1)中所述引物對功能相同的引物對；4)如下(d1)或(d2)所示的引物對，記為引物對4：(d1)由序列表中序列7和序列8所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(d2)由將序列表中序列7和序列8經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(d1)中所述引物對功能相同的引物對；5)如下(e1)或(e2)所示的引物對，記為引物對5：(e1)由序列表中序列9和序列10所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(e2)由將序列表中序列9和序列10經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(e1)中所述引物對功能相同的引物對；6)如下(f1)或(f2)所示的引物對，記為引物對6：(f1)由序列表中序列11和序列12所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(f2)由將序列表中序列11和序列12經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(f1)中所述引物對功能相同的引物對；7)如下(g1)或(g2)所示的引物對，記為引物對7：(g1)由序列表中序列13和序列14所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(g2)由將序列表中序列13和序列14經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(g1)中所述引物對功能相同的引物對；8)如下(h1)或(h2)所示的引物對，記為引物對8：(h1)由序列表中序列15和序列16所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(h2)由將序列表中序列15和序列16經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(h1)中所述引物對功能相同的引物對；9)如下(i1)或(i2)所示的引物對，記為引物對9：(i1)由序列表中序列17和序列18所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(i2)由將序列表中序列17和序列18經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(i1)中所述引物對功能相同的引物對；10)如下(j1)或(j2)所示的引物對，記為引物對10：(j1)由序列表中序列19和序列20所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；(j2)由將序列表中序列19和序列20經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(j1)中所述引物對功能相同的引物對。2.用于檢測革蘭氏陰性細菌耐藥基因的成套單鏈DNA，由探針組和權利要...

【專利技術屬性】
技術研發人員：王輝，姜可偉，張巖，王杉，
申請(專利權)人：北京大學人民醫院，
類型：發明
國別省市：北京,11