一種長梗黃精組織培養(yǎng)與快速繁殖的方法技術

本發(fā)明專利技術屬于植物培養(yǎng)技術領域，具體涉及長梗黃精組織培養(yǎng)與快速繁殖的方法。一種長梗黃精組織培養(yǎng)與快速繁殖的方法，該方法包括以下步驟：（1）長梗黃精花蕾的消毒和接種；（2）叢生芽的誘導；（3）不定芽的增殖；（4）再生植株的生根培養(yǎng)；（5）煉苗移栽。采用本發(fā)明專利技術的方法，較已經報道的文獻，能夠減少縮短前處理時間、外植體污染率低，縮短不定芽發(fā)生時間，從而更快獲得長梗黃精再生植株，利于產業(yè)化生產。采用本發(fā)明專利技術方法，長梗黃精叢生芽的不定芽誘導率高達90.0%，不定芽數8.4，不定芽增殖倍數可達7.7，植株移栽成活率可達95%以上。

Method for tissue culture and rapid propagation of Polygonatum sibiricum

The invention belongs to the technical field of plant culture, in particular to a method for tissue culture and rapid propagation of long stem Polygonatum sibiricum. A method of culturing filipes tissue and rapid propagation, the method comprises the following steps: (1) filipes bud disinfection and inoculation; (2) bud induction; (3) proliferation of adventitious bud; rooting of regenerated plants (4); (5) transplanting. The method of the invention is already reported in the literature, can shorten the treatment time, reduce the former explants low contamination rate, shorten regeneration time, thus obtained faster filipes regeneration, is conducive to industrial production. By adopting the method of the invention, the induction rate of adventitious buds of the shoots with long stem, yellow and fine shoots is as high as 90%, the number of adventitious buds is 8.4, the multiplication rate of adventitious buds is up to 7.7, and the survival rate of plant transplanting can reach more than 95%.

【技術實現步驟摘要】
一種長梗黃精組織培養(yǎng)與快速繁殖的方法
本專利技術屬于植物培養(yǎng)
，具體涉及長梗黃精組織培養(yǎng)與快速繁殖的方法。
技術介紹
長梗黃精(PolygonatumfilipesMerr.)，為百合科黃精屬多年生草本植物，分布于江蘇、安徽、浙江、江西、湖南、福建、廣東(北部)，生于林下、灌叢或草坡的陰濕肥沃土壤中，因其根狀莖在當地以黃精入藥而大量種植，同時也可食用。目前在生產中長梗黃精的繁殖采用種子和根狀莖，主要以根狀莖為主，存在著繁殖系數低、繁殖周期長的缺點，因此建立長梗黃精的組培快繁體系，是實現其產業(yè)化生產的又一有效途徑。目前對于百合科黃精屬開展的組織培養(yǎng)主要集中于長梗黃精和黃精，采用的外植體主要為根狀莖或由根狀莖產生的芽。由于根狀莖生長于地下，表面帶有很多雜菌，且還存在內生菌，故其污染率的控制相對較難，此外消毒后需要較長時間才能誘導出不定芽。基本上所有黃精屬植物組織培養(yǎng)的報道采用的最佳基本培養(yǎng)基均是不同濃度的MS培養(yǎng)基，其中誘導生根前的過程主要采用MS培養(yǎng)基，也有采用1/2MS進行不定芽誘導的報道；誘導生根時主要采用1/2MS培養(yǎng)基，也有采用MS培養(yǎng)基的和1/3MS培養(yǎng)基。黃精屬不定芽的誘導甚至愈傷組織的誘導經常用到了細胞分裂素6-BA，多篇文獻報道6-BA使用的最佳濃度為4.0mg/L；生根培養(yǎng)中單獨使用生長素或其組合，甚至有2，4-D可促進生根的報道。目前長梗黃精的組織培養(yǎng)和快速繁殖尚未見報道。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題是：針對現有技術存在的不足，提供一種成活率高，利于實現產業(yè)化生產的長梗黃精組織培養(yǎng)與快速繁殖的方法。為實現本專利技術之目的，采用以下技術方案予以實現：一種長梗黃精組織培養(yǎng)與快速繁殖的方法，該方法包括以下步驟：(1)長梗黃精花蕾的消毒和接種于當年5月取尚未開花的長梗黃精的花蕾，放入冰箱4℃低溫冷藏0-48h，取出后加入適量的洗潔精溶液浸泡2min，用流水沖洗0.5-1.0h后，在超凈臺里將莖段轉入70％的酒精溶液中浸泡1min，用無菌水沖洗3次，浸入滴加有5滴吐溫-80，質量分數為0.1％的HgCl2溶液內浸泡消毒9-10min，然后用無菌水充分浸洗3次，得到消毒完的外植體材料。(2)叢生芽的誘導將上一步得到的外植體材料放到無菌濾紙上，切去頭尾，去除雄蕊和雌蕊，將花瓣切成2cm2大小，接于添加TDZ0-2.0mg/L，NAA0-1.0mg/L，AC0-2.0g/L的MS基本培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基中的蔗糖添加量為30g/L，瓊脂添加量為8.0g/L，pH為5.8-6.0，培養(yǎng)基曾于121℃下滅菌20min，下同。接好花瓣的培養(yǎng)基置先于黑暗中培養(yǎng)0-7d，培養(yǎng)溫度為28±2℃；隨后轉入光照培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為(28±2)℃，光照時間為14h光/10h暗，光照強度30-40μmol/(m2·s)；(3)不定芽的增殖將上一步誘導獲得的不定芽叢切成2-3個不定芽的芽塊，接種到添加有TDZ0-2.0mg/L，6-BA0-5.0mg/L，CH0-1.0mg/L，AC0-2.0g/L的MS基本培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為(28±2)℃，光照時間為14h光/10h暗，光照強度30-40μmol/(m2·s)；(4)再生植株的生根培養(yǎng)切取葉片嫩綠、生長旺盛且葉片3-4枚的不定芽，插入添加有6-BA0-4.0，NAA0-2.0mg/L，香蕉泥0-150g/L的12.5％-100％濃度的MS基本培養(yǎng)基中生根，培養(yǎng)基中添加的蔗糖為20-30g/L，瓊脂添加量為8.0g/L，pH5.8-6.0，并曾于121℃下滅菌20min；(5)煉苗移栽待生根的組培苗的苗高長至5cm以上，根長超過5cm時，松開組培瓶的瓶蓋，往瓶中注入少量無菌水以防止培養(yǎng)基干裂，于6h后半挪開瓶蓋，并添加無菌水，再過18h，移走瓶蓋，讓30-40μmol/(m2·s)光強的燈光直照再生植株培養(yǎng)2d，期間加無菌水若干次。然后小心地將培養(yǎng)基搗碎，拿出再生植株，用流水小心將殘留的瓊脂沖洗干凈，將植株定植于曾消毒過的珍珠巖，菜園土重量比為1：100-200)的混合基質中，澆透水并用透明的聚乙烯塑料薄膜覆蓋以保溫保濕，室內溫度控制在24-28℃之間。3d后揭開聚乙烯塑料薄膜四角，次日將聚乙烯塑料薄膜全部揭開，待新葉展開后即可帶土移栽至大田。作為優(yōu)選方案：所述步驟(1)中接種的材料為尚未開花的花蕾，并于冰箱4℃低溫冷藏12-24h。作為優(yōu)選方案：所述步驟(2)中的MS培養(yǎng)基添加有TDZ0.5mg/L，NAA0.2mg/L，AC0.5-1.0mg/L，在接種完花瓣后于黑暗中培養(yǎng)3-5d后再轉入光照培養(yǎng)。作為優(yōu)選方案：所述步驟(3)中MS培養(yǎng)基添加有TDZ0.05mg/L，6-BA2.0mg/L，CH0.3-0.4g/L，AC0.5-1.0mg/L。作為優(yōu)選方案：所述步驟(4)中生根培養(yǎng)基配方為50％MS，6-BA0.2，NAA0.5mg/L，香蕉泥80-100g/L。與現有技術相比較，本專利技術的有益效果是：采用本專利技術的方法，較已經報道的文獻，能夠減少縮短前處理時間、外植體污染率低，縮短不定芽發(fā)生時間，從而更快獲得長梗黃精再生植株，利于產業(yè)化生產。采用本專利技術方法，長梗黃精叢生芽的不定芽誘導率高達90.0％，不定芽數8.4，不定芽增殖倍數可達7.7，植株移栽成活率可達95％以上。本專利技術中縮略詞：AC活性炭6-BA6-芐氨基腺嘌呤CH水解酪蛋白NAA萘乙酸TDZ噻苯隆(脫葉脲)具體實施方式實施例1一種長梗黃精組織培養(yǎng)與快速繁殖的方法，依次包括以下步驟：(1)長梗黃精花蕾的消毒于當年5月取尚未開花的長梗黃精的花蕾，放入冰箱4℃低溫冷藏12-24h，取出后加入適量的洗潔精溶液浸泡2min，用流水沖洗0.5-1.0h后，在超凈臺里將莖段轉入70％的酒精溶液中浸泡1min，用無菌水沖洗3次，浸入滴加有5滴吐溫-80，質量分數為0.1％的HgCl2溶液內浸泡消毒9-10min，然后用無菌水充分浸洗3次，得到消毒完的外植體材料，消毒成功率可達90％以上。(2)叢生芽的誘導將上一步得到的外植體材料放到無菌濾紙上，切去頭尾，去除雄蕊和雌蕊，將花瓣切成2cm2大小，接于添加TDZ0.5mg/L，NAA0.2mg/L，AC0.5-1.0g/L的MS基本培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基中的蔗糖添加量為30g/L，瓊脂添加量為8.0g/L，pH為5.8-6.0，培養(yǎng)基曾于121℃下滅菌20min，下同。接好花瓣的培養(yǎng)基置先于黑暗中培養(yǎng)3-5d，培養(yǎng)溫度為28±2℃；隨后轉入光照培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為(28±2)℃，光照時間為14h光/10h暗，光照強度30-40μmol/(m2·s)；培養(yǎng)15d時開始出現花瓣切片有隆起，20d時可發(fā)現有不定芽叢，30d時不定芽可長到3cm左右，不定芽的誘導率達90.0％，誘導的不定芽叢的不定芽數有8.4。(3)不定芽的增殖將上一步誘導獲得的不定芽叢切成2-3個不定芽的芽塊，接種到添加有TDZ0.05mg/L，6-BA2.0mg/L，CH0.3-0.4mg/L，AC0.5-1.0g/L的MS基本培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為(28±2)℃，光照時間為14h光/10h暗，光照強度30-40μmol/(m2·s)；培養(yǎng)30d后統(tǒng)本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種長梗黃精組織培養(yǎng)與快速繁殖的方法，其特征在于該方法包括以下步驟：1）長梗黃精花蕾的消毒和接種于當年5月取尚未開花的長梗黃精的花蕾，放入冰箱4℃低溫冷藏0?48?h，取出后加入適量的洗潔精溶液浸泡2?min，用流水沖洗0.5?1.0?h后，在超凈臺里將莖段轉入70%的酒精溶液中浸泡1?min，用無菌水沖洗3次，浸入滴加有5滴吐溫?80，質量分數為0.1%的?HgCl

【技術特征摘要】
1.一種長梗黃精組織培養(yǎng)與快速繁殖的方法，其特征在于該方法包括以下步驟：1）長梗黃精花蕾的消毒和接種于當年5月取尚未開花的長梗黃精的花蕾，放入冰箱4℃低溫冷藏0-48h，取出后加入適量的洗潔精溶液浸泡2min，用流水沖洗0.5-1.0h后，在超凈臺里將莖段轉入70%的酒精溶液中浸泡1min，用無菌水沖洗3次，浸入滴加有5滴吐溫-80，質量分數為0.1%的HgCl2溶液內浸泡消毒9-10min，然后用無菌水充分浸洗3次，得到消毒完的外植體材料；2）叢生芽的誘導將上一步得到的外植體材料放到無菌濾紙上，切去頭尾，去除雄蕊和雌蕊，將花瓣切成2cm2大小，接于添加TDZ0-2.0mg/L，NAA0-1.0mg/L，AC0-2.0g/L的MS基本培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基中的蔗糖添加量為30g/L，瓊脂添加量為8.0g/L，pH為5.8-6.0，培養(yǎng)基曾于121℃下滅菌20min；接好花瓣的培養(yǎng)基置先于黑暗中培養(yǎng)0-7d，培養(yǎng)溫度為28±2℃；隨后轉入光照培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為28±2℃，光照時間為14h光/10h暗，光照強度30-40μmol/(m2·s)；3）不定芽的增殖將上一步誘導獲得的不定芽叢切成2-3個不定芽的芽塊，接種到添加有TDZ0-2.0mg/L，6-BA0-5.0mg/L，CH0-1.0mg/L，AC0-2.0g/L的MS基本培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為28±2℃，光照時間為14h光/10h暗，光照強度30-40μmol/(m2·s)；4）再生植株的生根培養(yǎng)切取葉片嫩綠、生長旺盛且葉片3-4枚的不定芽，插入添加有6-BA0-4.0，NAA0-2.0mg/L，香蕉泥0-150g/L的12.5%-100%濃度的MS基本培養(yǎng)基中生根，培養(yǎng)...

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：孫駿威，趙進，周榮鑫，
申請(專利權)人：中國計量大學，
類型：發(fā)明
國別省市：浙江,33