一種甘草子葉誘導(dǎo)組織培養(yǎng)方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供一種甘草子葉誘導(dǎo)組織培養(yǎng)方法，其以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加6?BA?(6?芐氨基腺嘌呤)、2,4?D（2,4?二氯苯氧乙酸）、活性炭、硝酸鈰、維生素、瓊脂粉和白砂糖，在后期誘導(dǎo)培養(yǎng)中添加增強(qiáng)顏色光源，極大地提高了甘草子葉的誘導(dǎo)率，本發(fā)明專利技術(shù)具有誘導(dǎo)率高低的優(yōu)點(diǎn)。

Method for inducing tissue culture of Glycyrrhiza cotyledon

The invention provides a licorice from Cotyledon Explants of tissue culture method, with MS as basic medium, adding 6 BA (6 benzylaminopurine), 2,4 D (2,4 two chlorophenoxyacetic acid), activated carbon, cerium nitrate, vitamin, agar powder and white sugar, late in the trap the color of the light source added enhanced training, greatly improve the induction rate of cotyledons of licorice, the invention has the advantages of high induction rate.

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種甘草子葉誘導(dǎo)組織培養(yǎng)方法
本專利技術(shù)屬于甘草組織培養(yǎng)
，尤其涉及一種甘草子葉誘導(dǎo)組織培養(yǎng)方法。
技術(shù)介紹
甘草，（學(xué)名：GlycyrrhizauralensisFisch）別名：國(guó)老、甜草、烏拉爾甘草、甜根子。豆科、甘草屬多年生草本，根與根狀莖粗壯，是一種補(bǔ)益中草藥。對(duì)人體很好的一種藥，藥用部位是根及根莖，藥材性狀根呈圓柱形，長(zhǎng)25～100厘米，直徑0.6～3.5厘米。外皮松緊不一，表面紅棕色或灰棕色。根莖呈圓柱形，表面有芽痕，斷面中部有髓。氣微，味甜而特殊。功能主治清熱解毒、祛痰止咳、脘腹等。喜陰暗潮濕，日照長(zhǎng)氣溫低的干燥氣候。甘草多生長(zhǎng)在干旱、半干旱的荒漠草原、沙漠邊緣和黃土丘陵地帶。根和根狀莖供藥用。傳統(tǒng)的甘草獲取方法是采挖葉生植物資源，造成水土流失和嚴(yán)重土壤沙漠化。另外，甘草種子主要來(lái)自野生甘草，其品種混雜，種子稀缺，發(fā)芽率極低，野生資源不適應(yīng)規(guī)?；蜆?biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)的需要。同時(shí)由于人們破壞性地對(duì)葉生甘草采挖，使野生植物幾乎滅絕，對(duì)甘草的保護(hù)性利用迫在眉睫，但由于甘草種植發(fā)芽率不高和人們對(duì)其此生代謝物的需求，從而使甘草的組織培養(yǎng)對(duì)研究和生產(chǎn)具有重要作用。稀土元素是17種特殊的元素的統(tǒng)稱，它的得名是因?yàn)槿鸬淇茖W(xué)家在提取稀土元素時(shí)應(yīng)用了稀土化合物，所以得名稀土元素。然而稀土是歷史遺留下來(lái)的名稱，稀土是從18世紀(jì)末開(kāi)始陸續(xù)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)時(shí)人們常把不溶于水的固體氧化物稱為土，例如，將氧化鋁稱為“陶土”，氧化鈣稱為”堿土“等。稀土一般是以氧化物狀態(tài)分離出來(lái)的，當(dāng)時(shí)比較稀少，因而得名為稀土（RareEarth，簡(jiǎn)稱RE或R），然而經(jīng)過(guò)大量的科學(xué)研究，在組織培養(yǎng)當(dāng)中添加了稀土元素會(huì)大大地提高組織培養(yǎng)的質(zhì)量。鈰是周期系第ΙΙΙ族副族鑭系元素，一種稀土元素。原子序數(shù)58。穩(wěn)定同位素：136、138、140、142。灰色金屬，有展性。密度：正方晶體6.9，立方晶體6.7。熔點(diǎn)799℃，沸點(diǎn)3426℃。鈰是一種銀灰色的活潑金屬，粉末在空氣中易自燃，易溶于酸。鈰的名稱來(lái)源于小行星谷神星的英文名。鈰在地殼中的含量約0.0046%，是稀土元素中豐度最高的。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
基于現(xiàn)有技術(shù)中甘草的需求量巨大但供給品質(zhì)參差不齊，且現(xiàn)有培養(yǎng)基的誘導(dǎo)效率低的問(wèn)題，本專利技術(shù)提供一種甘草子葉誘導(dǎo)組織培養(yǎng)方法，其以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）、活性炭、硝酸鈰、維生素、瓊脂粉和白砂糖，在后期誘導(dǎo)培養(yǎng)中添加增強(qiáng)顏色光源，極大地提高了甘草子葉的誘導(dǎo)率，本專利技術(shù)具有誘導(dǎo)率高低的優(yōu)點(diǎn)。一種甘草子葉誘導(dǎo)組織培養(yǎng)方法，其包括以下步驟：步驟S10，按以下配方配制培養(yǎng)基：以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)的濃度為0.6mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的濃度為3mg/L、活性炭的濃度為0.1mg/L、硝酸鈰的濃度為3g/L，維生素的濃度為0.3mg/L，瓊脂粉的濃度為10g/L、白砂糖的濃度為30g/L；步驟S20，選擇品質(zhì)優(yōu)良、健康的甘草無(wú)菌苗作為母本，用手術(shù)刀將無(wú)菌子葉切出，備用；步驟S30，使用鑷子將子葉以傷口向下的豎直方向插入培養(yǎng)基中，將裝有子葉的組培瓶密封取出，并轉(zhuǎn)移到組培室中；步驟S40，將組培室中的環(huán)境溫度調(diào)整為25℃～30℃，黑暗培養(yǎng)一周，一周后調(diào)整光源為2000～2500Lxs，光照時(shí)間為光照12小時(shí)/黑暗12小時(shí)；步驟S50，在接種后一周添加80%紅色增強(qiáng)光源和20%藍(lán)色增強(qiáng)光源。優(yōu)選地，所述的步驟S10中還包括步驟S11，對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行121℃的高溫蒸汽滅菌20分鐘。優(yōu)選地，所述的步驟S50中的增強(qiáng)光源是LED燈，紅色增強(qiáng)光源是紅色LED燈，藍(lán)色增強(qiáng)光源藍(lán)色LED燈。優(yōu)選地，所述的步驟S50中的紅色光源是波段為650nm-670nm的紅光，藍(lán)色光源是波段為450nm-470nm的藍(lán)光。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本專利技術(shù)作進(jìn)一步的描述。一種甘草子葉誘導(dǎo)組織培養(yǎng)方法，其包括以下步驟：步驟S10，按以下配方配制培養(yǎng)基：以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)的濃度為0.6mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的濃度為3mg/L、活性炭的濃度為0.1mg/L、硝酸鈰的濃度為3g/L，維生素的濃度為0.3mg/L，瓊脂粉的濃度為10g/L、白砂糖的濃度為30g/L；步驟S20，選擇品質(zhì)優(yōu)良、健康的甘草無(wú)菌苗作為母本，用手術(shù)刀將無(wú)菌子葉切出，備用；步驟S30，使用鑷子將子葉以傷口向下的豎直方向插入培養(yǎng)基中，將裝有子葉的組培瓶密封取出，并轉(zhuǎn)移到組培室中；步驟S40，將組培室中的環(huán)境溫度調(diào)整為28℃，黑暗培養(yǎng)一周，一周后調(diào)整光源為2500Lxs，光照時(shí)間為光照12小時(shí)/黑暗12小時(shí)；步驟S50，在接種后一周添加80%紅色增強(qiáng)光源和20%藍(lán)色增強(qiáng)光源。作為優(yōu)選實(shí)施例，所述的步驟S10中還包括步驟S11，對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行121℃的高溫蒸汽滅菌20分鐘。作為優(yōu)選實(shí)施例，所述的步驟S50中的增強(qiáng)光源是LED燈，紅色增強(qiáng)光源是紅色LED燈，藍(lán)色增強(qiáng)光源藍(lán)色LED燈。作為優(yōu)選實(shí)施例，所述的步驟S50中的紅色光源是波段為660nm的紅光，藍(lán)色光源是波段為460nm的藍(lán)光。。將已經(jīng)消毒的外植體接種到培養(yǎng)基中進(jìn)行常規(guī)組織培養(yǎng)作為對(duì)照組，然后設(shè)置實(shí)驗(yàn)組使用本專利技術(shù)提供的組織培養(yǎng)方法，20天后統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)率得出對(duì)照組的誘導(dǎo)率為80%，實(shí)驗(yàn)組誘導(dǎo)率為91%，實(shí)驗(yàn)組誘導(dǎo)率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對(duì)照組。以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本專利技術(shù)的一種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)本專利技術(shù)專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本專利技術(shù)構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本專利技術(shù)的保護(hù)范圍。因此，本專利技術(shù)專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種甘草子葉誘導(dǎo)組織培養(yǎng)方法，其特征在于，其包括以下步驟：步驟S10，按以下配方配制培養(yǎng)基：以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加6?BA?(6?芐氨基腺嘌呤)的濃度為0.6mg/L、2,4?D（2,4?二氯苯氧乙酸）的濃度為3?mg/L、活性炭的濃度為0.1?mg/L、硝酸鈰的濃度為3g/L，維生素的濃度為0.3mg/L，瓊脂粉的濃度為10g/L、白砂糖的濃度為30g/L；步驟S20，選擇品質(zhì)優(yōu)良、健康的甘草無(wú)菌苗作為母本，用手術(shù)刀將無(wú)菌子葉切出，備用；步驟S30，使用鑷子將子葉以傷口向下的豎直方向插入培養(yǎng)基中，將裝有子葉的組培瓶密封取出，并轉(zhuǎn)移到組培室中；步驟S40，將組培室中的環(huán)境溫度調(diào)整為25℃～30℃，黑暗培養(yǎng)一周，一周后調(diào)整光源為2000～2500Lxs，光照時(shí)間為光照12小時(shí)/黑暗12小時(shí)；步驟S50，在接種后一周添加80%紅色增強(qiáng)光源和20%藍(lán)色增強(qiáng)光源。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種甘草子葉誘導(dǎo)組織培養(yǎng)方法，其特征在于，其包括以下步驟：步驟S10，按以下配方配制培養(yǎng)基：以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)的濃度為0.6mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的濃度為3mg/L、活性炭的濃度為0.1mg/L、硝酸鈰的濃度為3g/L，維生素的濃度為0.3mg/L，瓊脂粉的濃度為10g/L、白砂糖的濃度為30g/L；步驟S20，選擇品質(zhì)優(yōu)良、健康的甘草無(wú)菌苗作為母本，用手術(shù)刀將無(wú)菌子葉切出，備用；步驟S30，使用鑷子將子葉以傷口向下的豎直方向插入培養(yǎng)基中，將裝有子葉的組培瓶密封取出，并轉(zhuǎn)移到組培室中；步驟S40，將組培室中的環(huán)境溫度調(diào)整為25℃～30℃，黑暗培養(yǎng)一周，一周...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：不公告發(fā)明人，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：陳志育，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：廣東,44