一株具有解磷作用的類芽孢桿菌菌株T1-1及其應用制造技術

本發明專利技術屬于微生物技術領域，具體公開了一株具有解磷作用的類芽孢桿菌菌株T1?1及其應用。所述類芽孢桿菌菌株T1?1的保藏編號為CGMCC?No.14927。由該類芽孢桿菌菌株制備的微生物菌劑或微生物肥料，可對蔬菜的生長具有顯著的促進作用，能有效降低化學磷肥的使用量，可在農業生產中推廣使用。

A Bacillus sp. strain T1-1 with phosphate solubilizing effect and its application

The invention belongs to the field of microbial technology, and discloses a Bacillus sp. strain T1 1 with phosphate solubilizing effect and its application. The preservation number of the strain T1 CGMCC 1 is CGMCC. Microbial and microbial fertilizers produced by Bacillus subtilis can significantly promote the growth of vegetables, and can effectively reduce the use of chemical phosphate fertilizer, and can be used in agricultural production.

【技術實現步驟摘要】
一株具有解磷作用的類芽孢桿菌菌株T1-1及其應用
本專利技術屬于微生物
，具體地說，涉及一株具有解磷作用的類芽孢桿菌菌株及其應用。
技術介紹
溶磷細菌能分泌有機酸和磷酸酶，有機酸可將礦質磷轉化為可溶的磷酸二氫根和磷酸氫根離子，這個過程稱為礦質磷的降解；磷酸酶促進磷的礦化(水解)被植物有效利用?？梢?，溶細菌在促進植物磷素吸收方面起重要作用。采用微生物途徑提高土壤中磷元素的有效性，可增加土壤可溶性磷的營養水平，促進植物對磷的有效利用，改善土壤微生物環境。類芽孢桿菌具有存活期長和抗逆性強等特點，廣泛分布在不同的土壤和植物根際中，有的也可以侵入植物組織內部。該屬中的許多菌株以其固氮、溶磷能力以及對致病菌的抗性和對植物的促生作用使得其受到了研究者的廣泛關注。微生物肥料是指含有活的微生物，并通過微生物的特定作用給植物提供營養、調節植物生長的特定制品。微生物肥料是未來農林業可持續發展的重要方向之一。但是菌種單一、功能單一和保質期短等突出的問題仍然有待解決。
技術實現思路
為了解決現有技術中存在的問題，本專利技術的目的是提供一株具有解磷作用的類芽孢桿菌菌株T1-1及其制備的微生物菌劑或菌肥在蔬菜等種植中的應用。為了實現本專利技術目的，本專利技術的技術方案如下：第一方面，本專利技術提供了一株具有解磷作用的類芽孢桿菌菌株T1-1，經鑒定為類芽孢桿菌(Paenibacillussp.)，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵政編碼：100101)，保藏日期為2017年11月17日，保藏編號為CGMCCNo.14927。本專利技術提供的類芽孢桿菌菌株T1-1在LD固體培養基上生長良好，菌落米黃色，邊緣光滑沒有皺褶，直徑1mm-1.5mm，為革蘭氏陽性菌，生長溫度25-55℃，最佳生長溫度37℃，最適pH6.8-7.0。在不良條件下，菌體轉化產生芽孢，芽孢對不良環境抗逆性強，可短時間耐受100℃高溫。為了方便分析菌株的解磷能力，設計實驗室解磷試驗研究菌株對無機磷和有機磷的溶解，詳見實施例2-3。第二方面，本專利技術提供了一種含有類芽孢桿菌菌株T1-1的微生物菌劑或微生物肥料。進一步地，所述微生物菌劑可以為所述類芽孢桿菌菌株T1-1的發酵液或培養液，具體制備方法可為：將類芽孢桿菌菌株T1-1接種到液體培養基中，30℃培養箱培養，待85％菌體產生芽孢后停止培養，獲得發酵液或培養液。其中，所述液體培養基的配方為：10g/L葡萄糖、5.0g/LCa3PO4)2、5.0g/LMgCl2、0.25g/LMgSO4·7H2O、0.2g/LKCl、1g/L(NH4)2SO4，pH7.0。121℃滅菌25min。當所述類芽孢桿菌菌株T1-1需要進行固體培養時，所采用的固體培養基可在前述每升液體培養基中加入14g瓊脂。進一步地，所述微生物肥料含有前述微生物菌劑與吸附載體。所述吸附載體由草炭土、腐殖酸鉀、蛭石及磷礦粉組成；作為優選，按照質量比為3～5：0.5～1.5：1～2：0.1～0.5組成，更優選為按照質量比3.5：1：1.5：0.3組成。吸附載體制備時，取上述原料混合粉碎后過100目篩，滅菌，冷卻，備用。作為優選，所述微生物肥料由微生物菌劑與吸附載體按照質量比為1:1的比例混合后，烘干而成。其中，所述微生物菌劑在與吸附載體混合前，調節其菌落濃度不低于108CFU/mL。在本專利技術的一個具體實施方式中，制備微生物肥料時，所使用的微生物菌劑為5×108CFU/mL。所述的微生物肥料可以施于種植禾本科植物小麥、玉米、水稻，葫蘆科黃瓜等。第三方面，本專利技術提供了所述類芽孢桿菌菌株T1-1在制備解磷制劑方面的應用。以及，所述類芽孢桿菌菌株T1-1作為有效成分的制劑在農業生產方面的應用。以及，前述微生物菌劑或微生物肥料在蔬菜種植中的應用。本專利技術所述微生物肥料對蔬菜的生長具有顯著的促進作用，能有效降低化學磷肥的使用量，可在農業生產中推廣使用。經檢測，本專利技術所提供的類芽孢桿菌菌株T1-1及尤其制備的微生物菌劑或微生物菌肥對人蓄無毒，無致病性。本專利技術涉及到的原料或試劑均為普通市售產品，涉及到的操作如無特殊說明均為本領域常規操作。本專利技術的有益效果在于：本專利技術所提供的類芽孢桿菌菌株T1-1是從禾本科植物玉米根際土中分離得到的，其具有較強的環境適應能力，如可以在不適環境中產生芽孢。同時，實驗室解磷試驗及植物試驗結果表明，該菌株對多種無機或有機磷源具有溶解能力，由此可知，該菌株能用于土壤中磷源的溶解。另一方面，根據實驗室解磷試驗，類芽孢桿菌菌株T1-1在NBRIP液體培養基中對磷源溶解效果良好，表明該類芽孢桿菌菌株T1-1能用于溶解液體環境中的磷元素，如富營養化水體中磷源的溶解。本專利技術以禾本科植物玉米根際土中分離得到的類芽孢桿菌菌株T1-1用于土壤中無機、有機磷源的溶解，具有解磷穩定、高效、廣譜的特點，而且有利于植物吸收生長必需的磷元素，促進植物的長勢；以該菌株發酵液與肥料基質(吸附載體)混合制得的微生物肥料，施入土壤后能迅速形成優勢菌群，肥效好，能使土壤中有效磷含量顯著提高，促進植物的健康生長。該菌株用于富營養化水體中無機、有機磷源的溶解，能促使水生植物吸收水體中多余的磷元素，從而防治水體富營養化。具體實施方式下面結合實施例對本專利技術做進一步的解釋說明。需要理解的是以下實施例的給出僅是為了起到說明的目的，并不是用于對本專利技術的范圍進行限制。本領域的技術人員在不背離本專利技術的宗旨和精神的情況下，可以對本專利技術進行各種修改和替換。下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。實施例1微生物菌劑的制備將類芽孢桿菌菌株T1-1接種到液體培養基中，30℃培養箱培養，待85％菌體產生芽孢后停止培養，獲得發酵液或培養液。其中，所述液體培養基的配方為：10g/L葡萄糖、5.0g/LCa3(PO4)2、5.0g/LMgCl2、0.25g/LMgSO4·7H2O、0.2g/LKCl、1g/L(NH4)2SO4，pH7.0。121℃滅菌25min。所得發酵液中，菌落濃度為5×108CFU/mL。實施例2液體培養基中磷溶解能力的測定在250mL錐形瓶中倒入100mLNBRIP液體培養基(10g/L葡萄糖、5.0g/LMgCl2、0.25g/LMgSO4·7H2O、0.2g/LKCl、1g/L(NH4)2SO4，pH7.0)，分別加入5.0g/L無機磷Ca3(PO4)2、FePO4、AlPO4以及2.0mL/L有機磷(卵磷脂)作為磷源。接種實施例1所得的發酵液，以接種大腸桿菌JM109為對照，搖床培養(28℃，160r/min)8d。4℃下離心(10000r/min)15min，取適量的上清液，測定含磷量(鉬銻抗比色法測定)，pH值。結果顯示，類芽孢桿菌菌株T1-1能溶解不同的無機磷和有機磷，且對Ca3(PO4)2的磷溶解能力很強，達到378mg/L。同時其對有機磷卵磷脂也有一定的磷溶解能力。實施例3固體培養基中磷溶解能力的測定溶磷類芽孢桿菌T1-1的溶磷能力用NBRIP固體培養基進行測定。將溶磷類芽孢桿菌T1-1在LD固體培養基中活化菌株，30℃過本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種具有解磷作用的類芽孢桿菌菌株T1?1，其特征在于，其保藏編號為CGMCC?No.14927。

【技術特征摘要】
1.一種具有解磷作用的類芽孢桿菌菌株T1-1，其特征在于，其保藏編號為CGMCCNo.14927。2.一種含有權利要求1所述菌株的微生物菌劑。3.根據權利要求2所述的微生物菌劑，其特征在于，其制備方法為：將類芽孢桿菌菌株T1-1接種到液體培養基中，30℃培養箱培養，待85％菌體產生芽孢后停止培養，獲得發酵液或培養液；其中，所述液體培養基的配方為：10g/L葡萄糖、5.0g/LCa3(PO4)2、5.0g/LMgCl2、0.25g/LMgSO4·7H2O、0.2g/LKCl、1g/L(NH4)2SO4，pH7.0，121℃滅菌25min。4.一種含有權利要求1所述菌株的微生物肥料。5.根據權利要求4所述的微生物肥料，其特征在于，其制備方法為：將所述菌株的菌落數不低于108CFU/...

【專利技術屬性】
技術研發人員：陳三鳳，李永斌，
申請(專利權)人：中國農業大學，
類型：發明
國別省市：北京,11