一種用于細胞培養基的脂質混合物及其配制方法與應用技術

本發明專利技術公開了一種用于細胞培養基的脂質混合物及其配制方法與應用。所述脂質混合物包括脂肪酸混合物和添加成分；所述添加成分包括葡聚糖、維生素E醋酸酯和聚醚F?68；所述脂質混合物用于培養T細胞的無血清培養基中；所述無血清培養基包括Lonza X?VIVO 15

【技術實現步驟摘要】
一種用于細胞培養基的脂質混合物及其配制方法與應用
本專利技術涉及細胞培養
，具體為一種用于細胞培養基的脂質混合物及其配制方法與應用。
技術介紹
T細胞是淋巴細胞的主要組成之一，具有多種生物學功能，可直接殺傷靶細胞，也可輔助其它淋巴細胞發揮功能，是身體抵御疾病感染、防止腫瘤形成的主要免疫細胞之一。在體外富集、活化、擴增T細胞，可回輸治療多種疾病，包括惡性腫瘤、自身免疫疾病等。在這個過程中，使用安全可靠的無血清培養基對T細胞進行體外擴增，可避免人源、動物源病原體的引入風險，同時避免T細胞擴增體系匯總不明成分可能引起的機體免疫反應，對后續T細胞治療產品的臨床應用非常關鍵。T細胞的體外擴增要使用能夠促進T細胞快速增殖且保持細胞活率的無血清培養基。而脂肪酸如棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸和膽固醇可用于合成細胞膜，是無血清培養基的重要組分。脂肪酸進入細胞后也可氧化分解成乙酰輔酶A，進入三羧酸循環，為細胞提供大量能量，促進T細胞生長。然而，棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸和膽固醇難溶于水，現有的商業化T細胞無血清培養基往往將脂肪酸和膽固醇直接加到培養基中，這樣會導致脂質組分不穩定，難以被細胞吸收。綜上所述，如何提高脂肪酸和膽固醇在水中的溶解度，增加脂質組分的穩定性和吸收率，對于提高T細胞的細胞活率和增殖倍數有關鍵作用。因此，配制一種用于細胞培養基的脂質混合物具有重要意義。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種用于細胞培養基的脂質混合物及其配制方法與應用，以解決上述
技術介紹
中提出的問題。為了解決上述技術問題，本專利技術提供如下技術方案：一種用于細胞培養基的脂質混合物，所述脂質混合物包括脂肪酸混合物和添加成分；所述添加成分包括葡聚糖、維生素E醋酸酯和聚醚F-68。較為優化地，所述脂質混合物的原料包括以下成分：每毫升含量，0.02~2mg葡聚糖、0.02~2mg維生素E醋酸酯、0.02~2mg聚醚F-68。較為優化地，所述脂質混合物的原料包括以下成分：每毫升含量，0.2mg葡聚糖、0.2mg維生素E醋酸酯、0.2mg聚醚F-68。較為優化地，所述脂肪酸混合物包括棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸和膽固醇其中一種或四種混合物。較為優化地，所述脂質混合物的原料包括以下成分：每毫升含量，0.01~0.5mg棕櫚酸、0.01~0.5mg棕櫚油酸、0.01~0.5mg硬脂酸和0.01~0.5mg膽固醇。較為優化地，所述脂質混合物的原料包括以下成分：每毫升含量，0.1mg棕櫚酸、0.1mg棕櫚油酸、0.1mg硬脂酸和0.1mg膽固醇。較為優化地，一種用于細胞培養基的脂質混合物的配制方法，包括以下步驟：取注射水加入潔凈的燒杯中，依次加入葡聚糖、維生素E醋酸酯、聚醚F-68攪拌均勻；再依次加入棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸和膽固醇繼續攪拌均勻；轉移至容量瓶中定容，0.2μm過濾器過濾，得到脂質混合物，分裝，置于4℃儲存。較為優化地，一種用于細胞培養基的脂質混合物的應用，所述脂質混合物用于培養T細胞的無血清培養基中。較為優化地，所述無血清培養基包括LonzaX-VIVO15TM培養基、Corning88-581-CMDC/CIK細胞無血清培養基、LonzaX-VIVO15TM無酚紅培養基中的一種。較為優化地，所述脂質混合物以1:1000的比例加入培養T細胞的無血清培養基中。本技術方案中，以棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸三種脂肪酸以及膽固醇形成脂肪酸混合物，作為T細胞生長、增殖、新陳代謝所必要的脂質類營養物質。加入葡聚糖、維生素E醋酸酯和聚醚F-68三種脂質作為添加成分，輔助培養T細胞；其中，三種添加劑之間無相互反應，葡聚糖為細胞培養常用的溶解劑，對細胞安全，能夠輔助棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、膽固醇溶解；維生素E乙酸酯為細胞培養常用的抗氧化劑，能有效防止棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸在保存過程中氧化；聚醚F-68為細胞培養常用的表面活性劑，調節水油相容性，能夠促進棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、膽固醇溶于水，進而溶于細胞培養基；以此，添加成分促進了T細胞對脂肪酸混合物中營養成分的吸收，顯著提高了T細胞活率和細胞增殖倍數。與現有技術相比，本專利技術所達到的有益效果是：（1）添加成分有效提高了棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸和膽固醇在水中的溶解度，成分安全穩定，加入T細胞無血清培養基中脂質混合物易于被T細胞吸收，可有效提高T細胞活率和細胞增殖倍數，具有很高的科研和臨床應用價值。（2）脂質混合物中各成分均為細胞培養常用的安全成分，配方簡便，提高了棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸以及膽固醇的穩定性，在科研和可能的臨床應用中具有更高的穩定性和確定性。（3）通過對脂質混合物中各組分的精準配比，使得脂質混合物具有優異的性能，其可以有效提高T細胞活率和細胞增殖倍數，培養10天，在原商品化無血清培養基基礎上，將T細胞擴增倍數提高200%以上，將終末細胞活率提高20%以上。附圖說明附圖用來提供對本專利技術的進一步理解，并且構成說明書的一部分，與本專利技術的實施例一起用于解釋本專利技術，并不構成對本專利技術的限制。在附圖中：圖1：實施例1的T細胞的增殖曲線圖；圖2：實施例1的T細胞活率圖；圖3：實施例2的T細胞的增殖曲線圖；圖4：實施例2的T細胞活率圖；圖5：實施例3的T細胞的增殖曲線圖；圖6：實施例3的T細胞活率圖；圖7：實施例4的T細胞的增殖曲線圖；圖8：實施例4的T細胞活率圖；圖9：實施例5-8的T細胞的增殖曲線對比圖；圖10：實施例5-8的T細胞活率對比圖；圖11：實施例9的T細胞的增殖曲線圖；圖12：實施例9的T細胞活率圖；圖13：實施例10的T細胞的增殖曲線圖；圖14：實施例10的T細胞活率圖；圖15：實施例11-13的T細胞的增殖曲線對比圖；圖16：實施例11-13的T細胞活率對比圖。具體實施方式下面將對本專利技術實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本專利技術一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本專利技術中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本專利技術保護的范圍。實施例中的材料來源：棕櫚酸（Sigma，貨號P0500）、棕櫚油酸（Sigma，貨號P9417）、硬脂酸（Sigma，貨號S4751）、膽固醇（Sigma，貨號C3045）、葡聚糖（Sigma，貨號D4876）、維生素E醋酸酯（Sigma，貨號29992）、聚醚F-68（Gibco，貨號24040032）、所述商業化T細胞無血清培養基為X-VIVO15TM培養基（Lonza，貨號04-418Q）、KBM581DC/CIK培養基（Corning，貨號88-551-CM）、X-VIVO15TM無酚紅培養基（Lonza，貨號04-C44Q）。另，實施例中其他所用的方法和試劑，除非另有說明，否則為本領域常規的方法和本文檔來自技高網...

【技術保護點】
1.一種用于細胞培養基的脂質混合物，其特征在于：所述脂質混合物包括脂肪酸混合物和添加成分；所述添加成分包括葡聚糖、維生素E醋酸酯和聚醚F-68；所述脂肪酸混合物包括棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸和膽固醇四種混合物；/n所述脂質混合物的原料包括以下成分：每毫升含量，0.02~2mg葡聚糖、0.02~2mg維生素E醋酸酯、0.02~2mg聚醚F-68、0.01~0.5mg棕櫚酸、0.01~0.5mg棕櫚油酸、0.01~0.5mg硬脂酸和0.01~0.5mg膽固醇；/n所述脂質混合物以1:1000的比例加入培養T細胞的無血清培養基中。/n

【技術特征摘要】
1.一種用于細胞培養基的脂質混合物，其特征在于：所述脂質混合物包括脂肪酸混合物和添加成分；所述添加成分包括葡聚糖、維生素E醋酸酯和聚醚F-68；所述脂肪酸混合物包括棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸和膽固醇四種混合物；
所述脂質混合物的原料包括以下成分：每毫升含量，0.02~2mg葡聚糖、0.02~2mg維生素E醋酸酯、0.02~2mg聚醚F-68、0.01~0.5mg棕櫚酸、0.01~0.5mg棕櫚油酸、0.01~0.5mg硬脂酸和0.01~0.5mg膽固醇；
所述脂質混合物以1:1000的比例加入培養T細胞的無血清培養基中。


2.根據權利要求1所述的一種用于細胞培養基的脂質混合物，其特征在于：所述脂質混合物的原料包括以下成分：每毫升含量，0.2mg葡聚糖、0.2mg維生素E醋酸酯、0.2mg聚醚F-68。


3.根據...

【專利技術屬性】
技術研發人員：馬士棋，陳旭，陳剛，
申請(專利權)人：依科賽生物科技太倉有限公司，
類型：發明
國別省市：江蘇;32