【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物，具體涉及一種抗β-興奮劑的單鏈抗體及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、溴布特羅(brombuterol，bro)和齊帕特羅(zilpaterol，zil)均是“瘦肉精”的一種，屬于β-興奮劑。能夠明顯的提高動物的瘦肉率，且易在動物體內(nèi)的可食性組織中形成殘留，過量使用會造成呼吸急促、肌肉震顫等癥狀，給動物源性食品安全帶來嚴(yán)重的威脅。
2、目前針對β-興奮劑類物質(zhì)的檢測仍以儀器分析為主，包括氣相色譜-質(zhì)譜和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)。雖然這些方法能夠?qū)Σ煌瑯悠分械腷ro和zil做到精確的定量和定性檢測，但因為儀器價格昂貴、耗時、耗力，并且需配備專用的實驗室和操作人員，以及冗長而嚴(yán)格的樣品處理程序，使得這種檢測方法的廣泛使用受到了很大限制。而針對bro和zil的免疫學(xué)檢測方法所使用的抗體主要以單克隆抗體(monoclonal?antibody,mab)和多克隆抗體(polyclonal?antibody,pab)為主，因mab和pab的常規(guī)制備方法存在制備程序繁瑣、復(fù)雜、花費(fèi)時間長，并且存在不可優(yōu)化、且不同批次間的抗體靈敏度存在差異等缺點，易導(dǎo)致構(gòu)建的免疫學(xué)檢測方法穩(wěn)定性欠佳。相比于傳統(tǒng)抗體，單鏈抗體(single?chainantibodyfragment,scfv)是僅具有一條鏈的基因工程抗體，不僅可以在分子水平上對其進(jìn)行研究，而且還可以通過隨機(jī)誘變和定點誘變等改造技術(shù)提高抗體的親和力和穩(wěn)定性。在結(jié)合噬菌體展示技術(shù)的基礎(chǔ)上，該抗體的獲得可以不通過制備雜交瘤細(xì)胞株進(jìn)行大量生產(chǎn)，具有方便和易于制備等優(yōu)點，已逐漸成為建
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、為了解決上述技術(shù)問題，本專利技術(shù)的目的是提供一種抗β-興奮劑的單鏈抗體及其應(yīng)用，以解決現(xiàn)有對于β-興奮劑的檢測存在程序繁瑣、價格昂貴、耗時耗力或穩(wěn)定性差等問題。
2、本專利技術(shù)解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：
3、一種抗β-興奮劑的單鏈抗體，β-興奮劑為溴布特羅，抗溴布特羅單鏈抗體由重鏈可變區(qū)、連接肽和輕鏈可變區(qū)組成，連接肽位于重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)之間，重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.1所示，輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.2所示。
4、進(jìn)一步地，編碼抗溴布特羅單鏈抗體重鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?id?no.3所示，輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?id?no.4所示。
5、進(jìn)一步地，連接肽的氨基酸序列如seq?id?no.5所示。
6、進(jìn)一步地，β-興奮劑為齊帕特羅，抗齊帕特羅單鏈抗體由重鏈可變區(qū)、連接肽和輕鏈可變區(qū)組成，連接肽位于重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)之間，重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seqid?no.6所示，輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.7所示。
7、進(jìn)一步地，編碼抗齊帕特羅單鏈抗體重鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?id?no.8所示，輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?id?no.9所示。
8、進(jìn)一步地，連接肽的氨基酸序列如seq?id?no.10所示。
9、一種表達(dá)載體、噬菌體或重組菌，包括上述全部核苷酸。
10、一種單克隆細(xì)胞株，包括上述全部核苷酸。
11、一種用于檢測β-興奮劑的試劑盒，包括上述的抗β-興奮劑的單鏈抗體。
12、上述抗β-興奮劑的單鏈抗體或用于檢測β-興奮劑的試劑盒在用于β-興奮劑檢測中的應(yīng)用。
13、本專利技術(shù)具有以下有益效果：
14、本專利技術(shù)分別利用重氮法將bro和改造修飾后的zil小分子分別與牛血清蛋白和雞血清蛋白進(jìn)行偶聯(lián)，通過制備得到的完全抗原免疫小鼠并進(jìn)行血清效價和靈敏度鑒定后，篩選得到能夠分泌特異性和高靈敏的mab細(xì)胞株；然后以獲得的單克隆細(xì)胞株為基礎(chǔ)，利用pcr技術(shù)擴(kuò)增得到完整的抗體基因，最終篩選得到了高敏感性的抗溴布特羅單鏈抗體和抗齊帕特羅單鏈抗體，為后續(xù)開發(fā)bro和zil的快速檢測試劑盒奠定基礎(chǔ)。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點】
1.一種抗β-興奮劑的單鏈抗體，其特征在于，β-興奮劑為溴布特羅，抗溴布特羅單鏈抗體由重鏈可變區(qū)、連接肽和輕鏈可變區(qū)組成，連接肽位于重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)之間，重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗β-興奮劑的單鏈抗體，其特征在于，編碼抗溴布特羅單鏈抗體重鏈可變區(qū)的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示，輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗β-興奮劑的單鏈抗體，其特征在于，連接肽的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.5所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗β-興奮劑的單鏈抗體，其特征在于，β-興奮劑為齊帕特羅，抗齊帕特羅單鏈抗體由重鏈可變區(qū)、連接肽和輕鏈可變區(qū)組成，連接肽位于重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)之間，重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.6所示，輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.7所示。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗β-興奮劑的單鏈抗體，其特征在于，編碼抗齊帕特羅單鏈抗體重鏈可變區(qū)的核苷酸
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗β-興奮劑的單鏈抗體，其特征在于，連接肽的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.10所示。
7.一種表達(dá)載體、噬菌體或重組菌，其特征在于，包括權(quán)利要求2或5中所述的全部核苷酸。
8.一種單克隆細(xì)胞株，其特征在于，包括權(quán)利要求2或5中所述的全部核苷酸。
9.一種用于檢測β-興奮劑的試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求1-6任一項所述的抗β-興奮劑的單鏈抗體。
10.權(quán)利要求1-6任一項所述的抗β-興奮劑的單鏈抗體或權(quán)利要求9所述的用于檢測β-興奮劑的試劑盒在用于β-興奮劑檢測中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種抗β-興奮劑的單鏈抗體，其特征在于，β-興奮劑為溴布特羅，抗溴布特羅單鏈抗體由重鏈可變區(qū)、連接肽和輕鏈可變區(qū)組成，連接肽位于重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)之間，重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.1所示，輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.2所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗β-興奮劑的單鏈抗體，其特征在于，編碼抗溴布特羅單鏈抗體重鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?id?no.3所示，輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?id?no.4所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗β-興奮劑的單鏈抗體，其特征在于，連接肽的氨基酸序列如seq?id?no.5所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗β-興奮劑的單鏈抗體，其特征在于，β-興奮劑為齊帕特羅，抗齊帕特羅單鏈抗體由重鏈可變區(qū)、連接肽和輕鏈可變區(qū)組成，連接肽位于重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)之間，重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.6所...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：郭東光，王選年，陳明艷，卞爽麗，崔龍威，岳鋒，張艷芳，李文明，孫蓮蓮，朱艷平，李鵬，徐小博，齊永華，
申請(專利權(quán))人：新鄉(xiāng)學(xué)院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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