【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及微生物應用，尤其涉及類視黃酸物質(retinoids)作為clca1蛋白(monoclonal?antibody?to?chloride?channel?accessory?1，氯離子通道輔助蛋白1)表達促進劑或誘導劑在促進雙歧桿菌在腸道定植中的應用。
技術介紹
1、雙歧桿菌是人體結腸內的主要菌群，占成人可培養糞便細菌的25％，尤其是新生兒期間，雙歧桿菌是最早定植也是腸道最主要的優勢菌。雙歧桿菌不僅有營養功能，如代謝出維生素、脂肪酸等促進生長，同時雙歧桿菌還可以起到抗感染、保護腸道屏障和抗癌等作用。因此，雙歧桿菌在嬰幼兒時期的定植對嬰幼兒的健康成長有著重要作用。腸道雙歧桿菌不僅對人體生長具有重要作用，它也是目前臨床治療上應用最廣泛的益生菌之一。如常見的雙歧桿菌三聯活菌膠囊常被用來治療因腸道菌群失調引起的急慢性腹瀉、便秘，也可以用于輕中型急性腹瀉、慢性腹瀉以及消化不良、腹脹，甚至可以用于輔助治療菌群失調造成的內毒素血癥。近年來，隨著技術的發展，關于雙歧桿菌的應用和生理作用也得到了極大拓展，如雙歧桿菌的應用研究已經延伸到神經系統性疾病的治療，如通過“腸-腦”軸來緩解孤獨癥譜系障礙性疾病、焦慮、帕金森和阿爾茨海默癥等神經系統疾?。煌ㄟ^“腸-骨”軸來延緩骨質疏松，降低骨折風險等。這些治療應用的研究和拓展加速了雙歧桿菌的臨床應用轉化，也更加地體現了雙歧桿菌在臨床應用中的重要性。
2、包括雙歧桿菌在內的益生菌治療，普遍都會遇到益生菌定植困難這個瓶頸。如果從生態學的角度考慮細菌的定植機制，那么“種子”(細菌)和“土壤
3、通過上述影響細菌定植的因素，目前可以考慮的方式有如下幾種：(1)通過篩選或者生物工程技術對微生物進行基因改造獲得一個較好的定植株；(2)對細菌表面分子進行結構分析進一步了解和預測宿主-微生物相互作用的分子機制；(3)在飲食中添加一定的益生元從而使得益生菌能過夠獲得更好的營養提高活力；(4)優化“土壤”，也就是對宿主腸道內環境進行改良，從而利于雙歧桿菌的定植。
4、但目前對于提高益生菌(尤其是雙歧桿菌)的定植，還仍未開發出切實可行的方法，具體原因如下：(1)目前關于益生菌，尤其是雙歧桿菌的定植機制研究較少，導致相關的轉化應用更少；(2)同一種屬的細菌，往往在形態和基因表達上也存在很大的差，這就導致在某種微生物上發現的定植機制或者定植手段，換到同一種屬的不同細菌中就不成立；(3)對于一些益生元的基因改造，目前還沒有太多合適的基因編輯工具，雖然crispr-cas9基因編輯技術已經相當成熟，但是在微生物中，該應用在方法學上還有待進一步第優化；與此同時，基因改造后的微生物，在生物安全性上仍然需要更多的警惕性，這些都限制了基因修飾微生物在臨床的應用。
5、在目前使用的益生菌或腸道菌群移植治療方案中，一旦停止使用益生菌后，腸道中的益生菌豐度就會快速降低，益生菌隨著糞便排出而快速丟失；同時益生菌是否高效定植也往往預實著益生菌療效的好壞和響應靈敏度。因此，對于益生菌定植的研究，尤其是雙歧桿菌的定植機制和促進雙歧桿菌等益生菌快速高效定植的技術和手段的開發，對于今后益生菌治療療效的提高具有重要意義。
6、類視黃酸物質(retinoids)包括視黃酸(retinoic?acid)以及前體化合物如視黃醛(retinal)、視黃醇(retinol)以及維生素a(vitamin?a)。他們都具有相似的母核結構，是來源于維生素a的一大類物質。人體正常無法合成維生素a，需要通過從食物中獲取維生素a，然后在體內維生素a經過一系列酶的代謝依次生成視黃醇、視黃醛和視黃酸，而視黃酸是體內視黃酸信號通路的最終執行者，具有最大的激活效果。類視黃酸物質臨床上主要用于皮膚病和炎癥型皮膚病、皮膚癌和皮膚皺紋的治療；維生素a在臨床上主要用于夜盲癥、干眼病角膜軟化癥等治療，同時對胎兒、嬰幼兒的正常發育具有重要調控作用。視黃酸(ra)臨床常用名為維a酸(tretinoin)、維甲酸，臨床主要用于痤瘡和急性早幼粒細胞白血病的治療。痤瘡治療時，視黃酸以乳膏、凝膠和軟膏的形式被使用；對于急性早幼粒細胞白血病治療時，視黃酸往往是口服給藥。雙歧桿菌臨床上通常用于急慢性腹瀉、腹痛、便秘和消化不良等消化道疾病，在菌群移植治療治療中，雙歧桿菌也是主要的功能菌；目前雙歧桿菌在孤獨癥譜系障礙、非酒精性脂肪肝等非消化系統疾病中也起到了很好的治療效果。但目前仍缺乏對雙歧桿菌定植機制的研究，也未有任何報道涉及類視黃酸物質與腸道雙歧桿菌定植之間的關系研究。
技術實現思路
1、為了克服現有技術中存在的至少一個問題，本專利技術深入研究了雙歧桿菌和宿主互作的潛在分子機制，并通過利用雙歧桿菌和宿主互作的分子機制，尋找優化宿主腸道環境的手段，從而通過優化宿主的腸道環境來實現雙歧桿菌高效定植。
2、為實現上述目的，本專利技術采用如下技術方案：
3、本專利技術的第一個方面是提供clca1蛋白表達促進劑或誘導劑在促進雙歧桿菌在腸道內的定植中的應用。
4、進一步地，所述clca1蛋白表達促進劑或誘導劑提高腸上皮組織中clca1蛋白的表達，所述clca1蛋白與雙歧桿菌表面的atph蛋白發生互作，從而促進雙歧桿菌在腸道內的定植。
5、進一步地，所述clca1蛋白表達促進劑或誘導劑包括類視黃酸物質。
6、進一步地，所述類視黃酸物質包括視黃酸、維生素a?？衫斫獾氖牵琧lca1蛋白表達促進劑還包括能夠實現clca1蛋白過表達的其他小分子或大分子物質，如視黃醇和視黃醛。
7、進一步地，所述雙歧桿菌包括雙歧桿菌屬中的任一種或任幾種雙歧桿菌，例如人體腸道中常見的雙歧桿菌、動物來源的雙歧桿菌等；具體地，所述雙歧桿菌包括兩歧雙歧桿菌、青春雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、假長雙歧桿菌、長雙歧桿菌、短雙歧桿菌等中的至少一種；優選假長雙歧桿菌、長雙歧桿菌中的至少一種。
8、進一步地，所述clca1蛋白的表達水平可作為臨床fmt和益生菌(含雙歧桿菌)治療的評價指標。
9、本專利技術的第二個方面是提供類視黃酸類物質作為clca1蛋白表達促進劑或誘導劑的應用。
10、進一步地，所述類視黃酸物質包括視黃酸、維生素a。
11、進一步地，所述clca1蛋白的啟動子區域存在視黃酸結合位點，所述類視黃酸物質通過視黃酸信號通路促進腸上皮組織中clca1蛋白的表達。
12、進一步地，所述視黃酸結合位點為clca1蛋白啟動子上游509-527bp位點。具體地，所述視黃酸結合位點的具體序列為：aggt本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.CLCA1蛋白表達促進劑或誘導劑在促進雙歧桿菌在腸道定植中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述CLCA1蛋白表達促進劑或誘導劑提高腸上皮組織中CLCA1蛋白的表達，所述CLCA1蛋白與雙歧桿菌表面的atpH蛋白發生互作，從而促進雙歧桿菌在腸道定植。
3.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于，所述CLCA1蛋白表達促進劑或誘導劑包括類視黃酸物質，所述類視黃酸物質包括視黃酸和維生素A。
4.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述雙歧桿菌包括兩歧雙歧桿菌、青春雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、假長雙歧桿菌、長雙歧桿菌、短雙歧桿菌中的至少一種。
5.類視黃酸物質作為CLCA1蛋白表達促進劑或誘導劑的應用。
6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述類視黃酸物質包括視黃酸和維生素A；所述CLCA1蛋白的啟動子區域存在視黃酸結合位點，所述類視黃酸物質通過視黃酸信號通路促進腸上皮組織中CLCA1蛋白的表達。
7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述視黃酸結合位點為CLCA1蛋白啟動子上游50
8.根據權利要求5～7中任一所述的應用，其特征在于，所述類視黃酸物質作為CLCA1蛋白表達促進劑或誘導劑用于促進雙歧桿菌在腸道定植；其中，所述類視黃酸物質通過視黃酸信號通路促進腸上皮組織中CLCA1蛋白的表達，所述CLCA1蛋白與雙歧桿菌表面的atpH蛋白發生互作，從而促進雙歧桿菌在腸道定植。
9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述雙歧桿菌包括兩歧雙歧桿菌、青春雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、假長雙歧桿菌、長雙歧桿菌、短雙歧桿菌。
10.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述類視黃酸物質作為腸道菌群移植的輔劑或作為益生菌治療的輔劑。
...【技術特征摘要】
1.clca1蛋白表達促進劑或誘導劑在促進雙歧桿菌在腸道定植中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述clca1蛋白表達促進劑或誘導劑提高腸上皮組織中clca1蛋白的表達，所述clca1蛋白與雙歧桿菌表面的atph蛋白發生互作，從而促進雙歧桿菌在腸道定植。
3.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于，所述clca1蛋白表達促進劑或誘導劑包括類視黃酸物質，所述類視黃酸物質包括視黃酸和維生素a。
4.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述雙歧桿菌包括兩歧雙歧桿菌、青春雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、假長雙歧桿菌、長雙歧桿菌、短雙歧桿菌中的至少一種。
5.類視黃酸物質作為clca1蛋白表達促進劑或誘導劑的應用。
6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述類視黃酸物質包括視黃酸和維生素a；所述clca1蛋白的啟動子區域...
【專利技術屬性】
技術研發人員：吳偉軍，蔚青，秦環龍，魏榕，
申請(專利權)人：上海市第十人民醫院，
類型：發明
國別省市：
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