【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及分子生物學(xué)和遺傳育種領(lǐng)域，具體涉及基于黑麥表達序列標簽 (expressed sequence tag, EST)序列設(shè)計的分子標記，以及這些分子標記在跟蹤檢測黑麥染色體方面的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
小麥的近緣種黑麥cereale L.)具有許多優(yōu)良的性狀，如根系發(fā)達、分蘗強、抗旱、耐瘠薄、耐寒、耐鹽堿和酸性土壤，尤其是抗多種病害，如小麥白粉病 graminis f. sp. tri tici ) > ^r M iPuccinia graminis f. sp. triiici )、口十繡病(/· triticina Eriks.)、禾干繡病(/· graminis Pers. f. sp. triiici )、月星黑種病(Tilletia Controversa Kuhn, TCK)和大麥黃矮病(Barley yellow dwarf virus, BYDV)等。因此，黑麥是對小麥進行遺傳改良，拓寬小麥遺傳基礎(chǔ)，增加小麥栽培品種遺傳變異的重要基因源。黑麥優(yōu)異基因向小麥中轉(zhuǎn)移的途徑主要是創(chuàng)制一系列小麥/黑麥雙二倍體、附加系、代換系和易位系。通過遠緣雜交和染色體工程等手段將黑麥染色體導(dǎo)入到小麥背景中，之后，還需要對其進行準確的鑒定，才能有效地加以利用。與細胞學(xué)技術(shù)和生化標記法相比，分子標記法簡單、快速和準確的特點使其廣泛地用于檢測、跟蹤導(dǎo)入小麥背景中的黑麥染色體。然而，目前開發(fā)的黑麥染色體的特異標記，多集中在黑麥的IRS染色體上，如 SSRfeid Bmac0213 Φ^Χ^ Schneider A and Molnar-Lang Μ. 2...
【技術(shù)保護點】
１．基于黑麥ＥＳＴ序列的黑麥１Ｒ～７Ｒ染色體特異的分子標記，其特征在于：這些分子標記為根據(jù)黑麥染色體上的表達序列標簽ＥＳＴ序列設(shè)計的正向引物和反向引物，這些分子標記為用于鑒定黑麥１Ｒ～７Ｒ染色體的特異標記，其堿基序列見表１，表１． 根據(jù)黑麥染色體上的表達序列標簽ＥＳＴ序列設(shè)計的１４對標記引物序列其中，１－ＣＧＧ１４３標記用于鑒定黑麥１Ｒ和６Ｒ染色體；２－ＣＧＧ６２、３－ＣＧＧ８和４－ＣＧＧ９標記用于鑒定黑麥２Ｒ染色體；５－ＣＧＧ３２標記用于鑒定黑麥３Ｒ染色體；６－ＣＧＧ４９標記用于鑒定黑麥４Ｒ染色體；７－ＣＧＧ４、８－ＣＧＧ１６、９－ＣＧＧ１８、１０－ＣＧＧ１９和１１－ＣＧＧ４３標記用于鑒定黑麥５Ｒ染色體；１２－ＣＧＧ２３和１３－ＣＧＧ５９標記用于鑒定黑麥６Ｒ染色體；１４－ＣＧＧ２６標記用于鑒定黑麥７Ｒ染色體。
【技術(shù)特征摘要】
1.基于黑麥EST序列的黑麥IR 7R染色體特異的分子標記，其特征在于這些分子標記為根據(jù)黑麥染色體上的表達序列標簽EST序列設(shè)計的正向引物和反向引物，這些分子標記為用于鑒定黑麥IR 7R染色體的特異標記，其堿基序列見表1，表1.根據(jù)黑麥染色體上的表達序列標簽EST序列設(shè)計的14對標記引物序列體正向引物序列 (S' -3')反向引物 -3')1-CGG143iR, etB SBQ ID NO1 1見 SBQ ID Μ) 22-CGG622S% 觀 ID NO: 3BSEQ ID 43-CGG82R見卿ID ND: 5BSBQ ID NO: 64-CGG9 5-CGG3228 3R見測ID NO1 7 見卿ID NG1 9見卿ID NO^ δ 見 SEQ ID Nth 106-CGG49■見測 ID NOi 11ASEQ ID MOi 127 CGG45R見 SEKJ ID NO: 13見SEQ ID NO: 148-CGG16 9-CGG185R 58見卿 ID NDi 15 Λ 挪 ID NOi 17見SEQ ID NOi 16 Eseq id Noi is10-CGG1958見卿 ID NO1 19見SEQ ID NO 2011-CGG4358見卿 ID NO1 21見 SEQ ID NO 2212CGG23 13-CGG596K 6R% SFjQ ID 23 JL SBQ ID NO 25B SfiQ ID Wt Α 見SEQ ID NOt 2614-CGG267BE 測 ID NO: 27JiSEQ ID NO^ 28其中，1-CGG143標記用于鑒定黑麥IR和6R染色體；2_CGG62、3_CGG8和4-CGG9標記用于鑒定黑麥2R染色體；5-CGG32標記用于鑒定黑麥3R染色體；6-CGG49標記用于鑒定黑麥 4R染色體；7-CGG4、8-CGG16、9-CGG18、10-CGG19和11-CGG43標記用于鑒定黑麥5R染色體； 12-CGG23和13-CGG59標記用于鑒定黑麥6R染色體；14_CGG^標記用于鑒定黑麥7R染色體。2.應(yīng)用權(quán)力要求1所述的基于黑麥EST序列的黑麥IR 7R染色體特異的分子標記對小麥背景中黑麥染色體進行鑒定的方法，其特征步驟包括A、分子標記的選定和制備根據(jù)所需鑒定的黑麥染色體選定分子標記，比如，預(yù)備檢測鑒定的小麥與黑麥遠緣雜交后代材料當中是否含有黑麥4R染色體，則選定6-CGG49分子標記，然后根據(jù)權(quán)利要求1給出的序列合成此標記引物；B、標記引物的稀釋將上步合成的標記引物，先用IXTE緩沖液溶解成IOOmmolL—1的母液放入-20°C的冰箱中保存，使用前吸取母液用超純水稀釋成IOmmol L—1的工作液待用； 其中 IXTE 緩沖液的配方為，IOmmol Γ1 Tris-HCl 與 l...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：安調(diào)過，尹冬冬，許紅星，李立會，
申請(專利權(quán))人：中國科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：13
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