【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及用于標記分析物(具體是生物分子如核酸和蛋白質)的有用的化合物。具體而言，本專利技術涉及采用質譜法使用特殊的質量標記物進行分析的方法。
技術介紹
標記感興趣的分子的各種方法在本領域中是已知的，包括放射性原子、熒光染料、發光試劑、電子俘獲劑和光吸收染料。這些標記系統的每ー種都具有使其適合于某些應用而非其它應用的特征。由于安全原因，對非放射性標記系統的興趣已導致熒光標記方案的 廣泛的商業發展，尤其是用于遺傳分析的熒光標記。熒光標記方案使得相對少量的分子能同時進行標記，通常可同時使用4種標記物，也可能達到8種。但是，檢測裝置的成本和分析所產生的信號的難度限制了可在熒光檢測方案中同時使用的標記物的數量。最近，在質譜法領域中已開發了一種檢測可斷裂地連接于它們相關的感興趣分子的標記物的方法。在許多分子生物學應用中，人們需要能在分析之前分離出感興趣的分子。通常進行液相分離。近年來，質譜法已發展了許多用于液相分離的界面，這使得質譜法可特別有效地用作這些應用的檢測系統。直到最近才采用液相色譜質譜法直接檢測分析物離子或它們的片段離子。但是，對于許多應用，如核酸分析，分析物的結構可從間接的標記而得以確定。這尤其對于采用質譜法是有利的，因為復雜的生物分子(如DNA)具有復雜的質譜，并且其檢測具有相對差的敏感性。間接檢測指可使用相關的標記物分子來鑒別原始的分析物，該標記物被設計用于敏感性檢測，并具有簡單的質譜。簡單的質譜使得可同時使用多種標記物分析大量的分析物。PCT/GB98/00127描述了共價連接于可斷裂的標記物的核酸探針的陣列，所述標記物可采用質譜法檢測到，該...
【技術保護點】
一組兩種或多種質量標記物，組中各標記物包含通過連接物連接于質量歸一化部分的質量指示部分，所述連接物含有在質譜儀中可斷裂的基團，其中，各質量歸一化部分確保質量標記物具有所需的聚集質量，且組中各質量指示部分的質量相同，其中，組中各標記物具有與該組中的所有其它標記物不同的質量，并且，組中所有的質量標記物可通過質譜法得以相互區分。
【技術特征摘要】
2000.03.14 GB 0006141.61.一組兩種或多種質量標記物，組中各標記物包含通過連接物連接于質量歸一化部分的質量指示部分，所述連接物含有在質譜儀中可斷裂的基團，其中，各質量歸一化部分確保質量標記物具有所需的聚集質量，且組中各質量指示部分的質量相同，其中，組中各標記物具有與該組中的所有其它標記物不同的質量，并且，組中所有的質量標記物可通過質譜法得以相互區分。2.如權利要求I所述的ー組質量標記物，其特征在于，所述組中的各質量標記物具有下述結構 M (A) y-L_X (A) z 式中，M是質量歸ー化部分，X是質量指示部分，A是質量調節部分，L是可斷裂的連接物，y和z是O或O以上的整數，y+z是I或I以上的整數。3.如權利要求2所述的ー組質量標記物，其特征在于，所述質量調節部分選自 (a)位于所述質量指示部分和/或質量歸一化部分的基本結構內的同位素取代基； (b)連接于所述質量指示部分和/或質量歸一化部分的基本結構的取代基原子或基團。4.如權利要求3所述的ー組質量標記物，其特征在干，所述質量調節部分選自鹵原子取代基、甲基和2H或13C同位素取代基。5.如權利要求4所述的ー組質量標記物，其特征在干，所述質量調節部分是氟原子取代基。6.如前述權利要求中任一項所述的ー組質量標記物,其特征在于,將所述質量指示部分連接于所述質量歸ー化部分的可斷裂連接物是可通過碰撞而斷裂的連接物。7.如權利要求6所述的ー組質量標記物，其特征在干，所述可斷裂的連接物包含酰胺鍵。8.如前述權利要求中任一項所述的ー組質量標記物，其特征在干，所述質量歸ー化部分包含抗斷裂基團。9.如權利要求8所述的ー組質量標記物，其特征在于，所述質量歸ー化部分包含苯基。10.如前述權利要求中任一項所述的ー組質量標記物,其特征在于,所述質量指示部分包含預電離的基團。11.如權利要求10所述的ー組質量標記物，其特征在于，所述質量指示部分包含N-甲基批淀基，或包含選自以下的基團_NH2、-NR2> -NR3+、-SR3+、-SO3、_P04、_P03、-CO2、12.如權利要求2-11中任一項所述的ー組質量標記物，其特征在于，所述組中各標記物具有下述結構13.如權利要求12所述的ー組質量標記物，其特征在于，所述R是H，L是酰胺鍵，p=0，A是氟原子。14.一組兩種或多種探針，其特征在干，組中各探針不同，它們連接于獨特的質量標記物或質量標記物的獨特組合，所述質量標記物來自權利要求1-13中任一項所述的質量標記物組。15.如權利要求14所述的探針組，其特征在于，所述各探針連接于質量標記物的獨特組合，每種組合由該質量標記物組中每種質量標記物的存在與否得以區別，和/或由連接于該探針的各質量標記物的數量加以區別。16.如權利要求14-15中任一項所述的探針組，其特征在于，所述各探針包含生物分子。17.如權利要求16所述的探針組，其特征在于，所述生物分子選自DNA、RNA、寡核苷酸、核酸堿基、蛋白質和/或氨基酸。18.ー種分析方法，該方法包括，采用質譜法鑒別質量標記物或質量標記物的組合，從而同時檢測兩種或多種分析物，其中，所述質量標記物是權利要求1-13中任ー項所定義的質量標記物組的質量標記物。19.如權利要求18所述的方法，其特征在干，由來自質量標記物組的質量標記物的獨特組合鑒別每種分析物，各種組合由所述組中的每種標記物的存在與否而得以區別，和/或由各質量標記物的數量而加以區別。20.如權利要求18-19中任ー項所述的鑒別兩種或多種分析物的方法，其特征在于，在采用質譜法檢測質量標記物之前，先根據所述分析物的質量將它們分離。21.如權利要求20所述的方法，其特征在于，采用色譜法或電泳進行分離。22.如權利要求18-21中任一項所述的方法，其特征在于，用于檢測質量標記物的質譜儀包括一個或多個質量分析儀，這些質量分析儀能使具有特定質量或質量范圍的離子通過，以進行檢測，和/或能使離子分解。23.如權利要求22所述的方法，其特征在干，使用質量分析儀選擇對ー種或多種已知的質量標記物特異的具有特定質量或質量范圍的離子，使所選擇的離子分解，然后檢測分解產物，以鑒別指示所選擇的質量標記物的離子模型。24.如權利要求22或23所述的方法，其特征在于，所述質譜儀包括三個四極質量分析儀。25.如權利要求23或24所述的方法，其特征在于，所述第一質量分析儀用于選擇具有特定質量或質量范圍的離子，第二質量分析儀用于分解所選擇的離子，第三個質量分析儀用于檢測所產生的離子。26.如權利要求18-25中任一項所述的方法,其特征在于,所述方法包括 (a)使ー種或多種分析物與一組探針接觸，其中，所述探針是權利要求14-17中任ー項所定義的探針； (b)通過檢測與分析物相關的探針鑒別分析物。27.如權利要求26所述的方法，其特征在于，在采用質譜法檢測所述質量標記物前，先將質量標記物從所述探針上解離下來。28.如權利要求26或27所述的方法，其特征在于，所述方法包括使ー種或多種核酸與ー組雜交探針接觸。29.如權利要求28所述的方法，其特征在于，所述一組雜交探針是具有256個以內的四聚體的組，組中各探針具有不同的核酸堿基的組合。30.如權利要求18所述的ニ維質譜分析法，其特征在于，該方法包括 (a)提供兩種或多種分析物，各分析物用質量標記物或質量標記物的組合標記，其中，這些質量標記物來自權利要求1-13中任ー項所定義的質量標記物組； (b)使所述質量標記物與所述分析物解離； (c)檢測質量標記物； (d)在質譜儀中分解質量標記物，以從質量歸ー化部分釋放出質量指示部分； (e)檢測質量指示部分； (f)在所述質量標記物的質譜和所述質量指示部分的質譜的基礎上鑒別分析物。31.如權利要求30所述的方法，其特征在于，在所述(c)步驟中，選擇具有選定的質量或質量范圍的質量標記物用于檢測，和/或在(e)步驟中，選擇具有特定質量的質量指示部分用于檢測。32.如權利要求18所述的分析方法，其特征在于，該方法包括 (a)在分析物的第一特性的基礎上，對標記的分析物的混合物進行第一分離處理； (b)在分析物的第二特性的基礎上，對所得的分離分析物進行第二分離處理； (C)通過檢測分析物的標記物，從而檢測該分析物； 其中，這些分析物用來自權利要求1-13中任ー項所定義的質量標記物組或陣列的質量標記物標記。33.如權利要求32所述的方法，其特征在于，在(a)步驟和/或(b)步驟中，根據所述分析物的長度或質量將它們分離。34.如權利要求32或33所述的方法，其特征在于，在(a)步驟和/或(b)步驟中，根據所述分析物的等電點將它們分離。35.如權利要求32-34中任一項所述的方法，其特征在于，所述分析物包括蛋白質、多肽、肽、氨基酸或核酸，或者它們的片段。36.如權利要求32-35中任一項所述的雙向凝膠電泳法。37.根據權利要求18所述的表征核酸的方法，其特征在于，該方法包括 (a)提供ー組核酸片段，各片段具有可斷裂地連接于其上、用于鑒別該片段的特征的質量標記物，所述質量標記物來自權利要求1-13中任ー項所定義的質量標記物組的質量標記物；(b)在它們的長度的基礎上分離這些片段； (C)解離各片段，使其釋放出其質量標記物； (d)采用質譜法測定各質量標記物，以描述各片段的特征與片段長度的關系。3...
【專利技術屬性】
技術研發人員：G·施密斯，A·H·托馬斯，R·A·W·約翰斯通，
申請(專利權)人：電泳有限公司，
類型：發明
國別省市：
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