高敏膜滲濾蛋白芯片制造技術

本實用新型專利技術涉及一種高敏膜滲濾蛋白芯片，解決了現有膜滲濾免疫法每次只能檢測單指標，并且只能做到定性檢測，檢測靈敏度低的問題。技術方案包括蛋白芯片主體、洗液瓶、檢測抗體混合液瓶和底物瓶；所述蛋白芯片主體的上表面開有加樣槽，加樣槽的底面設有膜，膜下方為吸水濾紙層，其中，膜上設置有至少1個待檢目標蛋白濃度參照點和多個待檢目標蛋白的檢測點。本實用新型專利技術結構簡單、不僅可以進行定性檢測，而且還可實現對多種指標定量檢測，靈敏度高。（*該技術在2022年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本技術涉及生物免疫學檢測
的蛋白芯片，特別是一種用于待檢標本中目標蛋白的檢測的高敏膜滲濾蛋白芯片。
技術介紹
膜滲濾免疫法檢測標本中某特定的目標分子技術已經比較成熟，因其操作簡便，適合快速檢測一直廣受推崇，但是，其在膜上僅設置一個捕獲抗體的檢測點，并且沒有濃度參照點，因而每次只能檢測單指標，并且只能做到定性檢測，檢測的靈敏度低。
技術實現思路
本技術目的是為了解決上述問題，提供一種結構簡單、不僅可以進行定性檢測，而且還可實現對多種指標定量檢測的高敏膜滲濾蛋白芯片。技術方案包括蛋白芯片主體，還包括有洗液瓶、檢測抗體混合液瓶和底物瓶；所述蛋白芯片主體的上表面開有加樣槽，加樣槽的底面設有膜，膜下為吸水濾紙層，其中，膜上設置有至少I個待檢目標蛋白的濃度參照點和多個待檢目標蛋白的檢測點，如果設置兩個或兩個以上的濃度參照點，濃度參照點的參照濃度依次呈梯度分布，。所述洗液瓶內的洗滌液為O. OlM TBST (pH8. 5，O. 05%Tween-20)，所述檢測抗體混合液瓶內的檢測抗體混合液為膜上固定的抗體對應的配對抗體的酶標記物的混合液；所述底物瓶內的底物為沉淀型TMB底物，所述膜為硝酸纖維素材料或醋酸纖維素材料。所述膜上優選設置有3個以上待檢目標蛋白的濃度參照點，濃度參照點依次呈濃度梯度設置。所述膜上的濃度參照點及檢測點的設置數量本領域技術人員可根據檢測需要進行合理設計，結果判定時，應該將每個檢測點分別與濃度參照點進行比較測算。進行檢測時，將待檢樣品加入加樣槽，等膜上樣品液被膜剛吸干后，再加入洗液瓶內的洗滌液，當膜上洗滌液被膜剛吸干，加入檢測抗體混合液瓶內的檢測抗體混合液，檢測抗體混合液被膜剛吸干，再次加入洗液瓶內的洗滌液，被膜剛吸干，最后加入底物瓶內的沉淀型TMB底物顯色，最后根據膜上檢測點的灰度值和濃度參照點的灰度值進行比對，測算出待檢物(樣品)含量值。本技術的有益效果為1.利用膜滲濾原理和芯片集成化檢測的設計思想設計蛋白芯片組，從而一次可以檢測多個指標；2.所需要的檢測樣品少，只需要100微升；3.操作簡單，5-10分鐘出結果；4.靈敏度高，可以做到精確定量；5.結果的讀取可以采用儀器設備分析也可以通過目視比對進行。附圖說明圖I為本技術示意圖。圖2為膜3上濃度參照點和標準點的布置示意圖。其中，I 一蛋白芯片主體、2 —加樣槽、3 —膜、4 一洗液瓶、5 —檢測抗體混合液瓶、6 一底物瓶、7 —濾紙層、8、9、10、11均為濃度參照點(濃度參照點依次呈濃度梯度設置)，12 一檢測點(為陣列點分布的16個檢測點)。具體實施方式參照圖1，所述高敏膜滲濾蛋白芯片包括蛋白芯片主體I、洗液瓶4、檢測抗體混合液瓶5和底物瓶6，所述蛋白芯片主體I的上表面開有加樣槽2，加樣槽2的底面設有膜3，膜3下方為吸水濾紙層7，參照圖2，其中，膜3上固定有4個待檢目標蛋白的濃度參照點8、9、10、11 (濃度參照點的參照濃度依次呈濃度梯度設置)和待檢目標蛋白的檢測點12 (陣列點分布的16個檢測點)。所述洗液瓶內的洗滌液為O. OlM TBST (pH8. 5，O. 05%Tween-20)，所述檢測抗體混合液瓶內的檢測抗體混合液為膜上固定的抗體對應的配對抗體的酶標記物混合液；所述底物瓶內的底物為沉淀型TMB底物(應避光保存)，所述膜為硝酸纖維素材料或者醋酸纖維素材料。下面以檢測人腫瘤標志物16點蛋白芯片為例，介紹本技術的操作方法 使用時，取100微升待檢樣品(待檢樣品中各個腫瘤標志物的含量已經過ELISA試劑盒測定)加入加樣槽2，等膜3上樣品液被膜3剛吸干就加入洗滌液200微升，膜3上洗滌液被膜3剛吸干就加入100微升檢測抗體混合液，檢測抗體混合液剛被膜3吸干就加入200微升洗滌液，洗滌液剛被膜3吸干最后加入沉淀型TMB底物顯色，最后根據膜3上檢測點的灰度值和參照點的灰度值進行比對，測算出待檢物含量值。4個濃度參照點8、9、10、11濃度參照表指標名稱參照點8參照點9 參照點10 參照點11AFP10 μ g/L5 μ g/L2. 5 μ g/L I. 25 μ g/LCEA10 μ g/L5 μ g/L2. 5 μ g/L I. 25 μ g/LPOA ToUTl5 u/l2.5 u/l 1.25 u/lCA15-350000U/L25000U/L12500 U/L~6250 U/LCA19-950000U/L25000U/L12500 U/L~6250 U/LCA12550000U/L25000U/L12500 U/L~6250 U/LAFU100 mg/mL50 mg/mL25 mg/mL 12. 5 mg/mLalp TooUTl50 u/l 25 u/l 12.5 u/lCA50 TooUTl50 u/l 25 u/l 12.5 u/lPSA10 μ g/L5 μ g/L2. 5 μ g/L I. 25 μ g/L權利要求1.一種高敏膜滲濾蛋白芯片，包括蛋白芯片主體，其特征在于，還包括有洗液瓶、檢測抗體混合液瓶和底物瓶；所述蛋白芯片主體的上表面開有加樣槽，加樣槽的底面設有膜，膜下方為吸水濾紙層，其中，膜上設置至少I個待檢目標蛋白的濃度參照點和多個待檢目標蛋白的檢測點。2.如權利要求I所述的高敏膜滲濾蛋白芯片，其特征在于，所述膜上設置有3個以上待檢目標蛋白的濃度參照點。專利摘要本技術涉及一種高敏膜滲濾蛋白芯片，解決了現有膜滲濾免疫法每次只能檢測單指標，并且只能做到定性檢測，檢測靈敏度低的問題。技術方案包括蛋白芯片主體、洗液瓶、檢測抗體混合液瓶和底物瓶；所述蛋白芯片主體的上表面開有加樣槽，加樣槽的底面設有膜，膜下方為吸水濾紙層，其中，膜上設置有至少1個待檢目標蛋白濃度參照點和多個待檢目標蛋白的檢測點。本技術結構簡單、不僅可以進行定性檢測，而且還可實現對多種指標定量檢測，靈敏度高。文檔編號G01N33/68GK202631548SQ20122028140公開日2012年12月26日 申請日期2012年6月15日 優先權日2012年6月15日專利技術者費小戰, 李學斌, 陳琰, 萬慧丹, 代騰飛, 杜蓉 申請人:武漢伊艾博科技有限公司本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種高敏膜滲濾蛋白芯片，包括蛋白芯片主體，其特征在于，還包括有洗液瓶、檢測抗體混合液瓶和底物瓶；所述蛋白芯片主體的上表面開有加樣槽，加樣槽的底面設有膜，膜下方為吸水濾紙層，其中，膜上設置至少1個待檢目標蛋白的濃度參照點和多個待檢目標蛋白的檢測點。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：費小戰，李學斌，陳琰，萬慧丹，代騰飛，杜蓉，
申請(專利權)人：武漢伊艾博科技有限公司，
類型：實用新型
國別省市：