TMB顯色體系制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種TMB顯色體系，包括TMB儲(chǔ)存液和TMB底物緩沖液母液，所述TMB儲(chǔ)存液由以下原料按如下重量體積比配制：TMB4.5～5.2g；DMSO450mL；甘油50mL；所述TMB底物緩沖液母液由以下原料按如下重量體積比配制：醋酸鈉·3H2O100～120g；檸檬酸·H2O90～110g加入蒸餾水800mL，用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH至3.0～4.0；加入蒸餾水定容至1000mL制得TMB底物緩沖液母液。按以下方法配成顯色劑：①配制TMB底物緩沖液工作液；TMB底物緩沖液母液10mL；H2O2（30%）0.30～0.40mL；加入蒸餾水定容至1000mL制得TMB底物緩沖液工作液；②所述TMB儲(chǔ)存液和所述TMB底物緩沖液工作液按體積比為20～100∶1000的比例混合制得TMB顯色劑。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及生物體外診斷試劑，具體地說是TMB顯色體系。
技術(shù)介紹
建立高效穩(wěn)定的酶聯(lián)免疫檢測(cè)ELISA (Enzyme-Linked-Immuno-Sorbent Assays)技術(shù)平臺(tái)，是許多實(shí)驗(yàn)室和臨床檢驗(yàn)工作者多年來的夙愿。近年來，由于ELISA方法在臨床檢測(cè)及生物藥物檢測(cè)的廣泛應(yīng)用，檢測(cè)要求從之前的定性檢測(cè)發(fā)展到今天定量分析。隨著這種檢測(cè)要求的轉(zhuǎn)化，對(duì)于檢測(cè)方法的精準(zhǔn)性和穩(wěn)定性提出了更高要求。檢測(cè)的數(shù)據(jù)質(zhì)量也由之前的“差不多”發(fā)展到今天的“不能差”。為了保證ELISA方法的穩(wěn)定可靠，需要很多 環(huán)節(jié)的優(yōu)化和密切配合，由于顯色的質(zhì)量直接影響到了 ELISA方法的成敗和檢測(cè)的數(shù)據(jù)質(zhì)量，因此，TMB顯色劑配制雖然是該方法的最后一步，卻是最關(guān)鍵的一步。TMB即四甲基聯(lián)苯胺(3，3’ , 5, 5’ -Tetramethylbenzidine)是一種脂溶性較強(qiáng)的物質(zhì)，經(jīng)與HRP作用后的產(chǎn)物顯藍(lán)色，目視對(duì)比鮮明。TMB性質(zhì)較穩(wěn)定，可配成溶液試劑，只需與H2O2溶液混和即成應(yīng)用液，可直接作底物使用。另外，TMB又有無致癌性等優(yōu)點(diǎn)，因此在ELISA中應(yīng)用日趨廣泛。反應(yīng)后用HCL或H2SOj*止后，TMB產(chǎn)物由藍(lán)色呈黃色，使用酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)，最適吸收波長(zhǎng)為450nm。目前TMB顯色劑配制方法很多，市售的顯色劑不僅價(jià)格昂貴，而且儲(chǔ)存有效期短，在使用過程中對(duì)操作的準(zhǔn)確性要求高；有很多實(shí)驗(yàn)室自行配制，但配制方法多種多樣沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范；在研究論文中使用的TMB顯色劑也是五花八門，對(duì)于檢測(cè)數(shù)據(jù)的對(duì)比及驗(yàn)證造成了困難。因此需要研制用于生物體外診斷的靈敏高效、穩(wěn)定、易用及配置簡(jiǎn)單的TMB顯色體系是當(dāng)務(wù)之急。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的就是要提供一種適宜在實(shí)驗(yàn)室使用的靈敏高效、穩(wěn)定、易用、配置簡(jiǎn)單且成本低廉的酶聯(lián)免疫TMB顯色體系。本專利技術(shù)的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的 本TMB顯色體系，包括TMB儲(chǔ)存液和TMB底物緩沖液母液，其中，所述TMB儲(chǔ)存液由以下原料按如下重量體積比配制 TMB4. 5 5. 2g DMSO450mL 甘油50mL ； 所述TMB底物緩沖液母液由以下原料按如下重量體積比配制 醋酸鈉· 3H20100 120g 檸檬酸· H2O90 IlOg 加入蒸餾水800mL 用濃鹽酸調(diào)節(jié)PH至3. O 4. O加入蒸餾水定容至1000 HiL制得TMB底物緩沖液母液。本專利技術(shù)的TMB顯色體系中，所述TMB儲(chǔ)存液優(yōu)選由以下原料按如下重量體積比配制 TMB5. Og DMSO450mL 甘油50mL ； 所述TMB底物緩沖液母液優(yōu)選由以下原料按如下重量體積比配制 醋酸鈉· 3H20113. Og 檸檬酸· H2O105. Og 加入蒸餾水800mL 用濃鹽酸調(diào)節(jié)PH至3. 6 加入蒸餾水定容至1000 mL制得TMB底物緩沖液母液。本專利技術(shù)的TMB顯色體系，可按以下方法配成顯色劑 ①配制TMB底物緩沖液工作液 TMB底物緩沖液母液IOmL H2O2 (30%)0.30 0.40mL; 加入蒸餾水定容至1000 mL制得TMB底物緩沖液工作液； ②所述TMB儲(chǔ)存液和所述TMB底物緩沖液工作液按體積比為20 100 1000的比例混合制得TMB顯色劑。本專利技術(shù)的TMB顯色體系，配制所述的TMB底物緩沖液工作液時(shí)，H2O2 (30%)加入量?jī)?yōu)選為O. 33mL。TMB儲(chǔ)存液和TMB底物緩沖液工作液優(yōu)選按體積比為I : 50的比例混合制得TMB顯色劑。TMB顯色劑的配制方法包括以下步驟 ①由以下原料按如下重量體積比配制TMB儲(chǔ)存液 TMB5. Og DMSO450mL 甘油50mL ； ②由以下原料按如下重量體積比配制TMB底物緩沖液母液 醋酸鈉· 3H20100 120g 檸檬酸· H2O90 IlOg 加入蒸餾水800mL 用濃鹽酸調(diào)節(jié)PH至3. O 4. O 加入蒸餾水定容至1000 mL制得TMB底物緩沖液母液； ③配制TMB底物緩沖液工作液 TMB底物緩沖液母液IOmL H2O2 (30%)0.30 0.40mL; 加入蒸餾水定容至1000 mL制得TMB底物緩沖液工作液； ④所述TMB儲(chǔ)存液和TMB底物緩沖液工作液按體積比為20 100 1000的比例混合制得TMB顯色劑。TMB顯色劑的配制方法優(yōu)選按以下步驟制備 ①由以下原料按如下重量體積比配制TMB儲(chǔ)存液 TMB5. Og DMSO450mL 甘油50mL ； ②由以下原料按如下重量體積比配制TMB底物緩沖液母液 醋酸鈉· 3H20113. Og 檸檬酸· H2O105. Og 加入蒸餾水800mL 用濃鹽酸調(diào)節(jié)PH至3. 6 加入蒸餾水定容至1000 mL制得TMB底物緩沖液母液。③配制TMB底物緩沖液工作液 TMB底物緩沖液母液 IOmL H2O2 (30%)O. 33mL ； 加入蒸餾水定容至IOOOmL制得TMB底物緩沖液工作液； ④所述TMB儲(chǔ)存液和TMB底物緩沖液工作液按體積比為I : 50的比例混合制得TMB顯色劑。本專利技術(shù)中，所述TMB儲(chǔ)存液是由TMB、DMSO及甘油混勻溶解制得。首先將稱取的TMB加入到DMSO中攪拌混勻，至TMB完全溶解，再加入量取的甘油攪拌混勻即可。本TMB儲(chǔ)存液于4°C避光保存，可使用期限為3年 本專利技術(shù)中，所述TMB底物緩沖液母液的配制過程將稱取的醋酸鈉·3Η20、檸檬酸·Η20加以蒸餾水?dāng)嚢柚聋}分完全溶解，以濃鹽酸調(diào)節(jié)PH至3. O 4. 0，優(yōu)選PH為3. 6，再經(jīng)定容制成。本TMB底物緩沖液母液于4°C避光保存，可使用期限為3年。本專利技術(shù)的TMB顯色體系為雙組份顯色體系，其應(yīng)在使用時(shí)隨時(shí)配制，配制完成后應(yīng)在30分鐘內(nèi)使用。本專利技術(shù)的顯色體系在配制時(shí)，首先將TMB底物緩沖液母液配制成TMB底物緩沖液工作液，再按配制比例，制得TMB顯色劑。附圖說明 圖I為實(shí)施例I所制TMB儲(chǔ)存液和TMB底物緩沖液工作液的配比與顯色劑性能關(guān)系圖。具體實(shí)施例方式實(shí)施例I (O按用量取下述原料配制TMB儲(chǔ)存液 TMB5g DMSO450mL 甘油50mL。所制TMB儲(chǔ)存液于4°C避光保存，有效期三年，隨用隨取。(2)按用量取下述原料配制TMB底物緩沖液母液 醋酸鈉· 3H20113. Og檸檬酸· H2O105. Og 加入蒸餾水800mL 用濃鹽酸調(diào)節(jié)PH至3. 6 加入蒸餾水定容至1000 mL制得TMB底物緩沖液母液。所制TMB底物緩沖液母液于4°C避光保存，有效期三年，隨用隨取。(3)配制TMB顯色劑 ① 配制TMB底物緩沖液工作液 TMB底物緩沖液母液IOmL H2O2 (30%)O. 33mL ； 加入蒸餾水定容至1000 mL制得TMB底物緩沖液工作液。② 取IOmL TMB底物緩沖液工作液中加入O. 2mL TMB儲(chǔ)存液制得TMB顯色劑。所配制的TMB顯色劑應(yīng)在30分鐘內(nèi)使用。實(shí)施例2-10的配制方法同實(shí)施例1，各實(shí)施例的原料配比依照表I進(jìn)行. 表I實(shí)施例2-10中TMB顯色體系中各種相關(guān)組分含量表權(quán)利要求1.ー種TMB顯色體系，包括TMB儲(chǔ)存液和TMB底物緩沖液母液，其特征在干， 所述TMB儲(chǔ)存液由以下原料按如下重本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種TMB顯色體系，包括TMB儲(chǔ)存液和TMB底物緩沖液母液，其特征在于，？所述TMB儲(chǔ)存液由以下原料按如下重量體積比配制：？TMB？？？？？？？？？？4.5～5.2g？DMSO？？？？？？？？？450mL？甘油？？？？？？？？？50mL；所述TMB底物緩沖液母液由以下原料按如下重量體積比配制：醋酸鈉·3H2O？？？？？？？？？？？？？100～120g檸檬酸·H2O？？？？？？？？？？？？？？90～110g加入蒸餾水？？？？？？？？？？？？？？？800mL用濃鹽酸調(diào)節(jié)PH至3.0～4.0加入蒸餾水定容至1000？mL制得TMB底物緩沖液母液。

【技術(shù)特征摘要】
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【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉曉志，趙偉，董向峰，常亮，陳雪靜，高健，段寶玲，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：華北制藥集團(tuán)新藥研究開發(fā)有限責(zé)任公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：