本發(fā)明專利技術(shù)涉及生物免疫分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種穩(wěn)定劑溶液及其制備方法。為了進(jìn)一步提高酶結(jié)合物、蛋白質(zhì)等物質(zhì)的穩(wěn)定性，延長其保存期，本發(fā)明專利技術(shù)提供一種穩(wěn)定劑溶液及其制備方法。本發(fā)明專利技術(shù)提供的穩(wěn)定劑溶液包括蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑、熱休克蛋白、抗氧劑、絡(luò)合劑、和緩沖液。本發(fā)明專利技術(shù)提供的穩(wěn)定劑溶液對(duì)于提高酶結(jié)合物及蛋白等物質(zhì)的穩(wěn)定性效果明顯，且成本低、具有較大價(jià)格優(yōu)勢。本發(fā)明專利技術(shù)提供的穩(wěn)定劑溶液的制備方法工藝簡單，易于配制。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物免疫分析
，具體涉及ー種延長免疫分析中蛋白質(zhì)和酶結(jié)合物溶液保存期的穩(wěn)定劑溶液及其制備方法，酶結(jié)合物混合液和蛋白質(zhì)混合液。
技術(shù)介紹
免疫分析技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域內(nèi)的應(yīng)用非常廣泛，已經(jīng)在臨床診斷、環(huán)境及衛(wèi)生檢測、法醫(yī)鑒定、食品安全等諸多領(lǐng)域中成為必備的常規(guī)技術(shù)手段，并且發(fā)揮著不可替代的作用，具有巨大的市場。免疫分析技術(shù)主要使用抗原和抗體以及它們的各種結(jié)合物，而這些生物大分子蛋白在常溫下是不穩(wěn)定的，因此提高它們的穩(wěn)定性是免疫分析技術(shù)產(chǎn)品必須解 決的問題。蛋白質(zhì)在高濃度時(shí)更不容易降解，而在較低濃度時(shí)極易因降解而失活，所以通常都會(huì)加入牛血清白蛋白(BSA)之類的無關(guān)蛋白作為穩(wěn)定劑，同時(shí)，加入的蛋白也可以減少由于容器壁吸附所造成的損失。在免疫分析產(chǎn)品中，常以抗體酶結(jié)合物作為示蹤劑，而其中又以過氧化物酶的結(jié)合物最為常見。過氧化物酶是將反應(yīng)體系中的過氧化物轉(zhuǎn)變?yōu)樽杂苫虼嗽撁附Y(jié)合物在貯存、運(yùn)輸中會(huì)逐漸產(chǎn)生少量氧化性物質(zhì)并轉(zhuǎn)化為自由基，而后者則可強(qiáng)烈地攻擊酶分子本身以及與其相聯(lián)結(jié)的生物活性分子，從而導(dǎo)致其失活。由于這種“自殺”現(xiàn)象常常導(dǎo)致酶結(jié)合物率先失效，因此，如何提高酶結(jié)合物的穩(wěn)定性也就成了提高該類檢測試劑產(chǎn)品可靠性和有效期的瓶頸。現(xiàn)有技術(shù)中，很多產(chǎn)品使用凍干或濃縮冷藏的酶結(jié)合物，但這需要使用者通過復(fù)溶或稀釋的辦法自行制備工作液，不僅增加了使用者的工作量，還會(huì)造成新的操作誤差。近年來，由于人們發(fā)現(xiàn)了一些可以在酶結(jié)合物溶液中消耗超氧自由基或穩(wěn)定結(jié)合物分子，同時(shí)又不影響免疫反應(yīng)和酶與底物反應(yīng)的物質(zhì)，如某些具備抗氧化特性的維生素、某些多酚類或多羥基類物質(zhì)、某些多聚氨基酸等，從而大大延長了酶結(jié)合物溶液的保存期，使得生產(chǎn)直接采用室溫保存的酶結(jié)合物溶液成為可能，這些物質(zhì)被稱為標(biāo)記物穩(wěn)定劑(Conjugator Stabilizer)。事實(shí)上,能否直接提供含穩(wěn)定劑的酶結(jié)合物溶液,實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品的室溫保存并保證該檢測試劑的高可靠性和長有效期，已經(jīng)成為衡量該類產(chǎn)品的技術(shù)含量以及生產(chǎn)廠家的研發(fā)能力和水平的重要標(biāo)志。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
為了進(jìn)一步提高酶結(jié)合物、蛋白質(zhì)等物質(zhì)的穩(wěn)定性，延長其保存期，本專利技術(shù)提供一種穩(wěn)定劑溶液及其制備方法。本專利技術(shù)提供的穩(wěn)定劑溶液能夠消除酶結(jié)合物“自殺”的現(xiàn)象，本專利技術(shù)提供的穩(wěn)定劑溶液制備方法エ藝簡單，易于操作。實(shí)驗(yàn)證明，兩種常見的試劑蛋白(如牛血清白蛋白，水解明膠等)和熱休克蛋白(HSP)在某些特定的濃度條件下可以有效地延緩酶結(jié)合物的失活現(xiàn)象。高濃度牛血清白蛋白(BSA)可以大大降低非特異免疫反應(yīng)，因此是目前最常用的封閉劑，被廣泛添加于各類免疫檢測試劑中，但其成本較高，這使得不含BSA的免疫分析系統(tǒng)應(yīng)用的越來越多。實(shí)驗(yàn)證明，BSA或水解明膠濃度在1%左右時(shí)酶結(jié)合物活性下降速度相對(duì)穩(wěn)定在一個(gè)水平上；而當(dāng)該濃度達(dá)到8%-10%時(shí)酶結(jié)合物活性下降速度陡降，并維持在很低的水平上。該效應(yīng)與試劑蛋白種類無關(guān)，而僅與其濃度密切相關(guān)。當(dāng)這些試劑蛋白的濃度增加到8%-10%時(shí)，對(duì)于抗體和酶結(jié)合物的生物活性的保護(hù)作用非常強(qiáng)，能夠消除自由基的不良影響。BSA或水解明膠可以代替酶結(jié)合物承受自由基的攻擊，從而作為一種自由基清除劑保護(hù)酶結(jié)合物。同時(shí)當(dāng)酶促反應(yīng)發(fā)生時(shí)，因?yàn)檫^氧化物酶的反應(yīng)是在酶活性中心附近發(fā)生的，所以其自由基傳遞到溶液中對(duì)抗體和酶分子自身造成損傷的幾率非常小，可以忽略不計(jì)。另外，免疫分析反應(yīng)體系中，蛋白質(zhì)濃度的升高會(huì)使反應(yīng)速度更快，更有利于免疫反 應(yīng)。而HSP可以使抗體及其標(biāo)記物在高溫下保持穩(wěn)定。本專利技術(shù)提供了一種穩(wěn)定劑溶液，所述穩(wěn)定劑溶液包括蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑、熱休克蛋白、抗氧劑、絡(luò)合劑、和緩沖液；所述熱休克蛋白選自HSP100，HSP90, HSP70, HSP60, HSP40或其組合。進(jìn)一步的，所述蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑選自牛血清白蛋白，水解明膠，或其組合物。進(jìn)一步的，所述蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑的濃度為8-10% (w/v),所述熱休克蛋白濃度為16-50ng/ml ;所述抗氧劑的濃度為l_5mmol/L,所述絡(luò)合劑的濃度為l_5mmol/L。蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑的濃度(w/v):是指每100毫升溶液中所含溶質(zhì)的克數(shù)。進(jìn)一步的，所述熱休克蛋白為HSP60和HSP40的組合物，所述抗氧劑為維生素C，所述絡(luò)合劑為EDTA。優(yōu)選的，HSP60:HSP40=l:l-3 (摩爾比)。進(jìn)一步的，所述熱休克蛋白由HSP100和HSP60組成。優(yōu)選的，HSP100: HSP60=1:1-3(摩爾比)。進(jìn)一步的,所述蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑為水解明膠,濃度為8-10% (w/v);所述熱休克蛋白的濃度為20-30ng/ml。進(jìn)一步的，所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液，其PH值為6. 5-8. O。進(jìn)一步的,所述蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑為水解明膠,濃度為8-10% (w/v);所述熱休克蛋白的濃度為20-40ng/ml，由HSP60和HSP40組成；所述抗氧劑為維生素C，濃度為3-4mmol/L ；所述絡(luò)合劑為EDTA，濃度為3-4mmol/L ;優(yōu)選的HSP60:HSP40=1 1-3 (摩爾比)。優(yōu)選的，上述水解明膠的濃度為9-10% (w/v)。進(jìn)一步的，本專利技術(shù)還提供一種上述穩(wěn)定劑溶液的制備方法，所述制備方法包括下述步驟(I)配置緩沖液；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑、抗氧劑、絡(luò)合劑、熱休克蛋白、攪拌均勻，得到穩(wěn)定劑溶液。一般情況下，為了使穩(wěn)定劑溶液具有良好的穩(wěn)定性，最后加入熱休克蛋白。磷酸鹽緩沖液可以在市場上購買，也可以按照常見方法配置。本專利技術(shù)還提供上述穩(wěn)定劑溶液的應(yīng)用，所述穩(wěn)定劑溶液用于保護(hù)酶，酶標(biāo)記的抗體/抗原，抗體/抗原，蛋白質(zhì)或其組合。本專利技術(shù)還提供一種酶結(jié)合物混合液，包括酶結(jié)合物，它的特點(diǎn)是，所述酶結(jié)合物分散于上述的穩(wěn)定劑溶液中。本專利技術(shù)還提供ー種蛋白質(zhì)混合液，包括蛋白質(zhì)，它的特點(diǎn)是，所述蛋白質(zhì)分散于上述的穩(wěn)定劑溶液中。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)提供的穩(wěn)定劑溶液經(jīng)過配方優(yōu)化，可以使抗體和蛋白的活性穩(wěn)定在12個(gè)月以上，且可以常溫保存。而且，BSA或水解明膠，及熱休克蛋白在選定濃度下，對(duì)于提高酶結(jié)合物穩(wěn)定性效果明顯，延長了酶結(jié)合物溶液的保存期，且成本低、具有較大價(jià)格優(yōu)勢。本專利技術(shù)提供的穩(wěn)定劑溶液的制備方法，操作簡單，易于配制。本專利技術(shù)提供的穩(wěn)定劑溶液可應(yīng)用于以酶結(jié)合物作為示蹤劑的免疫分析產(chǎn)品中，用于微孔板條的封閉穩(wěn)定、抗體稀釋液、封穩(wěn)液、蛋白稀釋液等方面。本專利技術(shù)提供的酶結(jié)合物混合液和蛋白質(zhì)混合液可廣泛用于生物分析，環(huán)境檢測，食品檢測，動(dòng)物檢測等領(lǐng)域。具體實(shí)施例方式本專利技術(shù)所用的材料和設(shè)備均為現(xiàn)有材料和設(shè)備，例如可以選用美國西格馬-奧利奇有限公司公司生產(chǎn)的維生素C和HSP60等產(chǎn)品；こニ胺四こ酸(EDTA)和磷酸ニ氫鈉可以購自國藥集團(tuán)；牛血清白蛋白、水解明膠和顯色液等產(chǎn)品也均為市場上常見的產(chǎn)品。本專利技術(shù)提供的穩(wěn)定劑溶液的制備方法包括如下步驟(I)配置緩沖液；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入8-10%的蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑、l-5mmol/L抗氧劑和l-5mmol/L絡(luò)合劑,攪拌均勻，再加入16_50ng/ml的熱休克蛋白，攪拌均勻，得到穩(wěn)定劑溶液。本專利技術(shù)提供穩(wěn)定劑溶液的檢測方法為向穩(wěn)定劑溶液中加入酶，酶標(biāo)記的抗體/杭原，抗體/抗原，蛋白質(zhì)或其組合，將整個(gè)溶液置于37°C水本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種穩(wěn)定劑溶液，其特征在于，所述穩(wěn)定劑溶液包括蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑、熱休克蛋白、抗氧劑、絡(luò)合劑、和緩沖液；所述熱休克蛋白選自HSP100，HSP90，HSP70，HSP60，HSP40或其組合。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：孫旭東，孫中鋒，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：北京鴻天志遠(yuǎn)科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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