植物組培中培養基殺菌到接種工序間降低污染率的方法，涉及植物組培，培養基經高壓滅菌后，先擺放7-10天進行觀察，然后將受污染的培養基扔掉，再進行接種。優點在于：1、不必使用其它藥物殺菌方法，操作簡單成本低。2、常規方法要接種后才會發現培養基已經受污染了，浪費了前期工作的投入，而該方法在接種前先將受污染的培養基換掉可節約組培苗成本。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及植物組培，特別是。
技術介紹
近30年來，植物組培技術由于自身獨特的優勢，在無性系快速繁殖、脫毒苗的培育、加快育種進程、優良品種選育和種質資源低溫保存等方面都取得了明顯的經濟效益、社會效益和生態效益，其在科研和生產應用上的作用也越來越重要。但是，由微生物所引起的植物組培污染一直是當前制約植物組培發展的主要障礙。在接種和培養過程中，污染率常常高達10%以上。如何解決這個問題已經引起很多人的重視。 國內許多研究人員開展了這方面的一些研究，但還欠缺更深入的探討。其中在培養過程中，培養基表面或材料表面有時會出現粘液狀物質、菌落或呈混濁的水跡狀甚至泡沫發酵狀，這些多為細菌污染其中又以芽孢桿菌最為普遍和嚴重，國外稱之為“白魔鬼”一這種菌能耐一定高溫、高壓。對消毒劑和紫外線也有一定抗性，常因培養基消毒不徹底而大量發生2001年在《組培中如何防止污染》中王曉燕等提出在給培養基消毒時，一定要將高壓滅菌鍋內的冷氣排盡，使滅菌壓力讀數在O. 01-0. 15MPa之間保持20分鐘。滅菌后，抽取樣品放在培養室培養2-3天。若培養基表面和內部均無任何細菌痕跡，便可使用了。因為細菌、真菌的繁殖高峰期是在7-10天，但該方法并未對此進行觀察。2000年李春燕等在《組織培養中青霉素對細菌污染的抑制作用》提到銀白楊組織培養細菌污染利用400或600萬u/L的青霉素無菌水溶液處理細菌污染苗，分別浸泡60分鐘或40分鐘，可有效地控制銀白楊組織培養細菌污染制。朱廣廉于1995年和1996年分別在《植物組織培養中滅菌和無菌操作的幾個問題》和《植物組織培養中污染的控制》中對植物組織培養的外植體滅菌和相關的無菌操作做了系統的研究。1994年林盛等在《組織培養中污染的控制》中利用4號消毒液處理瓶口能控制污染率在O. 3 %以下。1997年，何云芳等在《金線菊與菊芋在組織培養中細菌污染的影響》中表明在金線蓮和菌芋的細菌污染中用自配消毒劑防治污染也起到了很好的效果。植物組培污染來源2007年，張燕在《組培苗污染原因分析》中提出組織培養過程中的污染源主要有以下幾種(I)戶外風大，菌類進屋機會多。有風就有沙，有沙就有塵，有塵就有菌，菌塵共存，這是菌類進屋的主要原因之一。(2)屋內太潮，菌類繁衍多。需保持室內空氣干燥，如使用空調“除濕”功能，也可減少真菌生長繁殖。(3)人員帶菌多。在整個操作室內，人員可說是最大的帶菌者，不管在毛發或是衣服等地方，都隱藏著數不清的菌類。在進入操作室前，最好能對作業人員進行清潔處理，比如換上干凈的白大褂，換上實驗室的鞋，衣服鞋每星期洗一次，上超凈臺前手要用肥皂清洗兩遍，接種前手再用酒精擦拭一遍。(4)屋內不干凈。紫外線能殺滅或抑制真菌生長，因此應在每次接種前進行20分鐘的紫外燈消毒。(5)清理屋內帶菌組培苗。在植物病害中，真菌所引起的病害尤其嚴重，且因會產生孢子，隨著空氣飄散。一旦落入適當的環境下，一粒小小的孢子便會擴大成一個菌落，污染整個組織培養瓶。因此一旦有真菌污染的組培苗，就要用高壓滅菌器徹底消滅，以防擴散。(6)接種不正確。不正確操作也會增加污染機率，如開蓋太快，滅菌不夠，操作過慢等。接種過程應該輕開蓋，快操作。因此在此環境中，未進行抽樣觀察的其他培養基仍然會有細菌、真菌在大量繁殖、污染。還有對培養基沒有進行7-10天的觀察也無法預知細菌、真菌的繁殖高峰期，所以未·進行抽樣觀察的培養基以及未進行7-10天觀察的培養基的的污染率結果是未知的。所以培養基滅菌后抽樣培養2-3天,若無菌痕跡便認定可用，殊不知未抽樣的大部分培養基未過7-10天觀察期或在室內受二次污染，因此這種認定方法是錯誤的。
技術實現思路
本專利技術的目的在于克服用抗生素等殺菌劑殺菌，未考慮到培養基經高壓滅菌很難百分百滅菌，如果就這樣等培養基冷卻后直接接種，污染率高，增加了組培成本的技術缺陷，為克服上述缺陷，提供一種。本專利技術的方案是培養基經高壓滅菌后，先擺放7-10天進行觀察，然后將受污染的培養基扔掉，再進行接種。本專利技術的優點在于I、不必使用其它藥物殺菌方法，操作簡單成本低。2、常規方法要接種后才會發現培養基已經受污染了，浪費了前期工作的投入，而該方法在接種前先將受污染的培養基換掉可節約組培苗成本。具體實施例方式培養基經高壓滅菌后，先擺放7-10天，然后將受污染的的培養基扔掉，再進行接種。經實驗證明，通過該方法可以降低組培污染率3. 5% (該數值會隨季節的變化而稍微波動)。原理組織培養過程中的污染是指培養基和培養材料滋生雜菌。組織培養中污染率的增加將引起組培成本的提高，造成很大的經濟損失。植物組培污染主要是霉菌、細菌和酵母菌引起的污染。細菌引起的污染會在培養基表面形成明顯的如水污狀、油污狀、氣泡或干縮的紅、黃、乳白等顏色的菌落。真菌引起的培養基污染很快就會出現黑、白、黃、綠等孢子。經實驗觀察，經高壓滅菌后，培養基擺放1-4天并未出現污染現象，第5天開始出現真菌、細菌和雜菌的污染現象，到第10天污染率達到最高值6.5%，第11天起，組培污染率依然保持在6.5%。組培污染率統計見表I。所以培養基經高壓滅菌后，將其放置7-10天，觀察是否有真菌和細菌生長出來。若有則將受污染的培養基拿掉，這樣既可以降低組培苗的成本，又可以降低組培污染率。表I組培污染率統計權利要求1.，培養基經高壓滅菌后，先擺放7-10天進行觀察，然后將受污染的培養基扔掉，再進行接種。全文摘要，涉及植物組培，培養基經高壓滅菌后，先擺放7-10天進行觀察，然后將受污染的培養基扔掉，再進行接種。優點在于1、不必使用其它藥物殺菌方法，操作簡單成本低。2、常規方法要接種后才會發現培養基已經受污染了，浪費了前期工作的投入，而該方法在接種前先將受污染的培養基換掉可節約組培苗成本。文檔編號A01H4/00GK102870679SQ20121039822公開日2013年1月16日 申請日期2012年10月15日 優先權日2012年10月15日專利技術者黃宇翔, 張曉燕, 寧火根 申請人:清流縣鴻翔農莊農業發展有限公司本文檔來自技高網...
【技術保護點】
植物組培中培養基殺菌到接種工序間降低污染率的方法，培養基經高壓滅菌后，先擺放7？10天進行觀察，然后將受污染的培養基扔掉，再進行接種。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：黃宇翔，張曉燕，寧火根，
申請(專利權)人：清流縣鴻翔農莊農業發展有限公司，
類型：發明
國別省市：
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