一種適宜脫毒兔眼藍(lán)莓的高效快繁技術(shù)，其特征在于，采用外植體材料為當(dāng)年生幼嫩枝，采用以下步驟獲得優(yōu)質(zhì)脫毒苗：a、無(wú)菌苗的獲得，b、叢生芽的誘導(dǎo)與增殖，c、葉片再生體系的建立，d、試管苗生根培養(yǎng)，e、煉苗；優(yōu)質(zhì)脫毒苗采用以下方法進(jìn)行改良：f、叢生芽的誘導(dǎo)與增殖，g、葉片再生體系的優(yōu)化，h、試管苗的瓶?jī)?nèi)生根優(yōu)化，i、煉苗基質(zhì)的優(yōu)化。本方法從葉片再生、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)到煉苗這一系列環(huán)節(jié)進(jìn)行了優(yōu)化，建立了一種可高效、快速、持續(xù)獲得優(yōu)良的脫毒兔眼組培種苗技術(shù)。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種脫毒藍(lán)莓高效快繁技術(shù)，具體涉及一種適宜脫毒兔眼藍(lán)莓的高效快繁技術(shù)。
技術(shù)介紹
藍(lán)莓屬杜鵑花科越橘屬(Vaccinum)，為多年生落葉或者常綠小果類灌木型果樹(shù)。藍(lán)莓果實(shí)富含花青素、不飽和脂肪酸、鞣花酸及鈣、鉀、鋅、鐵等元素，B族維生素在藍(lán)漿果中含量尤為突出，具有很高的保健功能，被國(guó)際糧農(nóng)組織列為五大健康食品之一，堪稱世界水果之王，是近幾年來(lái)發(fā)展最迅速的集營(yíng)養(yǎng)與保健于一身的第3代果樹(shù)品種。 兔眼藍(lán)莓(Vaccinium ashei Reade)是越桔屬中經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高的一種，品質(zhì)佳，口感好，其生態(tài)適應(yīng)性、生長(zhǎng)勢(shì)和抗病蟲(chóng)性較強(qiáng)，無(wú)論高地還是低地、粘土或沙土上均能生長(zhǎng)，非常適合我國(guó)南方栽培。隨著引種規(guī)模日益擴(kuò)大，優(yōu)良種苗需求量急劇增加，種苗生產(chǎn)供不應(yīng)求。因此，研究一種新型的脫毒適宜兔眼藍(lán)莓高效快繁技術(shù)已為亟待解決的技術(shù)問(wèn)題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，本專利技術(shù)的目的是提出一種適宜脫毒兔眼藍(lán)莓的高效快繁技術(shù)，組織培養(yǎng)憑借其無(wú)性繁殖的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，可以迅速去除病毒和更新品種，保留品種的本來(lái)特性，變異性小，并且可在較小空間內(nèi)和較短時(shí)間內(nèi)快速地獲得大量無(wú)性系脫毒組培苗，成為藍(lán)莓脫毒和快速繁殖的主要途徑，本專利技術(shù)就兔眼藍(lán)莓建立了一種脫毒高速快繁的有效方法。本專利技術(shù)的技術(shù)方案是一種適宜脫毒兔眼藍(lán)莓的高效快繁技術(shù)，其特征在于，采用外植體材料為當(dāng)年生幼嫩枝，通過(guò)以下步驟獲得脫毒試管苗a、嫩枝摘除葉片，清洗嫩枝，嫩枝切段形成單芽莖段，然后放置在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，完成無(wú)菌苗的獲得步驟，b、待單芽莖段葉芽伸長(zhǎng)后，切下葉芽轉(zhuǎn)接在改良培養(yǎng)基中，完成叢生芽的誘導(dǎo)與增殖步驟，C、取無(wú)菌苗植株上碧綠的葉片，按照不同的葉片切法、不同的培養(yǎng)方式、不同濃度的ZT篩選最合適的葉片，培養(yǎng)在改良培養(yǎng)基中，完成葉片再生體系的建立步驟，d、剪取苗的單芽莖段，在改良培養(yǎng)基中培養(yǎng)，從不同鹽濃度、不同活性碳濃度、不同IBA濃度的培養(yǎng)基中篩選出最適宜生根培養(yǎng)基，完成試管苗生根培養(yǎng)步驟，e、在煉苗基質(zhì)中培養(yǎng)，煉苗時(shí)打開(kāi)培養(yǎng)瓶的瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)環(huán)境的過(guò)渡，在濕度100%的室內(nèi)環(huán)境下培養(yǎng)，然后過(guò)渡到濕度80%、透光度70%的室外條件下，然后再逐步通風(fēng)換氣環(huán)境下培養(yǎng)，統(tǒng)計(jì)成活率，完成煉苗步驟；幼嫩枝采用以下步驟進(jìn)行優(yōu)化改良f、將獲得的無(wú)菌苗轉(zhuǎn)接到不同的增值培養(yǎng)基上進(jìn)行比較，叢生芽生長(zhǎng)速度慢，從增殖率、叢生芽長(zhǎng)勢(shì)、玉米素成本方面進(jìn)行綜合考慮，得到最佳的改良培養(yǎng)基，以完成叢生芽的誘導(dǎo)與增殖的改良，g、進(jìn)行葉片不同部位對(duì)重生苗誘導(dǎo)的影響測(cè)試，按垂直葉片主脈方向?qū)⑷~片切成二部分，葉片背面朝下接種于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，統(tǒng)計(jì)重生率，進(jìn)行不同暗培養(yǎng)時(shí)間對(duì)葉片重生苗誘導(dǎo)的影響測(cè)試，隨著暗培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，重生苗誘導(dǎo)頻率呈增高趨勢(shì)，不經(jīng)暗培養(yǎng)直接在光照培養(yǎng)條件下或暗培養(yǎng)條件下的重生率，進(jìn)行ZT濃度對(duì)誘導(dǎo)葉片重生苗的影響測(cè)試，測(cè)試不同濃度的ZT對(duì)葉片重生苗的誘導(dǎo)作用，以完成葉片再生體系的建立的改良，h、進(jìn)行鹽濃度對(duì)生根的影響測(cè)試，進(jìn)行單個(gè)芽苗在不同鹽濃度的生根培養(yǎng)基中的生根誘導(dǎo)率存在差異比對(duì)，進(jìn)行活性碳和生長(zhǎng)素對(duì)生根的影響測(cè)試，活性碳對(duì)組培苗瓶?jī)?nèi)生根具有重要影響，當(dāng)培養(yǎng)基中無(wú)活性碳時(shí)，插入培養(yǎng)基中的莖基部均先長(zhǎng)愈傷組織然后生根，由于莖根之間維管束不通，不久莖即停止生長(zhǎng)，葉色發(fā)紅脫落，苗長(zhǎng)勢(shì)差，活性碳對(duì)杰兔生根具有促進(jìn)作用，以完成試管苗的瓶?jī)?nèi)生根改良，i、剪取2cm左右長(zhǎng)的無(wú)菌苗新梢在生根培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，約45d左右苗高長(zhǎng)至5-6cm時(shí)，生根率達(dá)95%，對(duì)生根苗移栽在5種不同基質(zhì)上，統(tǒng)計(jì)成活率，以完成煉苗基質(zhì)的優(yōu)化。優(yōu)選方法，步驟無(wú)菌苗的獲得是以田間生長(zhǎng)的當(dāng)年生嫩枝為初始外植體，摘除葉片，用洗衣粉水溶液洗凈灰塵等污物后，經(jīng)自來(lái)水沖洗，轉(zhuǎn)到超凈工作臺(tái)上，先后用75%酒精和0.1 %升汞對(duì)外植體分別進(jìn)行50s與10min的表面滅菌，接著用無(wú)菌水沖洗4次，每次約2min，最后用無(wú)菌濾紙吸去外植體表面水分，將枝條切成l_2cm長(zhǎng)的單芽莖段，WPM培養(yǎng)基具體改良方法以Ca (NO3) 2 · 4H20、KNO3代替原WPM培養(yǎng)基中的K2S04、CaCl2,在無(wú)菌條件下將單芽莖段接種于改良WPM、1. 0mg/LZT、20g/L蔗糖和9g/L日產(chǎn)瓊脂粉的培養(yǎng)基(pH =5. 2)上誘導(dǎo)側(cè)芽萌發(fā)，培養(yǎng)條件為溫度25±2°C、光強(qiáng)2500Lx、經(jīng)過(guò)光周期16h光照和8h黑暗的光周期，30d后莖段葉芽伸長(zhǎng)約4-6cm，葉片數(shù)量達(dá)7-9枚。優(yōu)選方法，步驟叢生芽的誘導(dǎo)與增殖是待莖段葉芽伸長(zhǎng)后，切下轉(zhuǎn)接于以改良WPM為基本培養(yǎng)基，加蔗糖20g/L，日產(chǎn)瓊脂粉8. 8g/L，附加不同濃度的ZT和/或6_BA，pH值為5. 2的增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為溫度25±2°C、光強(qiáng)2500Lx、經(jīng)過(guò)光周期16h光照和8h黑暗的光周期。6-節(jié)氨基腺嘌呤(6-BA,英文通用名6-Benzylaminopurine)細(xì)胞分裂素，可抑制植物葉內(nèi)葉綠素、核酸、蛋白質(zhì)的分解；保綠防老將氨基酸、生長(zhǎng)素、無(wú)機(jī)鹽等向處理部位調(diào)運(yùn)。優(yōu)選方法，步驟葉片再生體系的建立是以改良WPS、1. 0mg/LZT、20g/L蔗糖和9g/L瓊脂粉pH = 5. 2為培養(yǎng)基，取無(wú)菌苗植株上碧綠的葉片，按不同的葉片切法、不同培養(yǎng)方式、不同濃度的ZT，篩選最合適的葉片再生體系，背面朝下，葉尖與葉柄分開(kāi)放置，接種于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，每瓶10片左右，每個(gè)處理組重復(fù)8-10瓶，葉片切法包括4種不同的葉片切法，4種不同的葉片切法為垂直葉片主脈切取葉片的1/2、1/3、2/3以及全葉；培養(yǎng)方式為暗培養(yǎng)時(shí)間分別為0d、7d、20d和30d，每個(gè)處理重復(fù)15-20次，暗培養(yǎng)溫度為25 ±2°C，幾種濃度ZT為0. 5,0. 8、I. I、I. 4、I. 7或2. 0，30d后觀察記錄葉片的出芽率與生長(zhǎng)狀況，計(jì)算誘導(dǎo)重生苗率=誘導(dǎo)重生苗形成的葉片數(shù)/接種葉片數(shù)，從而獲得最佳的葉片再生體系，培養(yǎng)條件為溫度25±2°C、光強(qiáng)2500Lx、經(jīng)過(guò)光周期16h光照和8h黑暗的光周期。優(yōu)選方法，步驟試管苗生根培養(yǎng)為剪取苗高約2. Ocm左右的單芽莖段，改良WPS為基本培養(yǎng)基，另添加蔗糖20g/L，瓊脂9g/L，pH值5. 3左右，從不同鹽濃度(WPS、1/2WPS、1/4WPS、1/8WPS)、不同活性炭濃度(0%,0. 05%,O. 10%,O. 15%、0. 20% )、不同 IBA 濃度(O. Img/L、0. 2mg/L、0. 4mg/L、0. 6mg/L、0. 8mg/L)的培養(yǎng)基中篩選出最適宜的生根培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件為溫度25±2°C、光強(qiáng)2500Lx、光周期16h光照/8h黑暗，煉苗時(shí)，提前3d打開(kāi)瓶蓋進(jìn)行過(guò)渡，移栽后在組培室條件下保持濕度100%的塑料棚中培養(yǎng)20d，然后在濕度80 %、透光度70 %的室外條件下過(guò)渡7d再逐步通風(fēng)換氣，15d后，完全揭去棚膜，2周后統(tǒng)計(jì)成活率，煉苗時(shí)，每套基質(zhì)的栽植量不少于50株,各試驗(yàn)的重復(fù)次數(shù)不少于3次。幾種煉苗基質(zhì)為草炭河沙=I : I ;草炭田土 = I : I ;草炭石英砂=2 3 : I ;草炭珍珠巖=I 2 : I ;全部采用水苔蘚。卩引哚丁酸(IBA, Indole-3-Butytric acid)促進(jìn)植物主根生長(zhǎng)，提高發(fā)芽率，成活率。用本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種適宜脫毒兔眼藍(lán)莓的高效快繁技術(shù)，其特征在于，采用外植體材料為當(dāng)年生幼嫩枝，通過(guò)以下步驟獲得優(yōu)質(zhì)脫毒苗：a、嫩枝摘除葉片，清洗嫩枝，嫩枝切段形成單芽莖段，然后放置在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，完成無(wú)菌苗的獲得步驟；b、待單芽莖段葉芽伸長(zhǎng)后，切下葉芽轉(zhuǎn)接在改良培養(yǎng)基中，完成叢生芽的誘導(dǎo)與增殖步驟，將獲得的無(wú)菌苗轉(zhuǎn)接到不同的增值培養(yǎng)基上進(jìn)行比較，叢生芽生長(zhǎng)速度慢，從增殖率、叢生芽長(zhǎng)勢(shì)、玉米素成本方面進(jìn)行綜合考慮，得到最佳的改良培養(yǎng)基，以完成叢生芽的誘導(dǎo)與增殖的改良；c、取無(wú)菌苗植株上碧綠的葉片，按照不同的葉片切法、不同的培養(yǎng)方式、不同濃度的ZT篩選最合適的葉片，培養(yǎng)在改良培養(yǎng)基中，完成葉片再生體系的建立步驟，進(jìn)行葉片不同部位對(duì)重生苗誘導(dǎo)的影響測(cè)試，按垂直葉片主脈方向?qū)⑷~片切成二部分，葉片背面朝下接種于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，統(tǒng)計(jì)重生率，進(jìn)行不同暗培養(yǎng)時(shí)間對(duì)葉片重生苗誘導(dǎo)的影響測(cè)試，隨著暗培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，重生苗誘導(dǎo)頻率呈增高趨勢(shì)，不經(jīng)暗培養(yǎng)直接在光照培養(yǎng)條件下或暗培養(yǎng)條件下的重生率，進(jìn)行ZT濃度對(duì)誘導(dǎo)葉片重生苗的影響測(cè)試，測(cè)試不同濃度的ZT對(duì)葉片重生苗的誘導(dǎo)作用，以完成葉片再生體系的建立的改良；d、剪取苗的單芽莖段，在改良培養(yǎng)基中培養(yǎng)，從不同鹽濃度、不同活性炭濃度、不同IBA濃度的培養(yǎng)基中篩選出最適宜生根培養(yǎng)基，完成試管苗生根培養(yǎng)步驟，進(jìn)行鹽濃度對(duì)生根的影響測(cè)試，進(jìn)行單個(gè)芽苗在不同鹽濃度的生根培養(yǎng)基中的生根誘導(dǎo)率存在差異比對(duì)，進(jìn)行活性碳和生長(zhǎng)素對(duì)生根的影響測(cè)試，活性碳對(duì)組培苗瓶?jī)?nèi)生根具有重要影響，當(dāng)培養(yǎng)基中無(wú)活性碳時(shí)，插入培養(yǎng)基中的莖基部均先長(zhǎng)愈傷組織然后生根，由于莖根之間維管束不通，不久莖即停止生長(zhǎng)，葉色發(fā)紅脫落，苗長(zhǎng)勢(shì)差，活性炭對(duì)生根具有促進(jìn)作用，以完成試管苗的瓶?jī)?nèi)生根改良；e、在煉苗基質(zhì)中培養(yǎng)，煉苗時(shí)打開(kāi)培養(yǎng)瓶的瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)環(huán)境的過(guò)渡，在濕度100％的室內(nèi)環(huán)境下培養(yǎng)，然后過(guò)渡到濕度80％、透光度70％的室外條件下，然后再逐步通風(fēng)換氣環(huán)境下培養(yǎng)，統(tǒng)計(jì)成活率，完成煉苗步驟，剪取2cm左右長(zhǎng)的無(wú)菌苗新梢在生根培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，約45d左右苗高長(zhǎng)至5？6cm時(shí)，生根率達(dá)95％，對(duì)生根苗移栽在5種不同基質(zhì)上，統(tǒng)計(jì)成活率，以完成煉苗基質(zhì)的優(yōu)化。...
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉如石，邱義蘭，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：劉如石，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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