脂質(zhì)結(jié)合核酸制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種能夠結(jié)合脂質(zhì)的核酸分子。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國(guó)外來(lái)華專利技術(shù)】脂質(zhì)結(jié)合核酸本專利技術(shù)涉及一種能夠結(jié)合脂質(zhì),優(yōu)選磷脂、更優(yōu)選I-磷酸鞘氨醇(sphingosine)的核酸分子；其用于分別制造藥劑、診斷劑和檢測(cè)劑的用途；一種包含所述核酸分子的組合物；一種包含所述核酸分子的復(fù)合物；一種用于使用所述核酸分子來(lái)篩選活性由脂質(zhì)或脂質(zhì)的類似物介導(dǎo)的拮抗劑的方法；以及一種用于檢測(cè)所述核酸分子的方法。脂質(zhì)和脂質(zhì)衍生物因其作為細(xì)胞膜中的結(jié)構(gòu)組分或作為β氧化作用或糖酵解的底物的功能而最為知名。近年來(lái)，脂質(zhì)和脂質(zhì)衍生物已被認(rèn)定為一種在疾病中起重要作用的信號(hào)傳導(dǎo)分子。存在生物活性脂質(zhì)信號(hào)傳導(dǎo)分子的許多實(shí)例，包括磷脂，諸如磷脂酸肌醇(phosphatidyl inositol)(縮寫為 PI)、憐脂酸絲氨酸(phosphatidyl serine)(縮寫為PS)、二脂酰甘油(diacylglyceride)(縮寫為DAG)、磷脂酰甘油(phosphatidylglycerol)(縮寫為PG)和磷脂酸(phosphatidic acid)(縮寫為PA);溶血磷脂酰膽堿 (lysophosphatidyl choline)、血小板活化因子和心磷脂(cardiolipin)。脂質(zhì)信號(hào)傳導(dǎo)分子的其它實(shí)例包括類二十燒酸(eicosanoid),其涵蓋大麻素(cannabinoid)、前列腺素(prostaglandin)、異類二十燒酸(isoeicosanoid)和白三烯(Ieukotriene)。脂質(zhì)可充當(dāng)?shù)诙攀够蛲ㄟ^(guò)直接與其自身特定受體相互作用來(lái)起作用。脂質(zhì)信號(hào)傳導(dǎo)路徑是通過(guò)各種不同刺激物活化的且涉及于一系列不同細(xì)胞過(guò)程(包括粘著、運(yùn)動(dòng)性、增殖、細(xì)胞凋亡和分化)的調(diào)控中。鞘脂及其衍生物具有細(xì)胞外和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)功能且在人疾病中起重要作用。另一且重要類別的脂質(zhì)信號(hào)傳導(dǎo)分子為鞘脂；其包括神經(jīng)酰胺(ceramide)、神經(jīng)酰胺-I-磷酸酯、鞘磷脂、鞘氨醇、鞘氨醇-I-磷酸酯、二氫鞘氨醇(sphinganine)和二氫鞘氨醇-I-磷酸酯。I-磷酸鞘氨醇(縮寫為SlP)為一種380道爾頓(Dalton)的磷脂，分子式為C18H38NO5P0 SlP曾經(jīng)被認(rèn)為僅是神經(jīng)酰胺的一種分解產(chǎn)物，目前已知其在不同生物過(guò)程，諸如細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞增殖、血管生成和淋巴細(xì)胞遷移中具有重要功能(關(guān)于綜述，參見(jiàn)Kim等，Biochim Biophys Acta. 20091791:692-6 ;Maceyka等，J Lipid Res. 2009 50增刊:S272_6 ；Takabe 等，Pharmacol Rev. 200860 (2) : 181-95)。在SlP的其它功能之中，SlP具有抗細(xì)胞凋亡作用且促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。其前體鞘氨醇和神經(jīng)酰胺具有相反功能，從而誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞死亡。因?yàn)镾lP及其前體展現(xiàn)所述相反作用，所以認(rèn)為主要由鞘氨醇磷酸酶和鞘氨醇激酶的相互影響控制的不同鞘氨醇代謝物的相對(duì)平衡而非其絕對(duì)量決定細(xì)胞命運(yùn)。這個(gè)復(fù)雜調(diào)控系統(tǒng)稱為“鞘脂變阻器(sphingolipid rheostat)”。新近研究已暗示SlP及其代謝物以及其前體神經(jīng)酰胺為TNF- a、ILl β和其它細(xì)胞因子的第二信使。各種證據(jù)支持SlP作為負(fù)責(zé)細(xì)胞增殖和存活的第二信使的作用。然而，同時(shí)，許多SlP的生物作用為充當(dāng)細(xì)胞表面上S IP的五個(gè)G蛋白偶聯(lián)受體(縮寫為S1PR)的配體的結(jié)果。最初鑒定為孤兒受體且命名為內(nèi)皮分化基因(縮寫為EDG)，其目前已重命名為 EDG1/S1P” EDG5/S1P2、EDG3/S1P3、EDG6/S1P4、EDG8/S1P5,且加以表征。各受體偶聯(lián)于雜二聚G蛋白(Gq、GU G12-13)，從而活化下游信號(hào)傳導(dǎo)分子，諸如Rho家族的小 GTP 酶(Zhou 和 Murthy, Am J Physiol Cell Physiol. 2004，286:C1130_C1138 ；Kume等，J Pharmacol Exp The r. 2007320:766-773)、有絲分裂原(mitogen)活化的蛋白質(zhì)激酶(Guo 等，Eur J Biochem. 1998257:403-408 ;Sato 等，Mol Pharmacol. 199955:126-133 ；Dikic 等，Nature. 1996383:547-550.)、憐脂酶 C/D (Okamoto 等，J BiolChem. 1998273:27104-27110 ；Gonda 等，Biochem J. 1999337:67-75 ;Banno 等，JBiolChem. 1999274:27385-27391)等。SlPR的表達(dá)為廣布的且SlP影響巨大范圍的細(xì)胞反應(yīng)，包括粘著、收縮、運(yùn)動(dòng)性、形態(tài)發(fā)生、增殖和分化，從而暗示SlP牽涉于血管張力的調(diào)控、傷口愈合、免疫細(xì)胞的遷移、神經(jīng)元信號(hào)傳導(dǎo)、血管生成、繁殖和心血管功能中。反應(yīng)的范圍取決于受體在細(xì)胞和組織中的表達(dá)樣式和相應(yīng)效應(yīng)物。因此，在例如內(nèi)皮細(xì)胞中，活化特定 SlPR 可具有與活化另一 SlPR 相反的作用(Lee 等，Mol Cell. 2001 8:693-704. ；Kimura等，Biochem J. 2000348:71-76. ;Ryu 等，Circ Res. 2002 90:325-332.)。活化一種 SlPR 可差異性調(diào)控 Rho 家族的 GTP 酶(Garcia 等，J Clin Invest. 2001108:689-701 ;Gon 等，ProcNatl Acad Sci USA. 2005102:9270-9275 ;Liu 等，J Clin Invest. 2000 106:951-961)。此夕卜，存在與其它生長(zhǎng)因子信號(hào)傳導(dǎo)路徑的相互影響。存在于循環(huán)血液和淋巴中的SlP主要由血小板、活化肥大細(xì)胞和單核吞噬細(xì)胞制備且分泌。發(fā)現(xiàn)SlP的濃度介于O. ImM至ImM之間，有時(shí)可達(dá)5mM，但僅一部分可用于活化S1PR，因?yàn)榇蠖鄶?shù)SlP結(jié)合于白蛋白(albumin)或其它血漿蛋白。內(nèi)源性SlP水平的改變可導(dǎo)致病理生理學(xué)病狀，包括炎癥和自體免疫性疾病、哮喘、血管生成、心臟病、癌癥、眼病和腦血管疾病。因?yàn)镾lP的許多作用被認(rèn)為由SlP與一種或若干種SlPR的相互作用或結(jié)合介導(dǎo)，所以治療方法已集中于靶向受體。已鑒定并描述眾多不同SlP受體拮抗劑和激動(dòng)劑。其對(duì)各種SlPR的特異性和親和力不同且因此顯示各種功能概況。最先進(jìn)的化合物芬戈莫德(Fingolimod)，也稱為FTY720，為一種前藥且在體內(nèi)被磷酸化。磷酸化形式為SlPR SlP1,S1P3、SlP4和SlP5的激動(dòng)劑且被證明在移植和自體免疫性疾病的模型中高度有效。其當(dāng)前處于治療多發(fā)性硬化癥的3期臨床試驗(yàn)中。由于不同SlPR具有相反作用，所以有興趣鑒定對(duì)各種受體具有特定選擇性的分子。干擾SlP依賴性病理生理學(xué)的另一方法在于影響內(nèi)源性SlP水平。這個(gè)可通過(guò)靶向SlP激酶以改變通過(guò)使鞘氨醇磷酸化制備的SlP的量或通過(guò)靶向SlP磷酸酶以影響脫磷酸SlP的量來(lái)實(shí)現(xiàn)。影響內(nèi)源性生物活性SlP水平的另一方法是通過(guò)由與中和劑的分子相互作用直接抑制SlP作用來(lái)實(shí)現(xiàn)。本專利技術(shù)描述一種中和SlP的方法。構(gòu)成本專利技術(shù)的基礎(chǔ)的問(wèn)題在于提供一種工具本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】

【技術(shù)特征摘要】
【國(guó)外來(lái)華專利技術(shù)】2010.04.21 EP 10004253.0;2011.01.10 EP 11000117.91.一種核酸分子，所述核酸分子能夠結(jié)合脂質(zhì)。2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的核酸分子，其中所述核酸為活性由所述脂質(zhì)介導(dǎo)的拮抗劑。3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的核酸分子，其中所述脂質(zhì)為磷脂，所述磷脂優(yōu)選為I-磷酸鞘氨醇。4.根據(jù)權(quán)利要求I至3中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含中心核苷酸鏈段，其中所述中心核苷酸鏈段包含核苷酸序列 5，WAUUGCCGAWUGUAACGCCUUWAGAGAAAGCACUAG3，或 5，WAUUGCCGWUGUAACGCCUUWAGAGAAAGCACUAG 3， 且其中所述脂質(zhì)優(yōu)選為I-磷酸鞘氨醇。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的核酸分子，其中所述中心核苷酸鏈段包含選自以下的組的核苷酸序列 5， AAUAGCC⑶UGAAACGCCUUUAGAGAAGCACUAG 3'5， AAUAGCCGAUGAAACGCCUUUAGAGAAGCACUAG 3，和5， AAUAGCCGAAUGAAACGCCUUAAGAGAAGCACUAG 3'6.根據(jù)權(quán)利要求4至5中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述核酸分子在5’->3’方向上包含第一末端核苷酸鏈段，所述中心核苷酸鏈段和第二末端核苷酸鏈段，其中 所述第一末端核苷酸鏈段包含三至六個(gè)核苷酸，且 所述第二末端核苷酸鏈段包含三至六個(gè)核苷酸。7.根據(jù)權(quán)利要求4至5中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述核酸分子在5’->3’方向上包含第二末端核苷酸鏈段、所述中心核苷酸鏈段和第一末端核苷酸鏈段，其中 所述第一末端核苷酸鏈段包含三至六個(gè)核苷酸，且 所述第二末端核苷酸鏈段包含三至六個(gè)核苷酸。8.根據(jù)權(quán)利要求6至7中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ X1X2X3SUG 3’且所述第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CASX4X5X6 3’， 其中 X1為A或不存在，X2為G或不存在，X3為S或不存在，X4為S或不存在，X5為C或不存在，且X6 SU或不存在。9.根據(jù)權(quán)利要求6至8中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ X1X2X3SUG 3’且所述第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CASX4X5X6 3’， 其中a)X1 為 A，X2 為 G，X3 為 S，X4 為 S，X5 為 C，且 X6 為 U 或 b)X1不存在，X2為G，X3為S，X4為S，X5為C，且X6為U或 CU1為A，X2為G，X3為S，X4為S，X5為C，且X6不存在或 (I)X1不存在，X2為G，X3為S，X4為S，X5為C，且X6不存在。10.根據(jù)權(quán)利要求6至9中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中 a)所述第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’AGCGUG 3’且所述第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CACG⑶3’或 b)所述第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’GCGUG3’且第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CACGC 3’。11.根據(jù)權(quán)利要求6至8中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ X1X2X3SUG 3’且所述第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CASX4X5X63’， 其中 a) X1不存在，X2不存在，X3為S，X4為S，X5為C，且X6不存在或 b)X1不存在，X2為G，X3為S，X4為S，X5不存在，且X6不存在或 c)X1不存在，X2不存在，X3為S，X4為S，X5不存在，且X6不存在。12.根據(jù)權(quán)利要求6至8和11中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中 a)所述第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’CGUG 3’且所述第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CACG 3’或 b)所述第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’GCUG 3’且所述第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CAGC 3’或 c)所述第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’GGUG 3’且所述第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CACC 3’，優(yōu)選地 所述第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’CGUG 3’且所述第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CACG 3’。13.根據(jù)權(quán)利要求6至8中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ X1X2X3SUG 3’且所述第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CASX4X5X63’， 其中 X1不存在，X2不存在，X3為S或不存在，X4為S或不存在，X5不存在，且X6不存在。14.根據(jù)權(quán)利要求6至8和13中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中 所述第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ GUG 3’且所述第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CAC 3’。15.根據(jù)權(quán)利要求4至14中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述中心核苷酸鏈段為結(jié)合.1-磷酸鞘氨醇所必需。16.根據(jù)權(quán)利要求6至15中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中 所述第一末端核苷酸鏈段和所述第二末端核苷酸鏈段任選彼此雜交，其中在雜交后形成雙鏈結(jié)構(gòu)。17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的核酸分子，其中所述雙鏈結(jié)構(gòu)由三至六個(gè)堿基對(duì)組成。18.根據(jù)權(quán)利要求I至17中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含根據(jù)SEQ.ID. No 12至26、41和42中的任一者的核苷酸序列，優(yōu)選根據(jù)SEQ. ID. No 12、13、15、18、19、.23至26、41和42中的任一者的核苷酸序列，更優(yōu)選根據(jù)SEQ ID No 12、18、23、24、41和42中的任一者的核苷酸序列。19.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含根據(jù)SEQ.ID. NO. 18的核苷酸序列或與其同源的核酸分子，其中同源性為至少85%。20.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含根據(jù)SEQ.ID. NO. 41的核苷酸序列或與其同源的核酸分子，其中同源性為至少85%。21.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含根據(jù)SEQ.ID. NO. 42的核苷酸序列或與其同源的核酸分子，其中同源性為至少85%。22.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中相較于參照核酸分子，所述核酸分子的親和力增加，其中所述參照核酸分子包含根據(jù)SEQ. ID. NO. 18的核苷酸序列且其中所述參照核酸分子由核糖核苷酸組成，其中所述核酸分子包含根據(jù)SEQ. ID. NO. 18的核苷酸序列且其中根據(jù)SEQ. ID. No. 18的所述核苷酸序列的一個(gè)或多個(gè)核苷酸為脫氧核糖核苷酸而非核糖核苷酸。23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含根據(jù)SEQ.ID. No 27至37、39和40中的任一者的核苷酸序列，優(yōu)選根據(jù)SEQ. ID. No 30、34至37、39和40中的任一者的核苷酸序列，更優(yōu)選根據(jù)SEQ. ID. No. 36、37、39和40中的任一者的核苷酸序列。24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含根據(jù)SEQ.ID. NO. 36的核苷酸序列或與其同源的核酸分子，其中同源性為至少85%，其中所述同源核酸包含核糖核苷酸和至少一個(gè)脫氧核糖核苷酸。25.根據(jù)權(quán)利要求I至24中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含修飾基團(tuán)，其中相較于不包含所述修飾基團(tuán)的核酸，包含所述修飾基團(tuán)的所述核酸分子自生物體的排泄率降低。26.根據(jù)權(quán)利要求I至24中任一項(xiàng)所述的核酸分子分子，其中所述核酸分子包含修飾基團(tuán)，其中相較...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：W·普爾施克，S·克魯斯曼，K·布馳尼爾，F·施沃布爾，K·赫利格，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：諾松制藥股份公司，
類型：
國(guó)別省市：