本發明專利技術涉及冬凌草葉水提物及其制備方法，是將干冬凌草葉自來水洗凈之后，按1∶20-28(g∶ml)的比例加雙蒸水于60-100℃，攪拌提取10-60分鐘后，將過濾得到的清液于40℃減壓濃縮，得到冬凌草葉水提物干粉。本發明專利技術還提供其分析方法，進一步涉及在去卵巢雌性小鼠模型上評價該水提物作為抗骨質疏松劑的應用。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及冬凌草葉水提物及其制備方法，涉及該水提物的HPLC- 二極管陣列/(-)ESI-MS-MS指紋圖譜，進一步涉及在去卵巢雌性小鼠模型上評價該水提物作為抗骨質疏松劑的應用。本專利技術屬于生物醫藥領域。
技術介紹
骨質疏松是一種多原因代謝性骨病，以骨質彌漫性減少為特征。50歲以上的絕經婦女有50 %以上在生活的某個時期經歷有骨質疏松引起的骨折。在骨質疏松引起骨折的婦女中，50%以上要花很長時間康復，這就避免不了發生一些后遺癥包括死亡。據估計，遭遇骨折的婦女至少有20%會死亡。對北京和上海的初步調查表明，60歲以上女性骨質疏松癥患病率為40-50%。骨質疏松正日益成為國際公認的健康問題。在當前常見疾病中，骨質疏松位于前十位。·早在1941年，Albright發現骨質疏松癥常見于絕經后婦女，提出雌激素缺乏是絕經后骨質疏松的主要病因。婦女絕經的平均年齡是51歲。這就意味著婦女1/3以上的時間將在絕經期后度過，也就是婦女要在雌激素缺乏的環境下生活30年以上。如果沒有激素替代治療(HRT)，這些婦女不僅將處于無勞動能力的狀態，而且也將經歷一些機體上因骨質疏松引起的病癥，如心血管疾病等，甚至是致死性。一位婦女一生得骨質疏松癥性骨折的幾率是11-18%，其中每6位就有一位會因骨質疏松癥的并發癥而死亡。雌激素替代療法(ERT)能夠減輕婦女絕經期的癥狀，能夠減少心血管疾病的風險，能夠阻止骨丟失。使用雌激素進行治療能夠明顯地抑制骨質缺損和骨代謝，明顯地增大骨骼中礦物質的密度(BMD)，絕經早期的婦女使用雌激素進行治療時，雌激素可使脊椎骨中礦物質的密度增高3-4%。那些使用激素(雌激素/孕激素)進行替代療法(HRT)的患者或者在最近的5 9年內進行至少為期5年的HRT治療的患者，其骨折的危險率降低了50%以上。盡管雌激素是現今為止治療絕經后婦女骨質疏松的最有效的藥物，但長期使用激素替代治療或雌激素替代治療，不可避免地會引起一些并發癥，如使骨形成表面顯著下降，引起子宮內膜增生或腫瘤，引起陰道出血，使乳房變軟，增加乳腺癌的危險性，引起高血壓或使原有高血壓惡化，可明顯增加靜脈血栓栓塞性疾病的危險性等。雌激素的使用期通常不超過3年。冬凌草(DLC),是唇形科香茶菜屬植物碎米極Rabdosia rubescens (Hemsl. ) Hara的全草。冬凌草為多年生草本植物，廣泛分布于我國黃河長江流域，主產于河南濟源太行山、王屋山區一帶。因具有清熱解毒、清咽利喉和消腫止痛功能，民間常年將冬凌草當作茶葉飲用。在過去的30多年里，冬凌草的化學成分及藥理作用研究主要集中在脂溶性部分，代表性成分為冬凌草甲素和冬凌草乙素，與冬凌草葉的水提物相去甚遠。迄今為止只知道少數幾個冬凌草水提取液的活性成分只有a-D-呋喃果糖、阿魏酸、丹參素甲正丁酯、3，4- 二羥基苯乳酸、延命素-l-β -D-吡喃葡萄糖苷、咖啡酸、水楊酸、迷迭香酸和迷迭香酸甲酯等少數幾個化合物，與冬凌草葉的水提物同樣相去甚遠。通過長期的抗骨質疏松藥物研究積累，專利技術人鎖定酚酸為抗骨質疏松結構類型。通過生源分析專利技術人預測到冬凌草葉中含豐富的酚酸。按照這些認識，專利技術人提出本專利技術，用HPLC 二極管陣列/(-) ESI-MS-MS指紋圖譜揭示冬凌草葉水提物的化學成分、用去除卵巢的雌性小鼠揭示冬凌草葉水提物的抗骨質疏松作用。
技術實現思路
本專利技術的第一個目的是提供一種制備冬凌草葉水提物的方法。具體的，包括如下技術方案將干冬凌草葉自來水洗凈之后，按每克20-28暈升的比例加雙蒸水于60-100°C，攪拌提取10-60分鐘后，將過濾得到的清液于40°C減壓濃縮，得到冬凌草葉水提物干粉。其中，干冬凌草葉與雙蒸水的比例優選I : 24(g ml)。·其中，提取溫度優選80°C。其中，攪拌提取時間優選30分鐘。根據本專利技術提供的制備方法得到的冬凌草葉水提物，為淡黃色固體。其中，酚酸的含量為82. 81%。其中，所含有的酚酸包括單咖啡酰酒石酸，丹參素，丹參素咖啡酰酒石酸，2-綠原酸-3-對羥基桂皮酸酒石酸酯，單阿魏酰酒石酸，綠原酸，咖啡酰蘋果酸，二咖啡酰酒石酸，迷迭香酰丹參素酒石酸酯，yuannaneic acid E,紫草酸,咖啡酸,咖啡酰對輕基桂皮酰酒石酸，雙鍵被還原的產物氫化紫草酸，2-丹參素-3-乙酰莽草酸酒石酸酯，丹參素咖啡酰酒石酸，2-(丙二酰奎尼酸單酯)-3-丹參素酒石酸奎尼酸單酯，水化丹酚酸B，丹參素酰丹參素酰迷迭香酸酯，丹酚酸B和迷迭香酸。另外，本專利技術的第二個目的是提供冬凌草葉水提物的分析方法，具體是指建立其HPLC/(-)ESI-MS-MS分析方法，獲取冬凌草葉水提物的指紋圖譜以便控制冬凌草葉水提物的質量。進一步，本專利技術的第三個目的是提供本專利技術冬凌草葉水提物的應用，是用去除卵巢雌性小鼠評價冬凌草葉水提物的抗骨質疏松作用，為預防絕經婦女的骨質疏松提供冬凌草葉水提物作為抗骨質疏松活性高無副作用的物質。附圖說明圖I冬凌草水提物高效液相色譜-二極管陣列3D圖譜。圖2冬凌草水提物在254nm( 二極管陣列)檢測的HPLC- 二極管陣列指紋圖譜。圖3冬凌草葉水提物的(_) ESI-Q-TOF-MS指紋圖譜。圖4小鼠股骨關節頭下方O. 2-0. 4mm處進行定量斷斷層掃描圖。具體實施例方式為了進一步闡述本專利技術，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證性的，它們僅用來對本專利技術進行具體描述，不應當理解為對本專利技術的限制。實施例I冬凌草葉水提物的制備21g干冬凌草葉自來水洗凈之后加500ml雙蒸水于80°C攪拌提取30分鐘。過濾得到的清液于40°C減壓濃縮，得到6. 3g冬凌草葉水提物，為淡黃色固體。研成粉末，供后面的研究使用。實施例2冬凌草葉水提物的HPLC- 二極管陣列指紋圖譜HPLC ffaters 2695Separations Module ；Detector ffaters 2996 二極管陣列(PAD)；Kromasil C18 反相柱(5 μ m, 250mmX 4. 6mm);保護柱(5μ m, IOmmX 4. 6mm);流動相乙腈/水(含O. 05 %冰醋酸)； 流動相流速0.3ml/min ;進樣量50μ1;洗脫方式梯度洗脫(具體梯度見表I)表I冬凌草水提物HPLC- 二極管陣列分析流動相梯度表本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種制備冬凌草葉水提物的方法，包括將干冬凌草葉自來水洗凈之后，按每克20？28毫升的比例加雙蒸水于60？100℃，攪拌提取10？60分鐘后，將過濾得到的清液于40℃減壓濃縮，得到冬凌草葉水提物干粉。
【技術特征摘要】
1.一種制備冬凌草葉水提物的方法，包括將干冬凌草葉自來水洗凈之后，按每克20-28毫升的比例加雙蒸水于60-100°C，攪拌提取10-60分鐘后，將過濾得到的清液于40°C減壓濃縮，得到冬凌草葉水提物干粉。2.根據權利要求I所述的方法，其中，干冬凌草葉與雙蒸水的比例為I: 24(g ml)。3.根據權利要求I所述的方法，其中，提取溫度為80°C。4.根據權利要求I所述的方法，其中，攪拌提取時間為30分鐘。5.權利要求1-4任一方法制備得到的冬凌草葉水提物，其特征在于該冬凌草葉水提物干粉為淡黃色固體。6.根據權利要求5所述的冬凌草葉水提物，其中，所得冬凌草葉水提物中酚酸的含量為 ...
【專利技術屬性】
技術研發人員：彭師奇，趙明，彭莉，姚清河，
申請(專利權)人：彭莉，
類型：發明
國別省市：
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