本發明專利技術公開了一種從肝素副產物中分離提純肝素鈉和硫酸乙酰肝素的方法，其包括將原料肝素副產物溶解后加入醋酸鉀使肝素鈉沉淀分離，沉淀溶解后再加入醋酸鉀沉淀，收集沉淀，溶解后經過無水乙醇多次分級沉淀，進而制得純度較高的肝素鈉；上清液通過加入班氏試劑和飽和氫氧化鈉溶液，離心得到含有硫酸乙酰肝素的溶液，以除銅劑除去銅離子，加入活性炭吸附沉淀并脫色后過濾，再通過陰離子交換樹脂吸附和洗脫，分離得到高純度的硫酸乙酰肝素。本發明專利技術能夠同時從生產肝素鈉的副產物中再次分離得到高純度的肝素鈉和硫酸乙酰肝素，解決了存儲或丟棄大量肝素副產物所需財力和物力，并變廢為寶，將副產物再次利用，既節約了大量成本，又創造了價值。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種，屬于粘多糖生物制藥領域。
技術介紹
肝素鈉是粘多糖硫酸酯類抗凝血藥，近年來研究證明肝素鈉還具有降血脂作用。硫酸乙酰肝素是肝素的亞成分，存在于未分離的肝素中。與肝素鈉相比，硫酸乙酰肝素具有抗凝活性緩和的優點。硫酸乙酰肝素用于抗栓、抗炎、降血脂及糖尿病患者腎臟保護，是近年來研究最熱的粘多糖類生化藥物。從豬小腸粘膜經過離子交換以及分級沉淀生產肝素的過程中產生了大量的副產 物，即肝素副產物，其中主要組成是硫酸乙酰肝素、硫酸皮膚素和肝素鈉，其含量因副產物的旋光度不同而有所差異。但是由于其中的有效物質分離困難，故生產肝素后一般將這些副產物丟棄或存儲，或者只做簡單處理，如傳統工藝主要是從肝素副產物中提純硫酸乙酰肝素和硫酸皮膚素，而肝素鈉則棄去，造成一定的損失。硫酸乙酰肝素和硫酸皮膚素性質相似，采用通常的離子交換層析和有機溶劑分級沉淀方法難以將硫酸乙酰肝素純化。現有技術中，利用硫酸乙酰肝素和硫酸皮膚素與班氏試劑的特殊反應實現兩者的分離，但是在分離得到的硫酸乙酰肝素溶液中，含有大量銅離子。專利(200910039359. 9)通過離子交換層析柱的吸附和洗滌去除銅離子，不僅容易降低樹脂壽命，而且難以將銅離子除盡，使得硫酸乙酰肝素粗品仍帶有淡藍色，經原子吸收分光光度法測定，銅離子含量超過30ppm。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種從肝素副產物中同時分離出質量穩定的高純度的肝素鈉和硫酸乙酰肝素的方法，該法適合于工業生產，生產成本低廉，工藝簡單。本專利技術的目的可以通過以下措施達到一種，其特征是按以下步驟①.將原料肝素副產物溶解于純化水中得到濃度為5-20%(w/v)的溶液，加入醋酸鉀，使溶液中醋酸鉀的含量達30-60% (w/v)，用醋酸調節溶液的pH值至5-7后，在18_20°C下沉淀20-80小時，離心分離沉淀和上清液；②.收集步驟①所得的沉淀，以該沉淀為原料重復步驟①的操作；③.收集步驟②所得的沉淀，用純化水溶解后，加入無水乙醇進行沉淀；得到的沉淀物重復純化水溶解和無水乙醇沉淀的步驟，最后收集沉淀，干燥，得到肝素鈉；④·向步驟①所得的上清液中，加入O. 2-1. 2倍體積的班氏試劑和O. 1-0. 8倍體積的飽和氫氧化鈉溶液，于20-25°C下沉淀后，分離沉淀和上清液；⑤.步驟④所得的上清液加入硫化鈉，靜置沉淀1-3小時，再加入活性炭攪拌后過濾；⑥.步驟⑤得到的清液中加入1-5倍純化水稀釋，并調節溶液的pH值至5-7，然后加入陰離子交換樹脂攪拌吸附，棄去吸附液，樹脂浙干；⑦.先以濃度為O. 1-0. 5mol/L的氯化鈉溶液洗滌樹脂，樹脂浙干；⑧.再以濃度為2. 0-4. Omol/L的氯化鈉溶液洗脫樹脂，收集洗脫液，過濾洗脫液后加入無水乙醇進行沉淀，收集沉淀物，重復純化水溶解和無水乙醇沉淀的步驟，最后收集沉淀物，干燥，得到硫酸乙酰肝素。在步驟①中，原料肝素副產物可采用生產肝素鈉獲取的副產物(濕料)脫水干燥并稱重后為原料，以便于后續處理和計算。原料肝素副產物旋光度的不同體現了其主要成分硫酸乙酰肝素、硫酸皮膚素和肝素鈉的含量差異。該步驟中的肝素副產物水溶液的濃度優選為5-10%，溶液中醋酸鉀的含量優選為30-40%，沉淀處理時間優選為20-50小時。在步驟②中，收集步驟①所得的沉淀，重新進行溶解于純化水中、加入醋酸鉀、用醋酸調節PH值、沉淀以及分離的操作，其條件同步驟①。在步驟③中，純化水的用量以能完全溶解沉淀物為佳，無水乙醇的用量以使溶液中不再繼續產生沉淀為佳。在步驟④中，該步驟中可采用離心或過濾等方式分離沉淀和上清液，優選采用離心分離。在步驟⑤中，硫化鈉的加入量優選為10_12%(w/v)。活性炭的加入量為9_ll%(w/V)。加入活性炭后的攪拌時間一般為5-100分鐘，優選10-30分鐘。·在步驟⑥中，所述的陰離子交換樹脂為丙烯酸類強堿性陰離子交換樹脂。其中中陰離子交換樹脂攪拌吸附時間為1-20小時，優選2-6小時。在步驟⑦中，以濃度為O. 1-0. 5mol/L的氯化鈉溶液洗滌樹脂時間一般為1_5小時。在步驟⑧中，以濃度為2. 0-4. Omol/L的氯化鈉溶液洗脫樹脂時間一般2_10小時。本專利技術的有益效果本專利技術方法利用它們在水中溶解度存在差異這一特點，加入醋酸鉀使肝素鈉從肝素副產物中沉淀分離，沉淀溶解后再加入醋酸鉀沉淀，收集沉淀，溶解后經過無水乙醇多次分級沉淀，進而制得純度較高的肝素鈉；上清液通過加入班氏試劑和飽和氫氧化鈉溶液，離心得到含有硫酸乙酰肝素的溶液，以除銅劑除去銅離子，加入活性炭吸附沉淀并脫色后過濾，再通過陰離子交換樹脂吸附和洗脫，分離得到高純度的硫酸乙酰肝素，經原子吸收分光光度法測定，硫酸乙酰肝素中銅離子的含量不超過8ppm，能夠有效地除去銅離子。本方法可直接得到肝素鈉精品和硫酸乙酰肝素品精品。本專利技術解決了上清液加入班氏試劑和飽和氫氧化鈉溶液后，經離子交換層析柱難以除盡銅離子的問題。本法在陰離子交換樹脂吸附硫酸乙酰肝素前使用除銅劑將銅離子以沉淀形式過濾除去，由于沉淀細小，不易沉降，使用吸附劑攪拌后再過濾，所制得的硫酸乙酰肝素具有更高的純度，且不需要后續再次除銅步驟，可直接用作硫酸乙酰肝素的原料藥。本專利技術能夠同時從生產肝素鈉的副產物中再次分離得到高純度的肝素鈉和硫酸乙酰肝素，解決了存儲或丟棄大量肝素副產物所需財力和物力，并變廢為寶，將副產物再次利用，即節約了大量成本，又創造了價值。具體實施例方式實施例一(I)原料為肝素鈉生產的副產物260kg，測得的旋光值為-34. 5°，將原料溶解于純化水中，使原料濃度為5%(g/mL)，加入醋酸鉀，使醋酸鉀的含量為30%，調節pH至6，在溫度18-20°C下靜置24小時。(2)離心收集沉淀，溶解為5%(g/mL)的溶液，加入醋酸鉀，使醋酸鉀的含量為30%(g/mL)，用醋酸調節pH至6，在溫度18_20°C下靜置24小時。 (3)離心收集沉淀，用純化水溶解后，加入無水乙醇沉淀，離心收集沉淀后再次用純化水溶解，以無水乙醇沉淀。收集沉淀并脫水干燥，得肝素鈉18. 6kg。測得肝素鈉精品的旋光為55°，抗凝血效價為176USP u/mg。(4)步驟⑴所得上清液加入O. 2倍班氏試劑和O. 5倍飽和氫氧化鈉溶液，室溫下沉淀30分鐘，離心分離沉淀和上清液。(5)步驟(4)所得上清液加入適量硫化鈉使其濃度為10%(g/mL)，攪拌后，靜置沉淀I. 5小時，加入適量活性炭使其濃度為10%(g/mL)，攪拌60分鐘后過濾。(6)步驟(5)過濾得到的清液加入I倍純化水稀釋，用濃鹽酸調節pH至7。加入丙烯酸類強堿性陰離子交換樹脂攪拌吸附2小時后，棄去吸附液，浙干。(7)用O. lmol/L的氯化鈉溶液洗滌樹脂2小時，浙干后再次用O. lmol/L的氯化鈉溶液洗滌樹脂I小時。樹脂浙干。(8)將樹脂加入4. Omol/L的氯化鈉溶液洗脫6小時，分離洗脫液后再次用4.Omol/L的氯化鈉溶液洗脫2小時，合并2次洗脫液。加入無水乙醇沉淀，收集沉淀后加入純化水溶解后加入無水乙醇沉淀。收集沉淀用無水乙醇脫水并烘干，得到白色粉末32kg，SP為硫酸乙酰肝素。測得硫酸乙酰肝素精品的旋光為38°，抗凝血效價為52USP u/mg，經原子吸收分光光度法測定，硫酸乙酰肝素中銅本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種從肝素副產物中分離提純肝素鈉和硫酸乙酰肝素的方法，其特征是按以下步驟：①.將原料肝素副產物溶解于純化水中得到濃度為5？20%（w/v）的溶液，加入醋酸鉀，使溶液中醋酸鉀的含量達30？60%（w/v），用醋酸調節溶液的pH值至5？7后，在18？20℃下沉淀20？80小時，離心分離沉淀和上清液；②.收集步驟①所得的沉淀，以該沉淀為原料重復步驟①的操作；③.收集步驟②所得的沉淀，用純化水溶解后，加入無水乙醇進行沉淀；得到的沉淀物重復純化水溶解和無水乙醇沉淀的步驟，最后收集沉淀，干燥，得到肝素鈉；④.向步驟①所得的上清液中，加入0.2？1.2倍體積的班氏試劑和0.1？0.8倍體積的飽和氫氧化鈉溶液，于20？25℃下沉淀后，分離沉淀和上清液；⑤.步驟④所得的上清液加入硫化鈉，靜置沉淀1？3小時，再加入活性炭攪拌后過濾；⑥.步驟⑤得到的清液中加入1？5倍純化水稀釋，并調節溶液的pH值至5？7，然后加入陰離子交換樹脂攪拌吸附，棄去吸附液，樹脂瀝干；⑦.先以濃度為0.1？0.5mol/L的氯化鈉溶液洗滌樹脂，樹脂瀝干；⑧.再以濃度為2.0？4.0mol/L的氯化鈉溶液洗脫樹脂，收集洗脫液，過濾洗脫液后加入無水乙醇進行沉淀，收集沉淀物，重復純化水溶解和無水乙醇沉淀的步驟，最后收集沉淀物，干燥，得到硫酸乙酰肝素。...
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：段艷冰，辛妮，王永毅，
申請(專利權)人：南京健友生化制藥股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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