一種CYP1A2基因多態性檢測特異性引物和液相芯片制造技術

本發明專利技術公開了一種CYP1A2基因檢測液相芯片和特異性引物，該液相芯片主要包括有：每種由5’端的tag序列和3’端針對目的基因突變位點的特異性引物序列組成的ASPE引物，所述特異性引物序列為：針對G216A位點的SEQ?ID?NO.15及SEQ?ID?NO.16；針對C96A位點的SEQ?IDNO.17及SEQ?ID?NO.18；針對C139T位點的SEQ?ID?NO.19及SEQ?ID?NO.20；針對G100A?T位點的SEQ?ID?NO.21及SEQ?ID?NO.22；針對A141T位點的SEQ?ID?NO.23及SEQ?ID?NO.24；針對C113T位點的SEQ?ID?NO.25及SEQ?ID?NO.26；和/或針對G110A位點的SEQ?ID?NO.27及SEQ?ID?NO.28；有anti-tag序列包被的微球；擴增引物。本發明專利技術所提供的檢測液相芯片的檢測結果與測序法的吻合率高達100％，實現多個突變位點的野生型和突變型并行檢測。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于分子生物學領域，涉及醫學和生物技術，具體的是涉及一種CYP1A2基因多態性檢測特異性引物和液相芯片。
技術介紹
P450酶系屬于單加氧酶(monooxygenase),又稱為多功能氧化酶(mixed functionoxidase)、輕化酶(hydroxylase),因其還原態的吸收峰在450nm處而得名。主要分布在內質網上，但也存在于質膜、線粒體、高爾基體、過氧化物酶體、核膜等細胞器的膜中，具有解毒作用，通常可將脂溶性有毒物質代謝為水溶性物質，使有毒物質排出體外。細胞色素P450酶系是一個超家族，由同源性基因編碼的酶蛋白組成，在人基因組中含有57種CYP基因，編碼相應的CYP酶，其中CYP1、CYP2和CYP3家族最為重要。CYP1A2屬于CYPl家族中的CYPlA亞族，由CYP1A2基因編碼，位于15號染色體，長約718kb，包含 7個外顯子和6個內含子，CYP1A2主要存在于肝臟中，約占肝臟CYP酶總量的13%，僅次于CYP3A和CYP2C亞家族，居肝臟各CYP酶含量的第3位。CYP1A2在一些前致癌物和前毒性物質的體內活化過程中也起重要作用。本專利技術目標檢測的CYP1A2基因突變位點，如表所示權利要求1.一種CYP1A2基因多態性檢測液相芯片，其特征是，包括有 (A).針對CYP1A2基因不同多態性位點分別設計的野生型和突變型的ASPE引物對每條ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對目的基因多態性位點的特異性引物序列組成，所述特異性引物序列為針對G216A位點的SEQ ID NO. 15及SEQ ID NO. 16 ;針對C96A位點的 SEQID NO. 17 及 SEQ ID NO. 18 ;針對 C139T 位點的 SEQ ID NO. 19 及 SEQ ID NO. 20 ；針對 G100A T 位點的 SEQ ID NO. 21 及 SEQ ID NO. 22 ;針對 A141T 位點的 SEQ ID NO. 23 及SEQ ID NO. 24 ;針對 Cl 13T 位點的 SEQ ID NO. 25 及 SEQ ID NO. 26 ;和 / 或針對 GllOA 位點的 SEQ ID NO. 27 及 SEQ ID NO. 28 ;所述 tag 序列選自 SEQ ID NO. I SEQ ID NO. 14 ； (B).有anti-tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球,所述anti-tag序列與微球連接中間還設有間隔臂序列；所述anti-tag序列選自SEQ ID NO. 29 SEQ ID NO. 42，且所述anti-tag序列能相應地與(A)中所選的tag序列互補配對； (C).用于擴增出需要檢測的、具有相應多態性位點的目標序列的引物。2.根據權利要求I所述的CYP1A2基因多態性檢測液相芯片，其特征是，所述擴增引物為針對 G216A 位點的 SEQ ID NO. 43 和 SEQ ID NO. 44 ;針對 C96A 位點的 SEQ ID NO. 45 和SEQ IDNO. 46 ;針對 C139T 位點的 SEQ ID NO. 47 和 SEQ ID NO. 48 ;針對 G100AT 位點的 SEQID NO. 49 和 SEQ ID NO. 50 ;針對 A141T 位點的 SEQ ID NO. 51 和 SEQ ID NO. 52 ;針對 C113T位點的 SEQID NO. 53 和 SEQ ID NO. 54 ;和 / 或針對 GllOA 位點的 SEQ ID NO. 55 和 SEQ IDNO. 56。3.根據權利要求I所述的CYP1A2基因多態性檢測液相芯片，其特征是，所述ASPE引物是針對G216A位點的由SEQ ID NO. I和SEQ ID NO. 15組成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQ IDNO. 16組成的序列；針對C96A位點的由SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 17組成的序列及由SEQ IDNO. 4和SEQ ID NO. 18組成的序列；針對C139T位點的由SEQ ID NO. 5和SEQ IDNO. 19組成的序列及由SEQ ID NO. 6和SEQ ID NO. 20組成的序列；針對G100A T位點的由SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 21組成的序列及由SEQ ID NO. 8和SEQ ID NO. 22組成的序列；針對A141T位點的由SEQ ID NO. 9和SEQ ID NO. 23組成的序列及由SEQ ID NO. 10和SEQID NO. 24組成的序列；針對C113T位點的由SEQ ID NO. 11和SEQ ID NO. 25組成的序列及由SEQ ID NO. 12和SEQ IDNO. 26組成的序列；和/或針對GllOA位點的由SEQ ID NO. 13和SEQ ID NO. 27組成的序列和由SEQ ID NO. 14和SEQ ID NO. 28組成的序列。4.根據權利要求I所述的CYP1A2基因多態性檢測液相芯片，其特征是， (A).所述ASPE引物為針對G216A位點的由SEQ ID NO. I和SEQ ID NO. 15組成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 16組成的序列；針對C96A位點的由SEQ ID NO. 3和SEQIDNO. 17組成的序列及由SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO. 18組成的序列；針對C139T位點的由SEQ IDNO. 5和SEQ ID NO. 19組成的序列及由SEQ ID NO. 6和SEQ ID NO. 20組成的序列；針對G100AT位點的由SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 21組成的序列及由SEQ ID NO. 8和SEQID NO. 22組成的序列；針對A141T位點的由SEQ ID NO. 9和SEQ ID NO. 23組成的序列及由SEQ ID NO. 10和SEQ ID NO. 24組成的序列；針對C113T位點的由SEQ ID NO. 11和SEQID NO. 25組成的序列及由SEQ ID NO. 12和SEQ ID NO. 26組成的序列；和針對GllOA位點的由 SEQ ID NO. 13 和 SEQ IDNO. 27 組成的序列和由 SEQ ID NO. 14 和 SEQ ID NO. 28 組成的序列；(B).有anti-tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球,所述anti-tag序列與微球連接中間還設有間隔臂序列；所述anti-tag序列選自SEQ ID NO. 29 SEQ ID NO. 42，且所述anti-tag序列能相應地與(A)中所選的tag序列互補配對； (C)·所述擴增引物為針對G216A位點的SEQ ID NO. 43和SEQ ID NO. 44 ;針對C96A位點的 SEQ ID NO. 45 和 SEQ ID NO. 46 ;針對 C139T 位點的 SEQ ID NO. 47 和 SEQ ID NO. 48 ；針對 GlOOAT 位點的 SEQ ID NO. 49 和 SEQ ID NO. 本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種CYP1A2基因多態性檢測液相芯片，其特征是，包括有：(A).針對CYP1A2基因不同多態性位點分別設計的野生型和突變型的ASPE引物對：每條ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對目的基因多態性位點的特異性引物序列組成，所述特異性引物序列為：針對G216A位點的SEQ？ID？NO.15及SEQ？ID？NO.16；針對C96A位點的SEQID？NO.17及SEQ？ID？NO.18；針對C139T位點的SEQ？ID？NO.19及SEQ？ID？NO.20；針對G100A？T位點的SEQ？ID？NO.21及SEQ？ID？NO.22；針對A141T位點的SEQ？ID？NO.23及SEQ？ID？NO.24；針對C113T位點的SEQ？ID？NO.25及SEQ？ID？NO.26；和/或針對G110A位點的SEQ？ID？NO.27及SEQ？ID？NO.28；所述tag序列選自SEQ？ID？NO.1～SEQ？ID？NO.14；(B).有anti？tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球，所述anti？tag序列與微球連接中間還設有間隔臂序列；所述anti？tag序列選自SEQ？ID？NO.29～SEQ？ID？NO.42，且所述anti？tag序列能相應地與(A)中所選的tag序列互補配對；(C).用于擴增出需要檢測的、具有相應多態性位點的目標序列的引物。...

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：許嘉森，吳詩揚，
申請(專利權)人：廣州益善生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：