一種CYP2A6基因多態(tài)性檢測特異性引物和液相芯片制造技術

本發(fā)明專利技術公開了一種CYP2A6基因檢測液相芯片和特異性引物，該液相芯片主要包括有：每種由5’端的tag序列和3’端針對目的基因突變位點的特異性引物序列組成的ASPE引物，所述特異性引物序列為：針對G84T位點的SEQ?ID?NO.17及SEQ?ID?NO.18；針對G133A位點的SEQ?IDNO.19及SEQ?ID?NO.20；針對T229A位點的SEQ?ID?NO.21及SEQ?ID?NO.22；針對T106C位點的SEQ?ID?NO.23及SEQ?ID?NO.24；針對G148T位點的SEQ?ID?NO.25及SEQ?ID?NO.26；針對T149G位點的SEQ?ID?NO.27及SEQ?ID?NO.28；針對T53C位點的SEQ?ID?NO.29及SEQ?IDNO.30；和/或針對G108A位點的SEQ?ID?NO.31及SEQ?ID?NO.32；有anti-tag序列包被的微球；擴增引物。本發(fā)明專利技術所提供的檢測液相芯片的檢測結果與測序法的吻合率高達100％，實現(xiàn)多個突變位點的野生型和突變型并行檢測。

【技術實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術屬于分子生物學領域，涉及醫(yī)學和生物技術，具體的是涉及一種CYP2A6基因多態(tài)性檢測特異性引物和液相芯片。
技術介紹
近年來，有關代謝酶基因多態(tài)性與腫瘤易感性關系的研究已成為腫瘤研究領域的熱點課題。CYP II家族是目前已知的CYP同功酶中數(shù)量最多，結構最復雜的家族，其中CYP2A基因家族位于人體19號染色體長臂19ql2和19ql3. 2之間，約350kb大小。它包括3個完整基因CYP2A6、CYP2A13和CYP2A7，以及兩個CYP2A7假基因。這些基因都具有含 9個外顯子的典型CYP2A基因亞族結構。其中CYP2A6是最重要的成員，編碼香豆素7-羥 化酶(eoumarin7-hydroxide),在許多外源性化學物質的代謝中起重要作用，并參與許多前致癌物的代謝活化內(nèi)經(jīng)C-氧化(C-oxidation)生成可鐵寧(cotinine)過程,主要是通過CYP2A6酶催化的，因而CYP2A6基因與吸煙所致肺癌密切相關。本專利技術目標檢測的CYP2A6基因突變位點(多態(tài)性位點)，如表所示權利要求1.一種CYP2A6基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是，包括有 (A).針對CYP2A6基因不同多態(tài)性位點分別設計的野生型和突變型的ASPE引物對每條ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對目的基因多態(tài)性位點的特異性引物序列組成，所述特異性引物序列為針對G84T位點的SEQ ID NO. 17及SEQ ID NO. 18 ;針對G133A位點的 SEQ ID NO. 19 及 SEQ ID NO. 20 ;針對 T229A 位點的 SEQ ID NO. 21 及 SEQ ID NO. 22 ；針對 T106C 位點的 SEQ ID NO. 23 及 SEQ ID NO. 24 ;針對 G148T 位點的 SEQ ID NO. 25 及SEQ ID NO. 26 ;針對 T149G 位點的 SEQ ID NO. 27 及 SEQ ID NO. 28 ;針對 T53C 位點的 SEQID NO. 29 及 SEQ IDNO. 30 ;和 / 或針對 G108A 位點的 SEQ ID NO. 31 及 SEQ ID NO. 32 ;所述tag 序列選自 SEQ IDNO. I SEQ ID NO. 16 (B).有anti-tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球,所述anti-tag序列與微球連接中間還設有間隔臂序列；所述anti-tag序列選自SEQ ID NO. 33 SEQ ID NO. 48，且所述anti-tag序列能相應地與(A)中所選的tag序列互補配對； (C).用于擴增出需要檢測的、具有相應多態(tài)性位點的目標序列的引物。2.根據(jù)權利要求I所述CYP2A6基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是，所述擴增引物為針對 G84T 位點的 SEQ ID NO. 49 及 SEQ ID NO. 50 ;針對 G133A、T229A 位點的 SEQ ID NO. 51及 SEQ ID NO. 52 ;針對 T106C、G148T 位點的 SEQ ID NO. 53 及 SEQ ID NO. 54 ;針對 T149G位點的 SEQ ID NO. 55 及 SEQ ID NO. 56 ;針對 T53C 位點的 SEQ ID NO. 57 及 SEQ ID NO. 58 ;和/ 或針對 G108A 位點的 SEQ ID NO. 59 及 SEQ ID NO. 60 3.根據(jù)權利要求I所述CYP2A6基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是，所述ASPE引物為針對G84T位點的由SEQ ID NO. I和SEQ ID NO. 17組成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQ IDNO. 18組成的序列；針對G133A位點的由SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 19組成的序列及由SEQ IDNO. 4和SEQ ID NO. 20組成的序列；針對T229A位點的由SEQ ID NO. 5和SEQID NO. 21組成的序列及由SEQ ID NO. 6和SEQ ID NO. 22組成的序列；針對T106C位點的由SEQ ID NO. 7和SEQID NO. 23組成的序列及由SEQ ID NO. 8和SEQ ID NO. 24組成的序列；針對G148T位點的由SEQID NO. 9和SEQ ID NO. 25組成的序列及由SEQ ID NO. 10和SEQID NO. 26組成的序列；針對T149G位點的由SEQ ID NO. 11和SEQ ID NO. 27組成的序列及由SEQ ID NO. 12和SEQ IDNO. 28組成的序列；針對T53C位點的由SEQ ID NO. 13和SEQ IDNO. 29組成的序列及由SEQ IDNO. 14和SEQ ID NO. 30組成的序列；和/或針對G108A位點的由 SEQ ID NO. 15 和 SEQ ID NO. 31 組成的序列及由 SEQ ID NO. 16 和 SEQ ID NO. 32 組成的序列。4.根據(jù)權利要求I所述CYP2A6基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是， (A). ASPE引物為針對G84T位點的由SEQ ID NO. I和SEQ ID NO. 17組成的序列及由SEQID NO. 2和SEQ ID NO. 18組成的序列；針對G133A位點的由SEQ ID NO. 3和SEQ IDNO. 19組成的序列及由SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO. 20組成的序列；針對T229A位點的由SEQ ID NO. 5和SEQ ID NO. 21組成的序列及由SEQ ID NO. 6和SEQ ID NO. 22組成的序列；針對T106C位點的由SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 23組成的序列及由SEQ ID NO. 8和SEQID NO. 24組成的序列；針對G148T位點的由SEQ ID NO. 9和SEQ ID NO. 25組成的序列及由SEQ ID NO. 10和SEQ ID NO. 26組成的序列；針對T149G位點的由SEQ ID NO. 11和SEQID NO. 27組成的序列及由SEQ IDNO. 12和SEQ ID NO. 28組成的序列；針對T53C位點的由SEQ ID NO. 13 和 SEQ ID NO. 29 組成的序列及由 SEQ ID NO. 14 和 SEQ ID NO. 30 組成的序列；和針對G108A位點的由SEQ ID NO. 15和SEQ ID NO. 31組成的序列及由SEQ ID NO. 16和SEQ ID NO. 32組成的序列； (B).有anti-tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球,所述anti-tag序列與微球連接中間還設有間隔臂序列；所述anti-tag序列選自SEQ ID NO. 33 SEQ ID NO. 48，且所述anti-tag序列能相應地與(A)中所選的tag序列互補配對； (C).所述擴增引物為:針對G84T位點的SEQID NO. 49及SEQ ID NO. 50 ;針對G133A、T229A 位點的 SEQ ID NO. 51 本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術保護點】
一種CYP2A6基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是，包括有：(A).針對CYP2A6基因不同多態(tài)性位點分別設計的野生型和突變型的ASPE引物對：每條ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對目的基因多態(tài)性位點的特異性引物序列組成，所述特異性引物序列為：針對G84T位點的SEQ？ID？NO.17及SEQ？ID？NO.18；針對G133A位點的SEQ？ID？NO.19及SEQ？ID？NO.20；針對T229A位點的SEQ？ID？NO.21及SEQ？ID？NO.22；針對T106C位點的SEQ？ID？NO.23及SEQ？ID？NO.24；針對G148T位點的SEQ？ID？NO.25及SEQ？ID？NO.26；針對T149G位點的SEQ？ID？NO.27及SEQ？ID？NO.28；針對T53C位點的SEQ？ID？NO.29及SEQ？IDNO.30；和/或針對G108A位點的SEQ？ID？NO.31及SEQ？ID？NO.32；所述tag序列選自SEQ？IDNO.1～SEQ？ID？NO.16：(B).有anti？tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球，所述anti？tag序列與微球連接中間還設有間隔臂序列；所述anti？tag序列選自SEQ？ID？NO.33～SEQ？ID？NO.48，且所述anti？tag序列能相應地與(A)中所選的tag序列互補配對；(C).用于擴增出需要檢測的、具有相應多態(tài)性位點的目標序列的引物。...

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：許嘉森，楊惠夷，
申請(專利權)人：廣州益善生物技術有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：