本發明專利技術公開了雞源枯草芽孢桿菌和戊糖片球菌的固體發酵菌劑的制備方法，選用枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）SCS4562菌株和戊糖片球菌（Pediococcus?pentosaceus）SCS4560菌株，枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）SCS4562菌株保藏編號：CGMCC??NO.6565；戊糖片球菌（Pediococcus?pentosaceus）SCS4560菌株保藏編號：CGMCC?NO.6566；兩個菌株經過發酵，獲得發酵產物即為固體發酵菌劑。將本發明專利技術的固體發酵菌劑直接添加入飼料，維持了腸道微生態健康并幫助腸道吸收飼料中營養成分，提高雞群生長性能。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種雞源枯草芽孢桿菌和戊糖片球菌的固體發酵菌劑及其制備方法和應用，屬于微生物
技術介紹
枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)屬于芽孢桿菌屬，桿狀，染色均勻；芽孢0.8X1. 5^1. 8 μ m ;菌落源或不規則形，表面色暗；可起皺，形成奶油色或褐色；在培養液中可形成完整的膜，輕度渾濁。戍糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)屬于片球菌書,球狀，四聯活成片狀排列；細胞直徑約Iym;在MRS培養基上生長良好，菌落生長在表面的呈規則的圓形，白色扁 平；在液體培養基中渾濁，菌體沉淀到培養基底部，呈白色。戊糖片球菌在厭氧或兼性厭氧條件下生長并產生乳酸等代謝產物，對酸有較強的耐受范圍(PH4. 5-8)，且產生片球菌素(pediocin)以抑制有害腸道細菌的生長；但該菌對溫度的耐受范圍相對較低，高于50°C時細菌失活；健康雞體溫為41. 5°C，因此該菌只能作為微生物添加劑添加入飼料中，而不能經過高溫，制粒等加工過程。而枯草芽孢桿菌屬于不致病的需氧芽孢桿菌，其芽孢形式的活菌能夠耐酸、耐高溫，穩定性較好。研究發現，即使是物種相同不同株系的益生菌對腸道不同區域的特異性粘附有差，發揮的特異免疫作用也有差。微生物飼料添加劑具有特異的宿主范圍，超出宿主范圍對添加劑的作用效果不大。同時，在動物個體發育各個階段，將乳酸菌和芽孢桿菌配合使用，不僅能有效抑制大腸桿菌、沙門氏菌的生長，同時產生各種消化酶(如蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶)的活性，使對飼料的利用效率高于單一菌株。常見禽用益生菌使用方式主要是飲水或飼料。但如果用飲水方式添加時，容易受到空氣、紫外線、自來水中消毒劑和金屬離子等作用而降低活性甚至失活，且該種方式受到地域和氣候的影響，對使用量無法控制直接影響發揮的作用。因此，制成微生物粉狀制劑直接飼喂動物，受外界環境的影響更易控制并降低，對飼喂量的確定更易被普通養殖戶掌握，便于推廣。禽用飼料的主要原料成分主要包括玉米粉和豆柏；麥麩蛋白質含量很高，氨基酸組成可與整粒小麥相比，因此在禽用飼料中也占有一定比例；但其高纖維、低容重等特征限制其使用比例。通過微生物在固體發酵過程中提高對飼料原料中蛋白質的水解，形成更多可直接被動物腸道吸收利用的小肽(二、三肽)，對家禽生長起到促進作用；同時，益生菌以活菌形式進入腸道后，改變腸道微生物區系，產生的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等酶活作用也促進了對詞料原料的水解和小妝的形成，提聞氣基酸、礦物兀素的吸收利用，從而提聞動物生長或生產性能。因此，通過模擬人工胃腸道環境優選出的枯草芽孢桿菌和戊糖片球菌以飼料原料為培養基的固體發酵條件的優化，并混合兩微生物菌劑飼喂雞群，提高動物個體生長性能的應用意義重大。
技術實現思路
本專利技術提供兩株從雞盲腸分離得到、并通過人工胃腸道環境耐受試驗的枯草芽孢桿菌和戊糖片球菌，并直接以飼料原料為培養基優化固體發酵技術，制備得到含優選雞源枯草芽孢桿菌、戊糖片球菌的微生物制劑及其混合菌劑的應用方法。雞源枯草芽孢桿菌和戊糖片球菌的固體發酵菌劑的制備方法，菌種選擇選用枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)SCS4562菌株和戍糖片球菌(Pediococcus pentosaceus) SCS4560菌株，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) SCS4562菌株已于2012年9月14 H 保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址北京市朝陽區北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所，保藏編號=CGMCC NO. 6565，分類命名枯草芽孢桿菌 Bacillus subtilis ；戍糖片球菌(Pediococcuspentosaceus) SCS4560 菌株已于 2012 年 9 月 14 日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址北京市朝陽區北辰西路I 號院3號中國科學院微生物研究所，保藏編號CGMCC NO. 6566,分類命名戊糖片球菌 Pediococcus pentosaceus ；;兩個菌株經過發酵,獲得發酵產物即為固體發酵菌劑。所述的發酵方法為(I)種子培養將所述的兩個菌株經斜面活化后，分別在無菌條件下用接種環接 I 2環于40ml液體種子培養基中，以120轉/分鐘的轉速、37°C恒溫搖床培養48h，得一級種子液；以接種環接2 3環于同樣配方的液體種子培養基中，以120轉/分鐘的轉速、 37°C恒溫搖床培養36小時，得二級種子液；(2)固體發酵培養以3% 10%質量比的接種量，將二級種子液接種于經121°C、 30分鐘滅菌的固體發酵培養基中，按照料水比I : 0. 9-1. 5 g/ml和容量比為8% 24%在發酵瓶進行混合后置于恒溫培養箱上，控制環境溫度在35 42°C，并用帶4層滅菌紗布封口 ；時常拍打發酵瓶壁，使上、中、下料舒散、混合，發酵72小時，發酵結束；(3)含枯草芽孢桿菌活菌的發酵產物晾干將發酵產物于干凈搪瓷盤，加入兩倍量飼用玉米粉(過40目篩)混合均勻，平攤散開放置于通風處自然風干，當含水率低于10% 時結束風干過程，收集產物并粉碎，過40目篩，所得粉末即為含枯草芽孢桿菌活菌的固體發酵產物；含戊糖片球菌活菌的發酵產物晾干將發酵產物于干凈搪瓷盤，加入兩倍量飼用玉米粉(過40目篩)混合均勻，平攤散開放置于通風處自然風干，當含水率低于10%時結束風干過程，收集產物并粉碎，過40目篩，所得粉末即為含戊糖片球菌活菌的固體發酵產物。枯草芽孢桿菌SCS4562斜面活化培養基為牛肉膏0. 5%，氯化鈉0. 5%，蛋白胨I. 0%， 葡萄糖2. 5%，磷酸二氫鉀0. 03%,補水至100% ;調節pH值至6. 8，置于37 °C培養箱培養 20h ；戊糖片球菌SC4560斜面活化培養基為葡萄糖2%，牛肉膏1%，蛋白胨lg，酵母膏0.5%，吐溫-80 0. 1%，磷酸氫二鉀0. 025%,水合硫酸鎂0. 05%,水合硫酸錳0. 025%,檸檬酸銨0.2%，乙酸鈉0. 5%，加滅菌水至全部溶解，調節pH值至5. 4，置于37°C培養箱培養22h ；上述液體種子培養基為枯草芽孢桿菌(按質量百分含量計):2. 5%葡萄糖，1%蛋白胨，0. 5%氯化鈉，0. 5%牛肉膏，磷酸二氫鉀O. 03%,加滅菌水至全部溶解，調節pH值至6. 8 7，高壓120°C滅菌30分鐘后冷卻備用；戊糖片球菌(按質量百分含量計)葡萄糖2%，牛肉膏1%，蛋白胨lg，酵母膏O. 5%， 吐溫-80 O. 1%，磷酸氫二鉀O. 025%,水合硫酸鎂O. 05%,水合硫酸錳O. 025%,檸檬酸銨O. 2%， 乙酸鈉O. 5%，加滅菌水至全部溶解，調節pH值至5. 4，高壓113°C滅菌30分鐘后冷卻備用；上述固體發酵培養基為枯草芽孢桿菌與戊糖片球菌相同，將玉米、豆柏、麥麩打碎過40目篩，按照玉米600g，豆柏300g，麥麩50g的比例，高壓115°C滅菌15分鐘，冷卻后無菌條件下加磷酸緩沖液IOOOml混勻，自然pH即可。上述以優選雞源枯草芽孢桿菌和戊糖片球菌的固體發酵優化生產工藝及其組合菌劑的應用中，步驟(2)所述接種量優選5%;步驟(2)所述料水比優選I : 1.1 g/ml;步驟(2)所述容量比優本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種雞源枯草芽孢桿菌和戊糖片球菌的固體發酵菌劑的制備方法，其特征在于，菌種選擇：選用枯草芽孢桿菌（Bacillus？subtilis）SCS4562菌株和戊糖片球菌（Pediococcus？pentosaceus）SCS4560菌株，枯草芽孢桿菌（Bacillus？subtilis）SCS4562菌株保藏編號：CGMCC？？NO.6565；戊糖片球菌（Pediococcus？pentosaceus）SCS4560菌株保藏編號：CGMCC？NO.6566；兩個菌株經過發酵，獲得發酵產物即為固體發酵菌劑。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉益平，孫靜，李念珍，熊彥，朱慶，鐘航，
申請(專利權)人：四川農業大學，
類型：發明
國別省市：
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