抗體制劑制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供一種適合于人靜脈內(nèi)施用的抗體制劑，所述抗體制劑包含IgG抗體、IgA抗體和占抗體總量至少5重量%的IgM抗體，其中，所述制劑從人血漿制得，其中，所述抗體制劑具有特異性補(bǔ)體活化活性，并且其中，在適合于確定所述抗體制劑的非特異性地激活補(bǔ)體的能力的用人血清進(jìn)行的體外測定中，所述抗體制劑基本不產(chǎn)生C5a且/或基本不產(chǎn)生C3a。本發(fā)明專利技術(shù)還提供所述抗體制劑的醫(yī)藥應(yīng)用。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】抗體制劑
本專利技術(shù)涉及一種包含IgM的抗體(免疫球蛋白)制劑，所述制劑具有特異性補(bǔ)體活化活性但具有低的非特異性補(bǔ)體活化能力。本專利技術(shù)還涉及所述抗體制劑在醫(yī)藥中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
從人類血漿制備的且適合于靜脈內(nèi)施用的免疫球蛋白組合物在本領(lǐng)域中是已知的，且數(shù)十年來在多種疾病的治療中起著重要作用。免疫球蛋白用于例如治療人體感染，并且可以分為具有不同生化和生理性質(zhì)的多種類別。免疫球蛋白G參與抵御病毒抗原，而IgM則主要在抗細(xì)菌和抗毒素的免疫應(yīng)答中具有活性。免疫球蛋白溶液包含占各種百分比的IgG、IgA和IgM，且不同的制劑具有不同的治療應(yīng)用，例如，IgM百分比較高的制劑用于預(yù)防或治療細(xì)菌感染。免疫球蛋白溶液通常從血漿或血清的組分(例如Cohn組分)中制得。隨后對這些組分進(jìn)行多個(gè)純化步驟來除去包括病毒、變性蛋白、蛋白酶和脂質(zhì)在內(nèi)的污染物。用于組分分離的人類血清采集自數(shù)千供體，盡管對來源血漿進(jìn)行了全面檢測，但仍可能含有病原體病毒。因此，為了獲得安全的用于醫(yī)藥應(yīng)用產(chǎn)品，用于使病毒滅活或除去病毒的處理步驟必不可少。用于病毒滅活/去除的若干種技術(shù)在本領(lǐng)域中是已知的，例如化學(xué)處理、UVC光照射或納米過濾，實(shí)施這些技術(shù)是為了確保總體病毒安全性。通過使用生產(chǎn)過程的實(shí)驗(yàn)室規(guī)模模型驗(yàn)證了這些處理步驟的病毒去除或滅活能力，并且對每個(gè)步驟都確定了去除或滅活系數(shù)。滅活/去除系數(shù)的提高為藥物產(chǎn)品增添了額外的病毒安全性。現(xiàn)今，來自主管機(jī)構(gòu)的準(zhǔn)則要求在制造源自血漿的藥物時(shí)至少有兩個(gè)針對有包膜和無包膜的病毒的有效步驟。雖然若干種方法(例如溶劑/去垢劑處理、辛酸處理、納米過濾和熱處理)可有效地滅活或除去有包膜病毒，但是僅有幾種已知方法可滅活或除去無包膜病毒，例如細(xì)小病毒。這些無包膜病毒大部分都非常小，通常會(huì)穿過孔徑大于20nm的納米過濾器。而該孔徑對于直徑可高達(dá)30nm的IgM分子而言過小。無包膜病毒可被例如β-丙內(nèi)酯等化學(xué)物質(zhì)有效地滅活，但是，這也會(huì)產(chǎn)生功能受到破壞的經(jīng)修飾的免疫球蛋白。另一種有效的處理是UVC照射(EP1842561,CAF-DCF)。然而，已知的溶劑/去垢劑處理、辛酸處理和溫和熱處理對無包膜病毒基本沒有效果。如上所述，除了潛在的病毒以外，還有必要除去例如脂質(zhì)、蛋白酶、蛋白聚集體和變性的免疫球蛋白等其他污染物。為了(1)確保產(chǎn)品符合有關(guān)病毒污染的生物安全性準(zhǔn)則、(2)在靜脈內(nèi)施用后使患者對產(chǎn)物耐受、(3)使產(chǎn)品在長期儲(chǔ)存過程中穩(wěn)定(任何殘留的蛋白水解活性都可能導(dǎo)致產(chǎn)品在長期儲(chǔ)存(例如2年)過程中降解)和(4)產(chǎn)生所需的化合物混合物/藥物組合物，除去所有上述污染物是必須的。然而，與此同時(shí)，至關(guān)重要的是用來除去污染物的純化步驟不會(huì)干擾免疫球蛋白分子，從而盡可能地使這些免疫球蛋白分子保留其正常生物活性并以高產(chǎn)率保留在溶液中。該平衡難以實(shí)現(xiàn)，因?yàn)樵S多已知的純化步驟還對免疫球蛋白特別是IgM的活性會(huì)有負(fù)面影響；例如，過長時(shí)間的UVC照射可以使在最終免疫球蛋白溶液中所得到的天然的具有活性的IgM的產(chǎn)率降低。這不僅導(dǎo)致最終免疫球蛋白溶液的功效降低，而且還使該溶液在體內(nèi)的耐受性變差。對患者而言，聚集體和變性的免疫球蛋白(其量可能通過某些純化步驟增加)尤其是潛在的風(fēng)險(xiǎn)，因?yàn)樗鼈兊姆翘禺愋缘丶せ钛a(bǔ)體的能力很高，從而在接受這些變性免疫球蛋白的患者中產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用。非特異性補(bǔ)體活化是指在特異性抗體-抗原復(fù)合物不存在的情況下補(bǔ)體級聯(lián)反應(yīng)的啟動(dòng)。應(yīng)嚴(yán)格避免非特異性補(bǔ)體活化，因?yàn)槠淇梢砸鸩缓闲枰母弊饔茫绺哐獕骸⒊奔t、頭痛、發(fā)熱、發(fā)冷、惡心、嘔吐、肌肉痛、呼吸困難和心動(dòng)過速。另一方面，特異性補(bǔ)體活化合乎需要，其僅在免疫球蛋白已結(jié)合其特異性抗原后發(fā)生。非特異性補(bǔ)體活化以所謂的抗補(bǔ)體活性(ACA)計(jì)，ACA通過《歐洲藥典(EuropeanPharmacopoeia)》中描述的標(biāo)準(zhǔn)化測試來測量。補(bǔ)體系統(tǒng)在對病原體的免疫防御中的作用是公知的。補(bǔ)體系統(tǒng)由約20種蛋白組成，這些蛋白依次發(fā)生活化。經(jīng)典補(bǔ)體途徑通常需要特異性抗原抗體復(fù)合物來激活，而旁路途徑可以在無抗體存在的情況下由抗原來激活。補(bǔ)體活化的經(jīng)典途徑和旁路途徑都產(chǎn)生蛋白酶-C3轉(zhuǎn)化酶。C3轉(zhuǎn)化酶切斷并激活補(bǔ)體成分C3，產(chǎn)生C3a和C3b，并且在C5轉(zhuǎn)化酶上引起進(jìn)一步的斷裂和活化事件的級聯(lián)反應(yīng)以形成C5a和C5b。C5b引發(fā)膜攻擊途徑，該途徑產(chǎn)生由C5b、C6、C7、C8和多聚的C9組成的膜攻擊復(fù)合物。這是補(bǔ)體級聯(lián)反應(yīng)的細(xì)胞溶解性末端產(chǎn)物，其形成跨膜通道，該通道引起靶細(xì)胞(如細(xì)菌)的滲透性溶解。補(bǔ)體活化還導(dǎo)致過敏毒素的形成，包括生物活性蛋白C5a。該過敏毒素是免疫和炎性細(xì)胞的有力趨化劑，并且誘導(dǎo)細(xì)胞活化并使組胺從肥大細(xì)胞中釋放出。在過量或不受控制的和/或非特異性的補(bǔ)體活化的情況下，C5a的過度產(chǎn)生能夠引起對患者有害的效果。C5a是有效的白細(xì)胞化學(xué)吸引劑，在補(bǔ)體活化的部位引起白血球、尤其是中性粒細(xì)胞的積累。C5a激活白血球，而且是強(qiáng)效的炎癥介質(zhì)。盡管這些功能在特異性抗體-抗原復(fù)合物的反應(yīng)過程中有益，但由于潛在的副作用，必須避免C5a的所有非特異性產(chǎn)生。因?yàn)榕cIgG制劑相比IgM抗體容易在溶液中聚集，所以對于IgM免疫球蛋白制劑(即，包含至少5%IgM的制劑)而言，非特異性補(bǔ)體活化特別成問題。IgM制劑難以穩(wěn)定化，尤其是在其相對于血漿濃度有所富集和儲(chǔ)存在液體溶液中時(shí)。還已知IgM是補(bǔ)體的強(qiáng)力活化劑；與抗原結(jié)合的單個(gè)分子即可激活補(bǔ)體。這與IgG不同，兩個(gè)以上的IgG分子必須在彼此近距離聯(lián)結(jié)的情況下結(jié)合抗原才能激活補(bǔ)體。此外，含IgM的免疫球蛋白制劑所治療的主要適應(yīng)證是細(xì)菌感染和敗血病。由于這些患者已經(jīng)患有高血壓，所以非特異性補(bǔ)體活化和C5a的額外的不需要的產(chǎn)生將使患者狀況的臨床惡化。因此，據(jù)已有描述，難以將IgM制劑制備成用于靜脈內(nèi)應(yīng)用。本領(lǐng)域中描述了用于從人血漿中制造含IgM的免疫球蛋白制劑的若干種方法。已使用經(jīng)典的Cohn血漿組分分離法或其公知的變形方法(例如Cohn/Oncley，Kistler/Nitschmann)對人IgM溶液進(jìn)行了初步純化。使用冷乙醇沉淀法，將IgM組分回收在組分III或組分I/III(亦稱為B或B+I)中。已描述了用來從組分III或I/III開始對富集有IgM的蛋白溶液進(jìn)行純化的方法。EP0013901描述了從組分III開始的純化方法，包括使用辛酸的步驟、使用β-丙內(nèi)酯的步驟和使用陰離子交換樹脂的吸收步驟。該方法用于生產(chǎn)——迄今為止唯一的市售靜脈內(nèi)IgM產(chǎn)品。β-丙內(nèi)酯是為了使?jié)撛诘牟《緶缁疃糜跍缇襟E的公知化學(xué)物質(zhì)。由于β-丙內(nèi)酯是可引起蛋白化學(xué)修飾的反應(yīng)性很強(qiáng)的物質(zhì)，所以免疫球蛋白的抗病毒活性和抗細(xì)菌活性也會(huì)有大量損失。另一方面，與未經(jīng)化學(xué)修飾的免疫球蛋白相比，該化學(xué)修飾產(chǎn)生了降低的抗補(bǔ)體活性。EP0352500描述了通過以下方法制備具有降低的抗補(bǔ)體活性的用于靜脈內(nèi)應(yīng)用的IgM濃縮物：使用陰離子交換層析、β-丙內(nèi)酯、UVC光照射和在升高的溫度(40℃～60℃)下進(jìn)行溫育的步驟。用該方法制造的制劑因所述化學(xué)修飾而在液體溶液中僅在有限的時(shí)間內(nèi)保持穩(wěn)定。IgM的濃度超過總免疫球蛋白含量的50%。在EP0413187(Biotest，生物測試股份公司)和EP0413本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】2010.04.22 GB 1006753.61.一種適合于人靜脈內(nèi)施用的抗體制劑，所述抗體制劑包含IgG抗體、IgA抗體和占抗體總量至少5重量％的IgM抗體，其中，所述制劑通過包括以下步驟的方法從人血漿制得：(a)從人血漿制備血漿組分，作為含免疫球蛋白的溶液；(b)將辛酸與所述溶液混合，并用振動(dòng)攪拌器處理經(jīng)混合的溶液以沉淀出污染性蛋白，其中所述辛酸以0.075kg/kg血漿組分至0.2kg/kg血漿組分的濃度添加，經(jīng)混合的溶液的pH為4.5～5.5，溫度為10℃～35℃；(c)將沉淀出的蛋白從所述溶液中分離出，以產(chǎn)生含有IgM的免疫球蛋白組合物；(d)將所述含有IgM的免疫球蛋白組合物在pH3.5～4.5溫育，以形成經(jīng)溫育的溶液；(e)用UVC照射經(jīng)溫育的溶液，從而形成經(jīng)UVC照射的溶液；和(f)在無菌條件下過濾所述經(jīng)UVC照射的溶液，從而形成適合于人靜脈內(nèi)施用的抗體制劑，其中，所述抗體制劑具有特異性補(bǔ)體活化活性，其中，制備所述抗體制劑的所述方法能夠?qū)崿F(xiàn)無包膜病毒的大于3log10的去除，并且其中，在適合于確定所述抗體制劑的非特異性地激活補(bǔ)體的能力的用人血清進(jìn)行的體外測定中，所述抗體制劑產(chǎn)生的C5a和/或C3a的量為僅用人血清時(shí)產(chǎn)生的C5a和/或C3a的量的30％至170％。2.如權(quán)利要求1所述的抗體制劑，所述抗體制劑包含占抗體總量的大于5重量％的IgA和大于40重量％的IgG。3.如權(quán)利要求1所述的抗體制劑，所述抗體制劑包含占抗體總量的至少10重量％的IgM。4.如權(quán)利要求3所述的抗體制劑，所述抗體制劑包含占抗體總量的至少15重量％的IgM。5.如權(quán)利要求1所述的抗體制劑，其中，經(jīng)調(diào)整IgM濃度為1.72mg/ml的所述抗體制劑在60分鐘的所述測定后產(chǎn)生少于200ng/ml的C5a。6.如權(quán)利要求1所述的抗體制劑，其中，經(jīng)調(diào)整IgM濃度為1.72mg/ml的所述抗體制劑在60分鐘的所述測定后產(chǎn)生少于6000ng/ml的C3a。7.如權(quán)利要求1所述的抗體制劑，其中，用于確定所述抗體制劑產(chǎn)生的C5a的量的所述體外血清測定包括以下步驟：(a)將一定量的所述抗體制劑添加到100μl人血清中以產(chǎn)生含有1.72mg/mlIgM的反應(yīng)混合物，并在持續(xù)攪拌下將所述反應(yīng)混合物于37℃溫育60分鐘；(b)制備所述反應(yīng)混合物的適合用于ELISA的稀釋液組；(c)用針對C5a的一抗和二抗以及顯色物質(zhì)對所述反應(yīng)混合物的所述稀釋液組進(jìn)行夾心式ELISA，其中，所述二抗與酶偶聯(lián)，且所述顯色物質(zhì)是所述酶的底物；和(d)根據(jù)因使所述顯色物質(zhì)與通過所述二抗結(jié)合C5a的所述酶接觸而獲得的顏色變化，確定所述反應(yīng)混合物中的C5a的量。8.如權(quán)利要求1所述的抗體制劑，其中，用于確定所述抗體制劑產(chǎn)生的C3a的量的所述體外血清測定包括以下步驟：(a)將一定量的所述抗體制劑添加到100μl人血清中以產(chǎn)生含有1.72mg/mlIgM的反應(yīng)混合物，并在持續(xù)攪拌下將所述反應(yīng)混合物于37℃溫育60分鐘；(b)制備所述反應(yīng)混合物的適合用于ELISA的稀釋液組；(c)用針對C3a的一抗和二抗以及顯色物質(zhì)對所述反應(yīng)混合物的所述稀釋液組進(jìn)行夾心式ELISA，其中，所述二抗與酶偶聯(lián)，且所述顯色物質(zhì)是所述酶的底物；和(d)根據(jù)因使所述顯色物質(zhì)與通過所述二抗結(jié)合C...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：W·莫勒爾，D·魯?shù)履峥?/a>，O·曼尼格，M·羅德梅爾，馬蒂亞斯·杰默，V·布勞恩，
申請(專利權(quán))人：生物測試股份公司，
類型：
國別省市：