本發明專利技術為一種馬比木的快速繁殖方法，該方法是在MS培養基上培養帶嫩芽段等組織，確切取帶1-2個芽的嫩芽莖段為外植體，消毒后，接種在MS+6-BA1.2mg/L+IBA0.2mg/L培養基中培養，接種后10-15天左右芽體的萌發，30天左右形成帶葉的小苗，將小苗切下轉接于MS+6-BA1.2mg/L+IBA0.4mg/L培養基上，以保持高速度遞增，增殖系數為5以上。選擇MS+6-BA0.5mg/L+NAA1.5mg／L作為生根培養基，生根率達到95%以上，只需要30天左右形成完整植株。試管苗移載到沙土中，注意保水保濕，移載45天后，移載成活率達到93%以上，建立了一套高頻穩定再生體系。本發明專利技術方法具有穩定好，操作簡便，繁殖速度快，生產成本低，達到產業化水平等優點。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物工程領域，涉及植物組織培養技術，具體地說是一種馬比木的組織培養方法。
技術介紹
植物是藥物的天然寶庫，人們利用藥用植物的歷史源遠流長，全世界約有75%的人口以植物作為治療預防疾病的藥物來源(邢建民，2001)。人類已經從植物中發現了許多具有高度生理活性的藥物，目前從植物來源的藥物占藥物總量的25%以上(鄭光植，1987)。我國的傳統中草藥已有數千年的歷史，至今仍在我國和許多國家和地區廣為使用。但由于傳統的中草藥獲取方法是以采集和消耗大量的野生植物資源為代價的，當采集和消耗量超過自然資源的再生能力時，必然會導致物種的瀕危甚至滅絕。同時隨著自然生態環 境的日益破壞，也進一步導致藥用植物資源的匱乏。生物技術的蓬勃發展為從根本上改變傳統藥材的生產提供了一個嶄新的方法，植物組織和細胞培養技術則是其中一個重要的手段。我國自1964年羅士韋教授首先報道了人參組織培養獲得成功的研究成果以來，許多科學家先后從事了多種藥用植物的組織培養研究。至今，我國藥用植物的組織培養研究迅速發展。目前，世界各國對植物的藥用開發和研究都十分重視，就以美國來說，其成藥中有47%是以植物為原料制成的(謝啟昆，1986)。為了解決藥用植物的供需矛盾，人們采用人工栽培的方法擴大藥源。但在人工栽培的藥用植物中，有不少名貴藥材等生產周期較長，如人參、黃連，如果以常規方法育種或育苗，需要花費很長的時間；另有一些藥用植物如貝母、番紅花等，因繁殖系數小、耗種量大，導致育種速度很慢，生產成本增加。利用植物的有性繁殖方式對其有效成分含量波動比較大，所以利用植物組織培養技術解決藥用植物的植株再生與繁殖問題迫在眉睫。近年來，國內外在這方面已做了大量工作，已成功離體培養獲得試管植株的藥用植物至少有200種，如云南黑節草、延齡草、高山紅景天、莪術、水母雪蓮、星花繡線菊、溪黃草、玉葉金花、遼東榴木等；其中包括一些具有抗癌有效成分的珍稀植物，如紅豆杉、馬比木、黃楊、大戟屬植物、長春花、米仔蘭、七葉一枝花、狗牙花和香榧等。馬比木，又名公黃珠子、追風傘，屬于茶茱萸科植物，多年生矮灌木，高2-3 (-10)m。枝有棱，被短柔毛，后變無毛，芽被柔毛。葉互生或枝上部近對生；葉柄長l-3cm，上面具寬深精，槽里被糙伏毛；葉片長圓形或倒披針形，長7-24cm，寬2-4. 5cm,先端長漸尖，基部楔形，全緣，上面暗綠色，具光澤；中脈下凹，側脈6-7對，弧曲上升，遠離葉緣處網結。花兩性或雜性，聚傘花序頂生，長約7cm，總梗、分枝、花序軸通常扁平，被粗伏毛，花梗長l-2mm ；花萼綠色，鐘形，長約2mm，外面稀被粗伏毛，5裂齒，裂齒三角形；花瓣黃色，線形，反卷，長約7mm,寬約2mm ;雄蕊5,長約5mm,花絲長4_5mm,基部稍粗,花藥卵形；子房近球形，被長硬毛，花柱綠色，長約2mm，柱頭頭狀；花盤肉質，具不整齊裂片或深圓齒，里面疏被長硬毛，果時宿存。核果橢圓形，稍扁，幼果綠色，轉黃色，熟時為紅色，長l_2cm，徑O. 6-0. 8cm，先端明顯具鱗臍，有萼宿存。花期4-6月，果期6-8月。生態環境生于海拔(150) 450- (2500)m的林中。資源分布分布于甘肅、湖北、湖南、廣東、海南、廣西、四川、貴州等地。馬比木根皮中含有喜樹堿及喜樹堿的甲氧基衍生物，其有效成分是喜樹果的三倍以上，喜樹堿的含量達到了 0.8%。馬比木種子很難發芽，野生馬比木主要以根莖芽繁殖，另外野生馬比木在根皮中含量不穩定，其有效成分含量與野生馬比木的生長年限有關，一般在10年以上的野生馬比木含量較一致。所以以野生馬比木的提取會造成資源枯竭，還有造成其喜樹堿的產量不穩定。公開號為CN102071233A的中國專利公開了一種人工誘導臭馬比木內生菌合成喜樹堿的技術方法，將臭馬比木未成熟的細胞按照接種量為50-200g/L濕重的比例，置于添加了 50-80ymol/L的生長調節劑萘乙酸(N AA)或5-10 μ mol/L芐氨基嘌呤(BA)的MS基本培養基中，在25-30°C中培養；在細胞指數生長初期，加入濃度為1-2000 μ mol/L的非生物誘導劑和20_50g/L的蔗糖或葡萄糖；在細胞指數生長中期，再加入濃度為1-2000 μ mol/L的非生物誘導劑。該專利技術雖利用了富含喜樹堿的植物臭馬比木，通過人工誘導，組織培養的方法實現喜樹堿的合成，在一定程度上可提高喜樹堿的產量，由于喜樹堿在其根皮中長期積累所致，所以很難工業化生產。因此，為了滿足日益增大的藥用需求，種子收獲量小，種子繁殖出苗率極低，種子培育過程煩瑣，生長速度慢，同時保護馬比木的野生資源，利用組培快繁技術，實現人工栽培是最好的解決方法。迄今為止，在國內外尚未見關于馬比木組織培養快繁成功的報道。我們通過大量試驗，終于摸索出一套成熟的方法，成功實現了馬比木的組培快繁，可以快速培育出大量幼苗，為實現工業化人工栽培馬比木提供可能。馬比木的組培快繁技術方法的成功建立，可以為大規模人工栽培藥用植物馬比木提供種苗，為現代科技農業提供了一種切實可行的開發項目。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供馬比木的快速繁殖方法，該方法非常適合工業化生產，配方效果佳，出芽率高，培養時間短，植株生長旺盛，可操作性強，應用價值高等優點。具有投入少，產出高的特點。本專利技術所述馬比木的快速繁殖方法，其具體操作步驟如下I)外植體的選取與滅菌選用馬比木的嫩莖上芽體作為培養材料，經洗潔精和自來水洗凈，置流水下沖洗10-30分鐘后，置于75%酒精中處理10-30秒，然后再經O. 1%的升汞消毒后用無菌水沖洗，切去外植體變色的部分后備用；2)芽體的萌發將滅菌處理后的芽體接種在Ms+6-BAl. 2mg/L+IBA0. 2mg/L培養基上，pH值為5. 8，培養溫度25-27°C，每天光照12小時，光照強度1000LX，接種后10-15天芽體的萌發，30天左右形成帶葉的小苗；3)叢生芽誘導和增殖培養將小苗切下轉接于Ms+6-BAl. 2mg/L+IBA0. 4mg/L培養基上，直至形成叢生芽，PH值為5. 8，培養溫度25-27°C，每天光照15小時，光照強度1000LX,25天左右為一個生長周期，以保持高速度遞增，增殖系數為5以上；4)生根培養選擇Ms+6-BAO. 5mg/L+NAA I. 5mg/L作為生根培養基，pH值為5. 8，培養溫度25-27°C，每天光照16小時，光照強度1000LX，生根率達到95%以上，只需要30天左右形成完整植株；5)試管苗的移栽選取根系生長良好的試管苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗干凈，移載到沙土或富養土中，注意保水保溫保濕，移載45天，移載成活率達到92%以上。在一個具體實施方案中，步驟I中采用O. I %升汞進行消毒，消毒時間控制優選在12-15分鐘。在另一個具體實施方案中，步驟5中大田移栽濕度控制在40-70%;溫度控制在20-30。。。技術效果(I)利用馬比木帶芽根莖段為外植體，使得外植體取材較容易，一年四季均可取材，而且數量多，采用根莖芽體做外植體，保證了遺傳穩定性，同時克服了組織培養中，愈傷組織在分化培養基上隨著芽的分化而逐漸停止生長，失去增殖能力的弱點，可防止傷組織繼代培養過程中，隨著培養代數的增加，分化出來的苗出現變異的現象。(2本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種馬比木的快速繁殖方法，其具體操作步驟如下：1)外植體的選取與滅菌：選用馬比木的嫩莖上芽體作為培養材料，經洗潔精和自來水洗凈，置流水下沖洗10?30分鐘后，置于75％酒精中處理10?30秒，然后再經0.1％的升汞消毒后用無菌水沖洗，切去外植體變色的部分后備用；2)芽體的萌發：將滅菌處理后的芽體接種在Ms+6?BA1.2mg/L+IBA0.2mg/L培養基上，pH值為5.8，培養溫度25?27℃，每天光照12小時，光照強度1000LX，接種后10?15天芽體的萌發，30天左右形成帶葉的小苗；3)叢生芽誘導和增殖培養：將小苗切下轉接于Ms+6?BA1.2mg/L+IBA0.4mg/L培養基上，直至形成叢生芽，pH值為5.8，培養溫度25?27℃，每天光照15小時，光照強度1000LX，25天左右為一個生長周期，以保持高速度遞增，增殖系數為5以上；4)生根培養：選擇Ms+6?BA0.5mg/L+NAA?1.5mg/L作為生根培養基，pH值為5.8，培養溫度25?27℃，每天光照16小時，光照強度1000LX，生根率達到95%以上，只需要30天左右形成完整植株；5)試管苗的移栽：選取根系生長良好的試管苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗干凈，移載到沙土或富養土中，注意保水保溫保濕，移載45天，移載成活率達到93%以上。...
【技術特征摘要】
1.一種馬比木的快速繁殖方法，其具體操作步驟如下 1)外植體的選取與滅菌選用馬比木的嫩莖上芽體作為培養材料，經洗潔精和自來水洗凈，置流水下沖洗10-30分鐘后，置于75%酒精中處理10-30秒，然后再經0. 1%的升汞消毒后用無菌水沖洗，切去外植體變色的部分后備用； 2)芽體的萌發將滅菌處理后的芽體接種在Ms+6-BAl.2mg/L+IBA0. 2mg/L培養基上，pH值為5. 8，培養溫度25-27°C，每天光照12小時，光照強度1000LX，接種后10-15天芽體的萌發，30天左右形成帶葉的小苗； 3)叢生芽誘導和增殖培養將小苗切下轉接于Ms+6-BAl.2mg/L+IBA0. 4mg/L培養基上，直至形成叢生芽，PH值為5. 8，培養溫度25-27...
【專利技術屬性】
技術研發人員：向華，
申請(專利權)人：向華，
類型：發明
國別省市：
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