本發明專利技術公開了一種通過在分子水平分析結腸組織中的分析區域來檢測ACF的方法。具體公開了：一種檢測畸變隱窩灶(ACF)的方法，所述方法的特征在于檢測選自GSTp、iNOS、CD44、EGFR、COX2和Fzd1的ACF特異性上調的一種或多種分子；ACF檢測方法的特征在于分析區域的直徑為0.5mm以下；ACF檢測的標記物為GSTp、iNOS、CD44、EGFR、COX2或Fzd1；并公開通過使用前述任一處所記載的ACF檢測方法，基于受試者的結腸組織的分析區域中的ACF檢測結果，來評估受試者中結直腸癌和結直腸腺瘤的風險的方法。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及通過使用對于畸變隱窩灶(aberrant crypt foci, ACF)特異性高表達的分子來檢測ACF的方法。本申請要求基于2010年6月30日在日本提交的日本專利申請2010-148649的優先權，將其內容引入于此以作參考。
技術介紹
結直腸癌在日本是死亡的首要原因，并且在美國是死亡的第二大原因。美國每年 發現約150，000結直腸癌的新病例，這些病例中每年死亡超過50，000例(美國癌癥協會(American Cancer Society)估計)。另一方面，由于結直腸癌從良性瘤發展到惡性瘤通常需要幾十年，期望早期風險評估和發現從而有助于良好的預后和預防。目前一般所采用的結直腸腺瘤和腫瘤篩選方法的典型實例包括潛血試驗、鋇灌腸、全結腸鏡檢和S狀結腸鏡檢。然而，例如在潛血試驗的情況中，由于存在其中除腺瘤或腫瘤以外的因素所引起的血檢出的病例，不能說這對于結直腸腺瘤和腫瘤具有高度特異性，并且當用于早期檢測目的時易于產生假陽性。另一方面，盡管鋇灌腸能夠檢測形態大的晚期癌癥，但其存在難以檢測小型病變的缺點。另外，由于內窺鏡檢查使得病變部位(affected site)直接可視化，因此檢測結果是高度可靠的，并且這些檢查已顯示有利于減少結直腸癌的死亡率和發生率。然而，由于病變部位在癌癥早期可能極小，因此存在難以通過內窺鏡檢查檢出該病變部位的問題。如此，由于還未完全研發出有效檢測結直腸癌和早期結直腸癌的高危群體的檢測技術，因而存在許多僅在疾病階段已發展到一定程度后才進行診斷的情況。因此，期望在早期便能夠低損或無損地進行風險評估并發現結直腸癌的高靈敏度和高特異性檢測方法。作為從早期病變階段檢測結直腸癌的方法目前所關注的是包括使用核酸和蛋白質分析技術在分子水平上分析的方法。例如，對家族性腺瘤性息肉(familial adenomatouspolyposis, FAP)的遺傳易感性是結直腸癌風險因素的典型實例，而通過對受試者進行遺傳分析可進行結直腸癌的風險評估。最近，在FAP方式中具有或不具有特征遺傳易感性的群體中，已知年齡(50歲以上)和生活方式因素如肥胖、飲酒和吸煙使結直腸癌的未來風險增力口。因此，可由生活方式引起的分子異常(表觀遺傳學、表達異常)作為預測未來結直腸癌的方式引起注意。事實上，在全基因組相關研究(GWAS)的過程期間已發現了大量表明參與結直腸癌的分子。為了檢測大腸中存在的分子異常的目的，已研發了用于分析存在于糞便和血液中的核酸的技術。然而，由于源自于極小病變的核酸僅痕量存在，因而難以早期檢測分子異常。在分析裝置的敏感度方面，也難以反映血液中測量為Imm以下的微小病變的變化。另外，糞便包含大量腸道細菌以及從病變以外區域剝離的上皮細胞，并且存在大量干擾(noise)。因此，當使用糞便作為樣本時，為了檢測早期結直腸腺瘤或結直腸腫瘤，需要在癌化和腫瘤發展早期在表達水平上比正常組織增加程度大的優異的分子標記物。因此，還未實現通過檢測大腸中早期分子異常來進行結直腸癌早期風險評估的技術的發展。另一方面，畸變隱窩灶(ACF)首先由Bird等人在1987年報道為在施用致癌物(氧化偶氮甲烷)的大鼠大腸中亞甲基藍濃染的微小病變。ACF構成形態學上可檢測的最初形態異常(參見，例如，非專利文獻I)，由于還觀察到細胞增殖活性急增和K-ras突變，已表明ACF參與結直腸癌和結直腸腺瘤的發病。還在癌癥患者和息肉患者的人大腸的離體樣本中觀察到亞甲基藍濃染的病變，已報道這些病變的量在健康人、息肉患者和癌癥患者中依序增加(參見，例如，非專利文獻2)。基于這些發現，ACF更經常用作結直腸癌預防研究中的指標。測量尺寸為1_以下的ACF在一般內窺鏡檢查中很難檢測到，而通常使用放大內窺鏡檢測。然而，放大內窺鏡的使用需要大量時間來操作，因而其使用機會受到限制，并且難以用于早期結直腸癌的初步篩查。如此，還未實現通過在顯微鏡下或內窺鏡下檢測微ACF來評估結直腸癌風險的技術的研發。 另外，為了在分子水平上分析ACF，已對有用的分子標記物進行研究。更具體地，表達水平在ACF中波動的分子的已報道實例包括細胞周期素D1、環氧化酶2(C0X2)、連環素@ 1(0連環素)、誘導型氧化氮合成酶2(iN0S);表皮生長因子受體(EGFR)和⑶44分子(CD44)。然而，這些標記物中的每一種均基于小規模研究而被報道，并且不同于結直腸癌，還未有涉及關于ACF病變中分子改變的大規模研究的評估的報道。例如，在C0X2早期研究的實例(參見非專利文獻3)中，由于使用整個大腸中所采集的樣品來分析分子改變，ACF的特異性低，并且沒有與周圍(正常)組織比較來分析僅可歸因于ACF的分子改變。另外，在細胞周期素Dl的早期研究(參見非專利文獻4)、iN0S的早期研究(參見非專利文獻5)和CD44的早期研究(參見非專利文獻6)中，由于僅分析了免疫染色的數據，該研究缺乏定量和特異性，并且還未能應用到實際醫療中。此外，在iNOS的早期研究(參見非專利文獻7)和EGFR的早期研究(參見非專利文獻8)中，所述分析靶向于50個隱窩的相當大的ACF，然而未對早期微ACF的分子改變進行分析。如此，盡管已知多種分子，并已表明其具有能夠用作ACF標記分子的能力，但這些均未被認為是足夠可靠而批準臨床應用。換言之，還未實現證明在以測量為Imm以下的微ACF為典型地代表的微病變階段(即，在早期階段)表達水平改變的分子的分析，以及通過分子生物學檢測進行的結直腸癌未來風險的簡單評估。現有技術文獻專利文獻專利文獻I :日本未審查專利申請，首次公開號2007-229054非專利文獻非專利文獻I :Kelloff 等人，2006，Clinical Cancer Research, Vol. 12, No. 12, pp. 3661-3697.非專利文獻2 :Takayama 等人，The New England Journal of Medicine, 1998, VoI. 339，No. 18，pp. 1277-1284.非專利文獻3 :Fichera 等人，Journal of Surgical Research, 2007, Vol. 142, pp 239-245.非專利文獻4 Paulsen 等人,Cancer Research, 2005, Vol. 65, pp. 121-129.非專利文獻5 :Xu 等人，World Journal of Gastroenterology, 2003, Vol. 9, No. 6,pp.1246-1250.非專利文獻6 Boon 等人，Cancer Research, 2002，Vol. 62，pp. 5126-5128.非專利文獻7 Takahashi 等人，Carcinogenesis, 2000，Vol. 21，No. 7，pp. 1319-1327.非專利文獻8 Cohen 等人,Cancer Research, 2006, Vol. 66, pp. 5126-5128.
技術實現思路
專利技術要解決的問題 本專利技術的目的為提供通過在分子水平上分析大腸組織的被檢區域來檢測ACF的方法。用于解決問題的方案作為為解決前述問題而進行的深入研究的結果，本專利技術的發本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：堀野葉子，
申請(專利權)人：奧林巴斯株式會社，
類型：
國別省市：
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