一種殼聚糖的制備方法技術

一種殼聚糖的制備方法屬于生物發酵領域，更具體的說，是涉及一種殼聚糖的制備方法。本發明專利技術提供了一種制備簡單、耗時短、產率高的殼聚糖的制備方法。本發明專利技術的制備步驟為：黑曲霉發酵；甲殼素的制備。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于生物發酵領域，更具體的說，是涉及。
技術介紹
殼聚糖是甲殼素經濃堿溶液處理后脫去乙酰基的產物，化學名為聚(1，4)-2-氨基-2-脫氧-3 -D-葡萄糖。殼聚糖的生物相容性良好，在生物醫學及制藥等方面的應用極其廣泛，可用作燒傷敷料及傷口愈合劑，包扎紗布用殼聚糖處理后，傷口愈合速度可提高75%。用殼聚糖制成的可吸收性手術縫線，機械強度高，可長期貯存，能用常規方法消毒，可染色，可摻入藥劑，能被組織降解吸收，免除患者拆線的痛苦。殼聚糖能抑制胃酸和潰瘍，具有降解膽固醇及三甘油脂的作用。肝素是一種帶有磺酸基、羧基的極有效的抗凝血劑，硫酸酯化的殼聚糖在結構上與肝素相似，這種類肝素衍生物一般具有相當甚至超過肝素活性，為提供合成廉價的抗凝血劑提供了有效的途徑。此外，殼聚糖還可用于制作人工腎透析膜和隱形眼鏡。由殼聚糖制備出的微膠囊，是一種生物降解型的高分子膜材料，是優良且極具發展前途的醫用緩釋體系。此外，殼聚糖在食品上可用作保鮮膜。將其水溶液涂于果蔬表面，可人為在果蔬表面形成一個低氧高二氧化碳的密閉環境，抑制果蔬呼吸，同時抑菌繁殖，提高果蔬光澤度，提聞果樹的感官品質。殼聚糖的制備方法大都耗時長、對設備要求高，且產率普遍很低。
技術實現思路
本專利技術就是針對上 述問題，提供了一種制備簡單、耗時短、產率高的殼聚糖的制備方法。為了實現本專利技術的上述目的，本專利技術的制備步驟為1.黑曲霉發酵斜面培養基制備4%瓊脂、2%酵母膏、2%蛋白胨、4%蔗糖，加熱過濾后裝入試管，于121°C高壓滅菌20min ;在無菌操作臺上進行接種，于22 34°C電熱恒溫培養箱培養0 IlOh ;用接種環刮取新鮮斜面上的黑髓霉孢子，轉入裝有無菌水和裝有玻璃珠的具塞三角瓶中，充分振蕩后用血球計數板計算懸液濃度，并用無菌水稀釋至所需濃度(7108 9X 108個孢子/mL);在5001^錐形瓶中用多層紗布及牛皮紙包住錐形瓶瓶口，于121°C高壓滅菌20min ;滅菌后在無菌操作臺按量接入孢子懸液，恒溫搖床發酵，搖床轉速為120 210r/min ；2.殼聚糖的制備取發酵液，離心洗滌菌體至上清液無色，取所得沉淀加入7%氫氧化鈉溶液(菌體堿液=I 10w/V)，5(TC下處理3h后離心，水洗滌沉淀至上清液無色；取上述沉淀，力口入乙醇水=I I的20%氫氧化鈉溶液(菌體堿液=I 10W/V)，于480W功率下微波處理15min后離心，洗滌沉淀至上清液呈中性；取上述沉淀，加入5%乙酸溶液于100°C下處理5h，離心分離，調節pH值為8 10，此時出現大量白色絮狀沉淀，離心，無離子水洗滌沉淀至上清液呈中性；轉移沉淀至平皿中，50°C下真空干燥，所得固體即為殼聚糖。本專利技術的有益效果1.本專利技術工藝簡單、便于生產；2.本專利技術產率較高。附圖說明圖1、圖2、圖3為三因素對殼聚糖產率的影響圖。具體實施例方式本專利技術以黑曲霉為原料，利用發酵法制備殼聚糖，本專利技術的工藝步驟為1.黑曲霉發酵斜面培養基制備4%瓊脂、2%酵母膏、2%蛋白胨、4%蔗糖，加熱過濾后裝入試管，于121°C高壓滅菌20min ;在無菌操作臺上進行接種，于22 34°C電熱恒溫培養箱培養0 IlOh ;用接種環刮取新鮮斜面上的黑髓霉孢子，轉入裝有無菌水和裝有玻璃珠的具塞三角瓶中，充分振蕩后用血球計數板計算懸液濃度，并用無菌水稀釋至所需濃度(7108 9X108個孢子/mL);在50 01^錐形瓶中用多層紗布及牛皮紙包住錐形瓶瓶口，于121°C高壓滅菌20min ;滅菌后在無菌操作臺按量接入孢子懸液，恒溫搖床發酵，搖床轉速為120 210r/min ；2.殼聚糖的制備取發酵液，離心洗滌菌體至上清液無色，取所得沉淀加入7%氫氧化鈉溶液(菌體堿液=I 10w/V)，5(TC下處理3h后離心，水洗滌沉淀至上清液無色；取上述沉淀，力口入乙醇水=I I的20%氫氧化鈉溶液(菌體堿液=I 10W/V)，于480W功率下微波處理15min后離心，洗滌沉淀至上清液呈中性；取上述沉淀，加入5%乙酸溶液于100°C下處理5h，離心分離，調節pH值為8 10，此時出現大量白色絮狀沉淀，離心，無離子水洗滌沉淀至上清液呈中性；轉移沉淀至平皿中，50°C下真空干燥，所得固體即為殼聚糖。本專利技術選擇發酵溫度、發酵時間、搖床轉速為影響殼聚糖產率的因素，影響情況可見圖1、圖2、圖3。由圖2可以看到，菌株在培養過程中，殼聚糖的產量和相對分子質量都在變化。培養初期菌絲體迅速生長，殼聚糖量也迅速增加。隨著培養時間的增加，殼聚糖量逐漸達到飽和，菌絲體的量不再增加；另一方面，殼聚糖的相對分子質量隨著培養期的延長而迅速下降。作為一種最佳方案，本專利技術的制備步驟為發酵溫度為28°C，搖床轉速為180r/min,發酵時間為80h。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種殼聚糖的制備方法，其特征在于，本專利技術的制備步驟為：(1)黑曲霉發酵斜面培養基制備：4％瓊脂、2％酵母膏、2％蛋白胨、4％蔗糖，加熱過濾后裝入試管，于121℃高壓滅菌20min；在無菌操作臺上進行接種，于22～34℃電熱恒溫培養箱培養0～110h；用接種環刮取新鮮斜面上的黑髓霉孢子，轉入裝有無菌水和裝有玻璃珠的具塞三角瓶中，充分振蕩后用血球計數板計算懸液濃度，并用無菌水稀釋至所需濃度(7108～9X108個孢子/mL)；在500mL錐形瓶中用多層紗布及牛皮紙包住錐形瓶瓶口，于121℃高壓滅菌20min；滅菌后在無菌操作臺按量接入孢子懸液，恒溫搖床發酵，搖床轉速為120～210r/min；(2)殼聚糖的制備取發酵液，離心洗滌菌體至上清液無色，取所得沉淀加入7％氫氧化鈉溶液(菌體∶堿液＝1∶10w/V)，50℃下處理3h后離心，水洗滌沉淀至上清液無色；取上述沉淀，加入乙醇∶水＝1∶1的20％氫氧化鈉溶液(菌體∶堿液＝1∶10W/V)，于480W功率下微波處理15min后離心，洗滌沉淀至上清液呈中性；取上述沉淀，加入5％乙酸溶液于100℃下處理5h，離心分離，調節pH值為8～10，此時出現大量白色絮狀沉淀，離心，無離子水洗滌沉淀至上清液呈中性；轉移沉淀至平皿中，50℃下真空干燥，所得固體即為殼聚糖。...

【技術特征摘要】
1.一種殼聚糖的制備方法，其特征在于，本發明的制備步驟為 (1)黑曲霉發酵 斜面培養基制備4%瓊脂、2%酵母膏、2%蛋白胨、4%蔗糖，加熱過濾后裝入試管，于121°C高壓滅菌20min ;在無菌操作臺上進行接種，于22 34°C電熱恒溫培養箱培養O IlOh;用接種環刮取新鮮斜面上的黑髓霉孢子，轉入裝有無菌水和裝有玻璃珠的具塞三角瓶中，充分振蕩后用血球計數板計算懸液濃度，并用無菌水稀釋至所需濃度(7108 9X108個孢子/mL);在500!^錐形瓶中用多層紗布及牛皮紙包住錐形瓶瓶口，于121°C高壓滅菌20min ;滅菌后在無菌操作臺按量接入孢子懸液,恒溫搖床發酵,搖床轉速為120 210r/min ； (2)殼聚糖的制備 取...

【專利技術屬性】
技術研發人員：朱琪，
申請(專利權)人：朱琪，
類型：發明
國別省市：