一種同時(shí)檢測(cè)止咳寶片中四種有效成分含量的方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供一種同時(shí)測(cè)定中成藥止咳寶片中4種有效成分（五味子醇甲、白花前胡甲素、白花前胡乙素和紫菀酮）含量的方法。該方法應(yīng)用現(xiàn)代高效液相色譜技術(shù)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B；理論板數(shù)按五味子醇甲峰計(jì)算不低于5000。在洗脫過(guò)程中，將流動(dòng)相A、B濃度配比逐漸變化的梯度洗脫和流動(dòng)相A、B配比恒定不變的等度洗脫相結(jié)合，形成一個(gè)特定的梯度洗脫程序，進(jìn)行兩個(gè)梯度或三個(gè)梯度洗脫，同時(shí)在梯度洗脫時(shí)變化檢測(cè)波長(zhǎng)。本發(fā)明專利技術(shù)提供的方法可定性定量的同時(shí)檢測(cè)止咳寶片中五味子醇甲、白花前胡甲素、白花前胡乙素和紫菀酮的含量，方法簡(jiǎn)便而快捷，而且專屬性強(qiáng)，可有效提高止咳寶片的質(zhì)量控制水平。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及，尤其涉及一種 HPLC法同時(shí)檢測(cè)止咳寶片中五味子醇甲、白花前胡甲素、白花前胡乙素和紫菀酮含量的方法。
技術(shù)介紹
止咳寶片中富含多種中藥材，具有解表散寒、宣肺除痰，益肺氣養(yǎng)肺陰的功效，起到理肺祛痰和止咳平喘的功能。“止咳寶片秘方”入選嶺南中藥文化遺產(chǎn)保護(hù)名錄。止咳寶片現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)收載于《中國(guó)藥典》2010年版一部，其鑒別標(biāo)準(zhǔn)中收載了 I個(gè)理化鑒別和3個(gè)薄層鑒別，而止咳寶片處方中有14味藥。通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)多種藥味的薄層色譜之間均存在陰性干擾，尚無(wú)有效分離方法進(jìn)行鑒別其有效成分，導(dǎo)致現(xiàn)有的質(zhì)量控制方法未能有效實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品質(zhì)量的控制。且現(xiàn)有的檢測(cè)方法存在實(shí)驗(yàn)步驟繁瑣，實(shí)驗(yàn)條件不好控制等缺點(diǎn)，且方法的重復(fù)性和穩(wěn)定性也不夠理想。為了更加有效控制本品質(zhì)量，通過(guò)對(duì)處方中藥味成份研究，應(yīng)用現(xiàn)代高效液相色譜技術(shù)，本專利技術(shù)提供一種采用梯度洗脫、變化檢測(cè)波長(zhǎng)的含量測(cè)定方法，其能定性定量的同時(shí)測(cè)定止咳寶片中五味子醇甲、白花前胡甲素、白花前胡乙素和紫菀酮的含量，方法簡(jiǎn)便而快捷，有效提高止咳寶片的質(zhì)量控制水平，相對(duì)現(xiàn)有檢測(cè)方法具有技術(shù)領(lǐng)先水平。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)為了彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供，該方法應(yīng)用現(xiàn)代高效液相色譜技術(shù)，采用梯度洗脫(兩個(gè)梯度或三個(gè)梯度)，同時(shí)變化檢測(cè)波長(zhǎng)，可定性定量的同時(shí)檢測(cè)止咳寶片中五味子醇甲、白花前胡甲素、白花前胡乙素和紫菀酮的含量，方法簡(jiǎn)便而快捷，而且專屬性強(qiáng)，可有效提高止咳寶片的質(zhì)量控制水平。為了實(shí)現(xiàn)本專利技術(shù)的目的，所提供的技術(shù)方案如下—種同時(shí)檢測(cè)止咳寶片中四種有效成分含量的方法，所述四種有效成分分別是五味子醇甲、白花前胡甲素、白花前胡乙素和紫菀酮，所述方法包括如下步驟( I)確定色譜條件采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為色譜柱的填充劑，采用由乙腈為流動(dòng)相A、水為流動(dòng)相B組成的洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，理論板數(shù)按五味子醇甲峰計(jì)算不低于 5000，梯度洗脫的程序及流動(dòng)相A、B的體積百分比如下梯度1---0 20min，流動(dòng)相 A :B=40 65% :60 35%，A+B=100%,流速為1. Oml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為245 255nm ;梯度I為等度洗脫；(五味子醇甲在0_20min內(nèi)出峰)梯度2----20 35min，流動(dòng)相 A B=〔(40 65%) — (90 100%)〕〔(60 35%) — (10 0%)〕，A+B=100%，流速為1. Oml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為 22(T235nm ;梯度 2 為流動(dòng)相A、B的體積百分比逐漸變化的梯度洗脫， 其中流動(dòng)相A、B分別由40 65%和60 35%逐漸變化到90 100%和10 0% ;(2(T35min內(nèi)白花前胡甲素、白花前胡乙素先后出峰)梯度3——流動(dòng)相 A :B=9(Tl00% :10 0%，Α+Β=100%，流速為1. (Tl. 3ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為195 205nm ;梯度3為等度洗脫；待紫菀酮出峰后，繼續(xù)洗脫至無(wú)雜質(zhì)峰即可。(2)制備對(duì)照品溶液；優(yōu)選的對(duì)照品溶液制備方法是精密稱取五味子醇甲、白花前胡甲素、白花前胡乙素和紫菀酮對(duì)照品，用甲醇溶解并配制成對(duì)照品溶液，使每Iml對(duì)照品溶液中含有3-7 μ g五味子醇甲、60-75 μ g白花前胡甲素、14-20 μ g白花前胡乙素、 5_9μ g紫菀酮。采用這一濃度范圍的對(duì)照品溶液，有助于準(zhǔn)確測(cè)定供試品中四種有效成分的含量。(3)制備供試品溶液；優(yōu)選的供試品溶液制備方法是取止咳寶片供試品，除去包衣后研成細(xì)粉，用甲醇溶解并配制成O. 04或O. 08g/ml的供試品溶液。優(yōu)選為0.08g/ml。(4)測(cè)定分別精密量取適量(例如10 μ I)對(duì)照品溶液和供試品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖，并按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得檢測(cè)結(jié)果。，所述四種有效成分分別是五味子醇甲、白花前胡甲素、白花前胡乙素和紫菀酮，所述方法包括如下步驟(I)確定色譜條件采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為色譜柱的填充劑，采用由乙腈為流動(dòng)相Α、水為流動(dòng)相B組成的洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，理論板數(shù)按五味子醇甲峰計(jì)算不低于 5000，梯度洗脫的程序及流動(dòng)相Α、Β的體積百分比如下梯度1-----0 35min，流動(dòng)相 A :B=〔(40 50%) — (90 100%)〕〔(60 50%) — (10 0%)〕，A+B=100%，流速為1. (Tl. 2ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為 220 265nm ;梯度 I 為流動(dòng)相A、B的體積百分比逐漸變化的梯度洗脫 ，其中流動(dòng)相A、B分別由40 50%和6(Γ50% 逐漸變化到9(Γ100%和1(Γθ% ;梯度I的洗脫時(shí)長(zhǎng)在(Γ35分鐘內(nèi)，并不代表一定要洗脫35 分鐘，也可根據(jù)洗脫情況和實(shí)際的實(shí)驗(yàn)情況提前進(jìn)入梯度2，例如在25分鐘或30分鐘時(shí)。 ((T35min內(nèi)，五味子醇甲、白花前胡甲素、白花前胡乙素先后依次出峰)梯度2-----流動(dòng)相 A :Β=9(Γ100% :1(Γ0%，Α+Β=100%，流速為1. (Tl. 3ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為195 205nm ;梯度2為等度洗脫；待紫菀酮出峰后，繼續(xù)洗脫至無(wú)雜質(zhì)峰即可。(2)制備對(duì)照品溶液；優(yōu)選的對(duì)照品溶液制備方法是精密稱取五味子醇甲、白花前胡甲素、白花前胡乙素和紫菀酮對(duì)照品，用甲醇溶解并配制成對(duì)照品溶液，使每Iml對(duì)照品溶液中含有3-7 μ g五味子醇甲、60-75 μ g白花前胡甲素、14-20 μ g白花前胡乙素、 5-9 Ug紫菀酮；采用這一濃度范圍的對(duì)照品溶液，有助于準(zhǔn)確測(cè)定供試品中四種有效成分的含量。(3)制備供試品溶液；優(yōu)選的供試品溶液制備方法是取止咳寶片供試品，除去包衣后研成細(xì)粉，用甲醇溶解并配制成O. 04或O. 08g/ml的供試品溶液。優(yōu)選為0.08g/ml。(4)測(cè)定分別精密量取適量(例如10 μ I)對(duì)照品溶液和供試品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖，并按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得檢測(cè)結(jié)果。進(jìn)一步的，上文所述的同時(shí)檢測(cè)止咳寶片中四種有效成分含量的方法，制備供試品溶液時(shí)，采用溫浸超聲法，將供試品經(jīng)研磨后的細(xì)粉置于具塞錐形瓶中，加入甲醇，稱定總重量，于40°C溫浸I小時(shí)后，超聲lOmin，然后放至室溫，并再稱定總重量，用甲醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻并過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。也可以采用熱回流法制備供試品溶液， 但采用溫浸超聲法制備供試品溶液，具有操作更為簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，同時(shí)可提高效率。上文所述的同時(shí)檢測(cè)止咳寶片中四種有效成分含量的方法，所述供試品止咳寶片中四種有效成分的含量限度為所述供試品每Ig含前胡以白花前胡甲素(C21H22O7)和白花前胡乙素(C24H26O7)計(jì)分別不得少于700μ g/g和180 μ g/g、含五味子以五味子醇甲 (C24H32O7)計(jì)不得少于38 μ g/g和含紫斃以紫斃酮(C3tlH5tlO)計(jì)不得少于60 μ g/g。進(jìn)一步的，上文所述的同時(shí)檢測(cè)止咳寶片中四種有效成分含量的方法，制備對(duì)照品溶液時(shí)，每Iml對(duì)照品溶液中含有5μ g五味子醇甲、70 μ g白花前胡甲素、18 μ g白花前胡乙素、7yg紫菀酮。進(jìn)一步的，上文所述的同時(shí)檢測(cè)止咳寶片中四種有效成分含量的方法，當(dāng)連續(xù)進(jìn)樣檢測(cè)時(shí)，追加洗脫時(shí)長(zhǎng)為5分鐘的洗脫梯度，該追加的洗脫梯度將流動(dòng)相A、B的體積百分比變換為梯度I洗脫時(shí)的流動(dòng)相A、B體積百分比的起始比例本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種同時(shí)檢測(cè)止咳寶片中四種有效成分含量的方法，所述四種有效成分分別是五味子醇甲、白花前胡甲素、白花前胡乙素和紫菀酮，其特征在于，所述方法包括如下步驟：（1）確定色譜條件：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為色譜柱的填充劑，采用由乙腈為流動(dòng)相A、水為流動(dòng)相B組成的洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，理論板數(shù)按五味子醇甲峰計(jì)算不低于5000，梯度洗脫的程序及流動(dòng)相A、B的體積百分比如下：梯度1???0~20min，流動(dòng)相A：B=40~65%：60~35%，A+B=100%，流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為245~255nm；梯度2????20~35min，流動(dòng)相A：B=〔(40~65%)→(90~100%)〕：〔(60~35%)→(10~0%)〕，A+B=100%，流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為220~235nm；梯度3???流動(dòng)相A：B=90~100%：10~0%，A+B=100%，流速為1.0~1.3ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為195~205nm；（2）制備對(duì)照品溶液；（3）制備供試品溶液；（4）測(cè)定：分別精密量取適量對(duì)照品溶液和供試品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖，并按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得檢測(cè)結(jié)果。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種同時(shí)檢測(cè)止咳寶片中四種有效成分含量的方法，所述四種有效成分分別是五味子醇甲、白花前胡甲素、白花前胡乙素和紫菀酮，其特征在于，所述方法包括如下步驟(1)確定色譜條件采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為色譜柱的填充劑，采用由乙腈為流動(dòng)相A、水為流動(dòng)相B組成的洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，理論板數(shù)按五味子醇甲峰計(jì)算不低于5000，梯度洗脫的程序及流動(dòng)相A、B的體積百分比如下梯度 I0 20min，流動(dòng)相 A :B=40 65% :60 35%，A+B=100%，流速為1. Oml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為245 255nm ；梯度 2——20 35min，流動(dòng)相 A :B=〔(40 65%) — (90 100%)〕〔 (60 35%) — (10 0%)〕，A+B=100%，流速為1. Oml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為 220 235nm ；梯度 3流動(dòng)相 A :Β=9(Γ100% :1(Γ0%，Α+Β=100%，流速為1. (Tl. 3ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為195 205nm ；(2)制備對(duì)照品溶液；(3)制備供試品溶液；(4)測(cè)定分別精密量取適量對(duì)照品溶液和供試品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖，并按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得檢測(cè)結(jié)果。2.一種同時(shí)檢測(cè)止咳寶片中四種有效成分含量的方法，所述四種有效成分分別是五味子醇甲、白花前胡甲素、白花前胡乙素和紫菀酮，其特征在于，所述方法包括如下步驟(1)確定色譜條件采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為色譜柱的填充劑，采用由乙腈為流動(dòng)相A、水為流動(dòng)相B組成的洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，理論板數(shù)按五味子醇甲峰計(jì)算不低于5000，梯度洗脫的程序及流動(dòng)相A、B的體積百分比如下梯度1-----0 35min，流動(dòng)相 A :B=〔(40 50%) — (90 100%)〕〔 (60 50%) — (10 0%)〕，A+B=100%，流速為1. (Tl. 2ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為 220 265nm ；梯度 2-----流動(dòng)相 A :Β=9(Γ100% :1(Γ0%，Α+Β=100%，流速為1. (Tl. 3ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為 195 205nm ；(2)制備對(duì)照品溶液；(3)制備供試品溶液；(4)測(cè)定分別精密量取適量對(duì)照品溶液和供試品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖，并按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得檢測(cè)結(jié)果。...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：許丹青，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：廣東臺(tái)城制藥股份有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：