免疫原性肽以及包含該肽的用于預防或治療HPV相關疾病的組合物制造技術

本發明專利技術涉及免疫原性肽以及包含該肽的用于預防或治療HPV相關疾病的組合物，更詳細地說，涉及誘導生成HLA-A*2402類型子宮頸癌患者特異性的細胞毒性T淋巴細胞的HPV類型16E7表位、以及包含該肽的用于預防或治療HPV相關疾病的組合物。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及免疫原性肽以及包含該肽的用于預防或治療HPV相關疾病的組合物，更詳細地說，涉及誘導生成HLA-A*2402類型子宮頸癌患者特異性的細胞毒性T淋巴細胞的HPV類型16E7表位、以及包含該肽的用于預防或治療HPV相關疾病的組合物。
技術介紹
子宮頸癌在女性中發生的惡性腫瘤中發病率高居第二位，全世界每年有35萬名以上的患者死于子宮頸癌，并且其數量繼續增加(Pisani P等，Int J Cancer2002; 97 (I):72-81.)。已知子宮頸癌主要由人乳頭瘤病毒(human papillomavirus:HPV)引起，已證明了超過100多種的HPV中40多種在女性生殖器中起到作用(de Villiers EM等，Virology2004; 324:17-27)。多種類型的HPV中，特別是HPV類型16和HPV類型18在子宮頸癌患者中發現最多，可以預測到其與腫瘤發生有重要關系，已知，其中的HPV類型16在子宮頸癌患者中的感染率最高(Munoz N 等，N Engl J Med2003;348 (6):518_27)。已證明，當HPV感染正常細胞時，病毒癌基因插入宿主細胞(host cell)基因，表達多種病毒蛋白質，其中E6和E7是強力的癌蛋白，其抑制作為腫瘤抑制因子的p53和RB的作用，并促進向癌細胞轉變以及持續生長(zur Hausen H.Nat Rev Cancer 2002; 2 (5):342-50)。已知，E7抑制腫瘤抑制因子即RB的功能，促進S期基因即細胞周期蛋白A和細胞周期蛋白 E 的活性(zur Hausen H 等，Nat Rev Cancer 2002; 2 (5):342-50;Phelps WC等，Cell 1988;53 (4):539_47)，并且，通過抑制細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑即CIPl(p21)和KIPl (p27)的功能等的作用，妨礙感染細胞的細胞凋亡，誘導向腫瘤轉變(FunkJO 等，Genes Devl997;11 (16):2090-100;Zerfass-Thome K 等，0ncogenel996;13 (11):2323-30)。這樣的病毒癌蛋白由于在正常細胞中未發現，因此在以各種類型癌為對象的免疫治療中，成為非常有 力的靶(target)，并且逐漸成為為了生成能夠治療子宮頸癌的細胞毒性T淋巴細胞(cytotoxic T lymphocyte:CTL)而要查名HPV表位這樣的研究的主要對象。至今為止，對于為了治療子宮頸癌而開發出誘導生成HPV類型16特異性的細胞毒性T淋巴細胞的特定的E7表位的研究而言，雖然有以在人類的人白細胞抗原(humanleukocyte antigen:HLA)等位基因(allele)中占大部分的HLA_A*0201類型患者為中心進行研究而證明的結果(Kast WM等，J Immunoll994;152:3904-12)，但是幾乎沒有在作為人類的另一個主要人類白細胞抗原等位基因的HLA-A*2402類型患者中證明的研究內容,這就是實情。因此，在本專利技術中，通過流式細胞測定法(flow cytometry)和細胞毒性(cytotoxicity)試驗,要查明誘導生成細胞毒性T淋巴細胞的HPV類型16E7表位,其中，所述細胞毒性T淋巴細胞能夠治療具有HLA-A*2402類型的子宮頸癌患者。
技術實現思路
技術課題本專利技術是鑒于上述的必要性而提出的，本專利技術的目的在于，提供一種誘導生成細胞毒性T淋巴細胞的HPV類型16E7肽，其中，所述細胞毒性T淋巴細胞能夠治療具有HLA-A*2402類型的子宮頸癌患者。本專利技術的另一個目的在于，提供一種用于預防或治療上述HPV相關疾病的組合物。解決課題手段為了實現上述目的，本專利技術提供具有9個-10個源自HPV類型16E7蛋白質的氨基酸序列的肽及其功能上相同的突變體。此外，在本專利技術中，上述肽序列優選包含⑶STLRLCV(序列號16)或LCVQSTHVDI (序列號35)的氨基酸序列，但并不限于此。在本專利技術中，“功能上相同”及“實質上相同的生物學功能或活性”分別是指，在通過相同的步驟來測定各自的多肽的生物學活性的情況下，其生物學活性的約50%至約100%或其以上程度的生物學活性在與該多肽相比較的多肽中顯示。例如，圖3的利用流式細胞測定法來確認HPV類型16E7表位特異性的IFN- Y的生成和/或圖4的利用51Cr釋放法(51Cr release assay)來確認HPV類型16E7表位(9mer, IOmer)特異性的殺傷子宮頸癌細胞的效果的試驗結果是，本專利技術的功能上相同的肽是指，通過如圖6b所示的步驟在圖6c和圖6d中顯示出與本專利技術的肽實質上相同的生物活性的肽，優選地，上述功能上相同的肽優選具有CYQSTHVDI (序列號43)或CYVTL RVCL (序列號47)的氨基酸序列，但并不限于此。 此外，本專利技術提供一種編碼上述本專利技術序列號16或序列號35的肽的核酸。另外，本專利技術中，優選編碼序列號16的肽的基因具有序列號48的堿基序列，并且編碼序列號35的肽的基因具有序列號49的堿基序列，但誘發這些堿基序列上發生一個以上的置換、缺失、增添等突然變異，顯示出與本專利技術的目標效果相同的活性的所有突然變異基因也包括在本專利技術的范圍內。此外，本專利技術提供分別編碼序列號43或序列號47的肽的核酸。這些CYQSTHVDI (m3，被置換的肽3號)和CYVTLRVCL (m7，被置換的肽7號)肽可利用RNA密碼子來推測其基因序列，可以出現如下的多種組合(例如，序列號50-107)。表I本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2010.09.13 KR 10-2010-00895021.種免疫原性肽及其功能上相同的突變體，其具有CDSTLRLCV即序列號16或LCVQSTHVDI即序列號35的氨基酸序列。2.據權利要求1所述的免疫原性肽及其功能上相同的突變體，其特征在于，所述功能上相同的突變體具有CYQSTHVDI即序列號43或CYVTLRVCL即序列號47的氨基酸序列。3.種核酸,其編碼權利要求1所述的序列號16或序列號35的肽。4.據權利要求3所述的核酸，其特征在于，所述核酸分別具有序列號48及序列號49的堿基序列。5.種核酸，其編碼權利要求2所述的序列號43或序列號...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李炅律，林鐘伯，張善弼，
申請(專利權)人：博康有限公司，
類型：
國別省市：