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    一種高效分泌表達重組人生長激素的操縱子、載體和工程菌及載體和工程菌的制備方法技術

    技術編號:8858794 閱讀:336 留言:0更新日期:2013-06-27 02:21
    一種高效分泌表達重組人生長激素的操縱子、載體和工程菌及載體和工程菌的制備方法,屬于醫藥生物工程技術領域。本發明專利技術的操縱子,包括大腸桿菌色氨酸啟動子、經過優化改造的大腸桿菌堿性磷酸酶信號肽的編碼序列和重組人生長激素的編碼序列。本發明專利技術的表達載體是:將序列表中操縱子和重組人生長激素的編碼序列依次通過EcoRI和XbaI、XbaI和BamHI克隆至pBR322中得到的表達質粒,命名為pTPS-hGH。本發明專利技術提供的工程菌是:用含有病發明專利技術操縱子的表達質粒轉化W3110大腸桿菌菌株得到的工程菌,命名為TPS-hGH。本發明專利技術的有益效果是能夠使重組人生長激素在大腸桿菌中實現高效的分泌表達,可獲得較高的重組人生長激素產量,利于工業規模的生產和加工。

    【技術實現步驟摘要】

    本專利技術屬于醫藥生物工程領域,具體涉及一種高效分泌表達重組人生長激素的操縱子、載體和工程菌。
    技術介紹
    人生長激素(human growth hormone, hGH)是由腦垂體前葉嗜酸性粒細胞分泌的肽類激素,由191個氨基酸構成,分量約22kD,無糖基化,鏈內有四個Cys,形成兩對二硫鍵(C54 一 C165,C182 — C189),正常成年人血漿hGH水平約為l_5ng/ml,半衰期約為15-20分鐘。生長激素能影響幾乎所有的組織類型和細胞,甚至包括免疫組織、腦組織及造血系統,其主要作用是刺激骨、軟骨細胞的生長和分化,調節蛋白質、糖類及脂肪的代謝,對人體新陳代謝等各種生理功能有廣泛的調節功能。(I)人生長激素最明顯的作用是促進骨骼、軟骨組織的生長。它刺激蛋白質和膠原蛋自的合成,加速組織對循環系統中游離氨基酸的攝取和利用。(2)促蛋白質合成。hGH能促進氨基酸進入細胞,加速蛋白質合成,減少尿素、肌酸和氮的排出。在蛋白質合成中,hGH可增加tRNA的合成,增強對機體氨基酸的攝取能力。 (3)促代謝作用 hGH能夠促進三大營養物質的代謝。hGH對糖和脂肪的作用主要體現在兩方面:一方面是胰島素樣作用,即增加葡萄糖的攝取和氧化以及抵抗脂肪分解的作用;另一方面,hGH具有明顯抗胰島素的作用。hGH還使脂肪的分解加快,血液中自由脂肪酸含量增加。(4)免疫調節作用 hGH通過促進骨髓細胞成熟刺激吞噬細胞遷移,觸發吞噬細胞產生超氧陰離子和細胞因子以及提高調理素的活力,在刺激B細胞產生免疫球蛋白等方面起重要作用,增強免疫防御功能。在臨床上,生長激素己經應用于因內源性生長激素缺乏所引起的兒童生長緩慢、性早熟治療、重度燒傷治療等等。目前,由于生長激素具有加速新陳代謝、修復受損組織、抗衰老、提高機體免疫力等作用,生長激素的應用又進入了倍受女性喜愛的美容領域并倍受美容界的青睞。大腸桿菌作為目前最為方便簡易的重組蛋白表達系統,結構復雜的異源蛋白在其胞質中表達時常形成包涵體而失去活性,在純化提取時需要經過變性復性步驟,不僅條件難于控制,目的產物的活性和收率也損失很大,從而對實際生產應用形成了制約。而分泌型基因重組人生長激素的氨基酸含量、一級結構及空間構象與人體自身分泌的生長激素完全相同,具有與人體內源生長激素同等的作用。因此,利用合適的信號肽將異源蛋白引導至大腸桿菌的周質腔中的分泌表達方式是解決此問題的有效手段。
    技術實現思路
    本專利技術的目的是提供一種高效分泌表達重組人生長激素的操縱子、含有前述操縱子序列的表達載體、和含有上述操縱子的表達質粒轉化得到的分泌表達重組人生長激素的工程菌,最終實現重組人生長激素在大腸桿菌中的高效分泌表達,克服現有技術存在的上述不足。本專利技術提供的高效分泌表達重組人生長激素的大腸桿菌操縱子,包括:大腸桿菌色氨酸啟動子(SEQ1)、經過優化改造的大腸桿菌堿性磷酸酶信號肽的編碼序列(SEQ2)和重組人生長激素的編碼序列(SEQ3),其序列如下:本文檔來自技高網
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    【技術保護點】
    一種高效分泌表達重組人生長激素的大腸桿菌操縱子,包括:大腸桿菌色氨酸啟動子(SEQ1)、經過優化改造的大腸桿菌堿性磷酸酶信號肽的編碼序列(SEQ2)和重組人生長激素的編碼序列(SEQ3),其序列如下:。523713dest_path_image001.jpg

    【技術特征摘要】
    1.一種高效分泌表達重組人生長激素的大腸桿菌操縱子,包括:大腸桿菌色氨酸啟動子(SEQ1)、經過優化改造的大腸桿菌堿性磷酸酶信號肽的編碼序列(SEQ2)和重組人生長激素的編碼序列(SEQ3),其序列如下:2.含有權利要求1所述操縱子序列的表達載體,其特征是:將序列表中SEQl和SEQ4依次通過EcoRI和Xba1、XbaI和BamHI克隆至pBR322中得到的表達質粒,命名為pTPS_hGH。3.—種分泌表達重組人生 長激素的工程菌,其特征是:利用權利要求2所述的表達質粒轉化W3110大腸桿菌菌株得到的工程菌,命名為TPS-hGH。4.一種權利要求2所述操縱子序列的表達載體pTPS-hGH的構建方法,其特征是:將序列表中SEQl和SEQ4依次通過EcoRI和Xbal、...

    【專利技術屬性】
    技術研發人員:張博學張軍李慶春杜研鞠蒙蒙
    申請(專利權)人:吉林修正藥業新藥開發有限公司
    類型:發明
    國別省市:

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