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    一種特異性萊克多巴胺人工抗原的合成方法技術

    技術編號:8902930 閱讀:300 留言:0更新日期:2013-07-10 23:39
    一種特異性萊克多巴胺人工抗原的合成方法,屬于生物化工技術領域。本發明專利技術包括如下步驟:將章魚胺和乙酰丙酸乙酯混合在甲醇溶液中,在三乙胺催化下,通過氰基硼氫化鈉還原,反應得到中間產物,將中間產物在堿性條件下水解,得到含活性羧基的分子,該分子與萊克多巴胺分子的同源性大于70%,可作為萊克多巴胺的半抗原,將半抗原再與載體蛋白進行偶聯,得到萊克多巴胺人工抗原。實驗結果表明,用本發明專利技術的抗原免疫動物產生的抗體特異性高、靈敏度高,得到的抗血清效價可達64000,檢測限為0.1ng/mL,半抑制濃度IC50為1ng/mL。本發明專利技術的抗原或抗體可用于建立酶聯免疫吸附分析方法和膠體金試紙快速檢測法,用于快速檢測食品中的萊克多巴胺殘留,應用前景廣闊。

    【技術實現步驟摘要】

    一種高特異性萊克多巴胺人工抗原的合成方法,屬于生物化工

    技術介紹
    萊克多巴胺(Ractopamine)是一種人工合成的β腎上腺受體激動劑,可用于治療充血性心力衰竭癥、肌肉萎縮癥,增長肌肉,減少脂肪蓄積,并對胎兒和新生兒生長有益。其分子結構式為:權利要求1.,其特征在于以章魚胺和乙酰丙酸乙酯為原料合成萊克多巴胺半抗原即化合物I,化合物I通過1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺EDC與N-羥基琥珀酰亞胺NHS活化、或者通過三正丁胺與氯甲酸異丁酯活化,再與載體蛋白進行偶聯制得萊克多巴胺人工抗原即化合物II,合成路線如反應式所示:2.根據權利要求1所述萊克多巴胺人工抗原的合成方法,其特征在于:所述的載體蛋白為:牛血清白蛋白BSA,或匙孔血藍蛋白KLH、血藍蛋白LPH、雞卵清白蛋白OVA、人血清白蛋白HSA之一種。3.根據權利要求1所述萊克多巴胺人工抗原的合成方法,其特征在于:化合物I萊克多巴胺半抗原,其分子結構式如式I所示:4.根據權利要求1所述萊克多巴胺人工抗原的合成方法,其特征在于:化合物II萊克多巴胺人工抗原,其分子結構式如式II所示:5.用權利要求1所述方法合成的萊克多巴胺人工抗原的應用,其特征在于制備萊克多巴胺抗體,所述抗體為多克隆抗體和/或單克隆抗體。6.用權利要求1所述方法合成的萊克多巴胺人工抗原的應用,其特征在于檢測食品中萊克多巴胺殘留。全文摘要,屬于生物化工
    本專利技術包括如下步驟將章魚胺和乙酰丙酸乙酯混合在甲醇溶液中,在三乙胺催化下,通過氰基硼氫化鈉還原,反應得到中間產物,將中間產物在堿性條件下水解,得到含活性羧基的分子,該分子與萊克多巴胺分子的同源性大于70%,可作為萊克多巴胺的半抗原,將半抗原再與載體蛋白進行偶聯,得到萊克多巴胺人工抗原。實驗結果表明,用本專利技術的抗原免疫動物產生的抗體特異性高、靈敏度高,得到的抗血清效價可達64000,檢測限為0.1ng/mL,半抑制濃度IC50為1ng/mL。本專利技術的抗原或抗體可用于建立酶聯免疫吸附分析方法和膠體金試紙快速檢測法,用于快速檢測食品中的萊克多巴胺殘留,應用前景廣闊。文檔編號C07K14/795GK103193883SQ201310106888公開日2013年7月10日 申請日期2013年3月28日 優先權日2013年3月28日專利技術者胥傳來, 劉麗強, 王利兵, 匡華, 徐利廣, 馬偉, 胡擁明 申請人:江南大學本文檔來自技高網...

    【技術保護點】
    一種特異性萊克多巴胺人工抗原的合成方法,其特征在于以章魚胺和乙酰丙酸乙酯為原料合成萊克多巴胺半抗原即化合物I,化合物I通過1?乙基?3?(3?二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺EDC與N?羥基琥珀酰亞胺NHS活化、或者通過三正丁胺與氯甲酸異丁酯活化,再與載體蛋白進行偶聯制得萊克多巴胺人工抗原即化合物Ⅱ,合成路線如反應式所示:步驟為:(1)萊克多巴胺半抗原的制備:將章魚胺和乙酰丙酸乙酯按摩爾比1:1混合,在甲醇溶液中,每1mmol章魚胺用0.5mL三乙胺催化下,室溫條件下,通過氰基硼氫化鈉還原,每1mmol章魚胺用1.1mmol氰基硼氫化鈉還原反應12h得到中間產物;將中間產物在堿性條件水解,得到含活性羧基的分子,作為萊克多巴胺半抗原,即化合物I;(2)萊克多巴胺人工抗原的制備:(A)將化合物I用N,N?二甲基甲酰胺DMF溶解,化合物I與N?羥基琥珀酰亞胺NHS,1?乙基?3?(3?二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺EDC的摩爾比為1:1.5:2,在4℃避光攪拌反應1h,再在室溫反應12h,得活化的萊克多巴胺半抗原溶液;取牛血清白蛋白,化合物I與牛血清白蛋白的摩爾比為80:1,將牛血清白蛋白用0.1M?pH9.6碳酸鹽緩沖液溶解,其中溶解后的牛血清白蛋白濃度大于3mg/mL,且碳酸鹽緩沖液與N,N?二甲基甲酰胺DMF的體積比例為5:1;將活化的萊克多巴胺半抗原溶液慢速滴加到牛血清白蛋白溶液中,室溫下反應24h,用PBS緩沖液透析2天,期間更換PBS緩沖液4次,即得到萊克多巴胺人工抗原,即化合物Ⅱ;或(B)將化合物I用N,N?二甲基甲酰胺DMF溶解,化合物I與三正丁胺, 氯甲酸異丁酯的摩爾比為1:1.2:1.2,0℃反應1h,得活化的萊克多巴胺半抗原溶液;取牛血清白蛋白,化合物I與牛血清白蛋白的摩爾比為80:1,將牛血清白蛋白用0.1M?pH9.6碳酸鹽緩沖液溶解,0℃預冷30min,其中溶解后的牛血清白蛋白濃度大于3mg/mL,且碳酸鹽緩沖液與N,N?二甲基甲酰胺(DMF)的體積比例為5:1;在0℃條件下,將活化的萊克多巴胺半抗原溶液慢速滴加到牛血清白蛋白溶液中,0℃條件下反應1h,然后室溫反應24h,用PBS緩沖液透析2天,期間更換PBS緩沖液4次,即得到萊克多巴胺人工抗原,即化合物Ⅱ。FDA00002978119700011.jpg...

    【技術特征摘要】

    【專利技術屬性】
    技術研發人員:胥傳來劉麗強王利兵匡華徐利廣馬偉胡擁明
    申請(專利權)人:江南大學
    類型:發明
    國別省市:

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