在體內(nèi)具有抗腫瘤活性的抗人TROP-2 抗體制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供與hTROP-2特異性反應(yīng)且在體內(nèi)具有抗腫瘤活性的抗體、產(chǎn)生該抗體的雜交瘤、該抗體與藥劑的復(fù)合物、腫瘤的診斷用或治療用藥物組合物、腫瘤的檢測方法、腫瘤的檢測用或診斷用試劑盒。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】
本專利技術(shù)涉及具有抗腫瘤活性的抗人TR0P-2抗體、特別涉及在體內(nèi)具有抗腫瘤活性的抗人TR0P-2抗體。此外，本專利技術(shù)涉及產(chǎn)生該抗體的雜交瘤、及該抗體的用途。
技術(shù)介紹
人TROP-2 (Tacstd2，GA733-1，EGP-1)(以下也記作 hTROP-2。)為已知在各種上皮細胞癌腫中過度表達的、由323氨基酸殘基(參照序列號2)構(gòu)成的I次跨膜型的I型細胞膜蛋白。以前即已明確，存在與人滋養(yǎng)層細胞(tiOphoblasts)和癌細胞所表現(xiàn)的免疫抵抗有關(guān)的細胞膜蛋白(非專利文獻1)，已經(jīng)鑒定出一種被抗人絨毛膜癌細胞株BeWo的細胞膜蛋白的小鼠單克隆抗體(162-25.3、162-46.2)識別的抗原分子，為在人滋養(yǎng)層細胞(trophoblasts)中表達的分子之一，被命名為Trop-2 (非專利文獻2)。此后，相同分子被其它研究者發(fā)現(xiàn)，將被免疫胃癌細胞SW948而得的小鼠單克隆抗體GA733識別的稱為腫瘤抗原GA733-1 (非專 利文獻3)、將被非小細胞肺癌的細胞免疫而獲得的小鼠單克隆抗體RS7-3G11識別的稱為上皮糖蛋白(epithelial/carcinoma antigen, EGP-1)(非專利文獻4)，1995年克隆了 Trop-2的基因，確認(rèn)了它們?yōu)橥环肿?非專利文獻5)。此外，闡明了其在癌細胞中具有放大細胞內(nèi)鈣信號的作用(非專利文獻6)，也被稱為腫瘤相關(guān)鈣信號傳導(dǎo)蛋白(tumor-associated calcium signal transducer) 2, TACSTD2。hTR0P-2基因定位在染色體1ρ32上，與具有約50%同源性的GA733-2 (還作為TACSTD1、上皮糖蛋白EGP-2、EpCAM及Trop-1而已知)一起構(gòu)成TACSTD基因家族(非專利文獻7)。hTR0P-2蛋白(323氨基酸殘基；序列號2)具有約36kD的分子量，包含親水性的信號肽(第I 26位的氨基酸)、細胞外結(jié)構(gòu)域(第27 274位的氨基酸)、細胞跨膜結(jié)構(gòu)域(第275 297位的氨基酸)以及細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(第298 323位的氨基酸)。細胞外結(jié)構(gòu)域中存在4個非均質(zhì)N結(jié)合糖基化位點，添加糖鏈后，表觀分子量增加11 13KD (非專利文獻5)。TACSTD基因家族中，細胞外結(jié)構(gòu)域具有特征性的甲狀腺球蛋白(TY)重復(fù)序列，通常認(rèn)為其與癌細胞的增殖、浸潤、轉(zhuǎn)移有關(guān)。截至目前，尚未鑒定出hTR0P-2的生理學(xué)上的配體，分子功能尚未闡明，但已經(jīng)公開了其在腫瘤細胞中傳遞鈣信號(非專利文獻6)，此外，由于細胞內(nèi)絲氨酸303號殘基通過屬于Ca2+依賴性蛋白激酶的蛋白激酶C而磷酸化(非專利文獻4)以及細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域具有PIP2結(jié)合序列，表明其具有腫瘤細胞中的信號傳遞功能(非專利文獻8)。通過免疫組化(IHC)及流式細胞術(shù)研究等體外診斷研究，已經(jīng)報道了 hTR0P-2在胃癌、肺癌、大腸癌、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、胰癌、肝癌、食道癌等多種上皮源癌腫中過度表達。與此相對，顯示出正常組織中的表達則僅限于上皮區(qū)域的細胞，表達水平也比癌腫中低，表明TR0P-2與腫瘤形成有關(guān)(專利文獻I 3和9)。此外，在作為臨床檢體的生物學(xué)標(biāo)志的hTR0P-2表達水平解析中，顯示其與大腸癌(非專利文獻10及11)、胰臟癌(非專利文獻12)、口腔癌(非專利文獻13)的惡性度有關(guān)，在hTR0P-2高表達時，癌的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)頻率顯著高。此外，在使用cDNA微陣列技術(shù)的大規(guī)模基因表達分析中，已經(jīng)鑒定出，其為與正常的卵巢上皮相比在卵巢的重度乳頭狀癌中最為高度過度表達的基因組之一(非專利文獻14)。進而，近年通過使用大腸癌細胞的模型證明了 hTR0P-2在腫瘤形成中的重要作用(非專利文獻15)。hTR0P-2的表達促進腫瘤細胞的錨著非依賴性細胞增殖，是移植到免疫缺陷小鼠皮下的癌細胞的腫瘤形成及增殖所必需的，表明其可能是功能性腫瘤抗原，可能成為新的治療祀標(biāo)。截至目前，已經(jīng)報告了幾種抗hTR0P-2抗體的抗腫瘤效果的研究結(jié)果。就RS7抗體(專利文獻I)而言，使用經(jīng)放射標(biāo)記的抗體在體內(nèi)模型中進行了試驗，在裸小鼠異種移植模型中顯示出抗腫瘤活性，但沒有報告僅抗體(裸抗體)時的抗腫瘤效果。此外，報告了與細胞毒素結(jié)合的抗hTR0P-2單克隆抗體BRllO (專利文獻2)對于人癌細胞株H3619、H2987、MCF-7、H3396及H2981的體外實驗中的細胞毒性，但體內(nèi)數(shù)據(jù)方面，對于裸抗體或免疫復(fù)合BRllO的體內(nèi)數(shù)據(jù)則均未公開。近年還報道了:由通過用人卵巢癌組織免疫小鼠而得的雜交瘤細胞株AR47A6.4.2或AR52A301.5產(chǎn)生的分離單克隆抗體與hTR0P-2結(jié)合，初次以裸抗體形式顯示體外的細胞毒性，并且在裸小鼠異種移植模型中顯示抗腫瘤活性(專利文獻3和4)。但是，這些文獻中，在移植了胰臟癌細胞株BxPC-3及PL45、前列腺癌細胞PC-3、乳腺癌細胞MCF-7以及大腸癌細胞Colo205的小鼠異種移植模型中，雖然僅抗體時顯示出抗腫瘤效果，但是除了在BxPC-3細胞移植中顯示出治療效果以外，均止步于通過抗體的預(yù)防性投與而部分地(約40 60%)抑制腫瘤形成及增殖，此外，所需抗體量也為20mg/kg左右，為非常高的用量。由以上的現(xiàn)有技術(shù)，雖然已經(jīng)明確抗hTR0P-2抗體可能作為抗腫瘤抗體，但同時所有的抗hTR0P-2抗體均并非是以裸抗體形式以抗體單獨在體內(nèi)顯示出抗腫瘤效果，表明對hTR0P-2的作用根據(jù)抗體的結(jié)合位點、親和性、單克隆抗體譜而不同。專利文獻1:美國專利第6653104號專利文獻2:美國專利第5840854號專利文獻3:美國專利第7420040號專利文獻4:美國專利第7420041號非專利文獻1:Faulk WP, et al., Proc.Natl.Acad.Sc1.U S A, 75 (4)，p.1947-1951 (1978)非專利文獻2:Lipinski M, et al., Proc.Natl.Acad.Sc1.U S A, 78 (8)，p.5147-5150 (1981)非專利文獻3:Linnenbach AJ, et al., Proc.Natl.Acad.Sc1.U S A, 86 (1)，p.27-31 (1989)非專利文獻4:Basu A, et al., Int.J.Cancer, 62 (4)，p.472-479 (1995)非專利文獻5:Fornaro M, et al., Int.J.Cancer,62 (5), p.610-618 (1995)非專利文獻6:Ripani E，et al., Int.J.Cancer, 76 (5)，p.671-676 (1998)非專利文獻7:Calabrese G，et al.，Cell Genet.,92 (1-2), p.164-165 (2001)非專利文獻8:E1 Sewedy Tet al., Int.J.Cancer, 75 (2)，p.324-330 (1998)非專利文獻9:Cubas R, et al.，Biochim.Biophys.Acta., 1796 (2), p.309-314(2009)非專利文獻10:0hmachi Tet al.，Cli本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：中村康司，岡村健太郎，田村真紀(jì)，柳內(nèi)浩之，菅家徹，
申請(專利權(quán))人：株式會社立富泰克，
類型：
國別省市：