【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種膠原蛋白多肽及其制備方法，更加具體地說，尤其涉及牦牛皮降 血壓多肽及其制備方法。
技術(shù)介紹
膠原蛋白肽通常是由膠原或明膠經(jīng)過蛋白酶等降解處理得到的產(chǎn)物，含有的氨基 酸和膠原的基本一致，特別是特征氨基酸羥脯氨酸。現(xiàn)代生物代謝的研究發(fā)現(xiàn)，通過一系列 酶消化蛋白，可以形成一些小分子的物質(zhì)，并被人體吸收。體內(nèi)吸收不僅局限于游離氨基酸 的形式，而且主要是以2-3個氨基酸組成的小肽形式直接吸收。抗高血壓肽又被稱為血管 緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE)抑制肽。ACE抑制多肽是通過競爭性抑制作用，阻礙ACE的催化反應(yīng)， 與血管緊張素 I相比，ACE抑制肽與ACE的結(jié)合能力更強，而且還不容易釋放，從而阻礙ACE 催化水解血管緊張素 I成為血管緊張素II的生化反應(yīng)過程，發(fā)揮降低血壓的作用。 自從蛇毒中發(fā)現(xiàn)ACE抑制肽，已經(jīng)有許多研究嘗試合成ACE抑制多肽，如依那普 利、阿拉普利和賴諾普利等，這些合成化合物被用來治療人體的高血壓和心力衰竭等疾病。 但是合成的ACE抑制化合物一般都會有副作用，如咳嗽、味覺障礙、皮疹和血管神經(jīng)性水腫 等。因此，在最近10年，人們都在努力尋找天然來源的ACE抑制劑，盡管很少但是這些抑制 劑是沒有副作用的。 牦牛是青藏高原地區(qū)的重要畜種，擁有頑強的生命力，生長環(huán)境是無污染、綠色純 天然的青藏高原。牦牛皮中含有人體必需的各種氨基酸、多種營養(yǎng)元素、二十多種對人體 有益的礦物質(zhì)。其化學(xué)成分主要由蛋白質(zhì)、水、無機鹽、脂類、色素及碳水化合物等組成，其 中水分占60% -70%，蛋白質(zhì)含量占到30% -40%，脂類的含...
【技術(shù)保護點】
牦牛皮降血壓膠原蛋白多肽，其特征在于，按照下述步驟進行：步驟1，牦牛皮的脫毛，即將牦牛皮置于水中清洗除去表面雜質(zhì)，在剪去折干牦牛皮上的毛后在60～80℃溫水中浸泡牦牛皮4～48h，機械徹底脫毛，清水沖洗，清除毛屑，將皮剪切成0.5×0.5cm的小塊，得到脫毛的牦牛皮，置于?18～?20℃冷凍保存；步驟2，牦牛皮的脫脂，即將步驟1脫毛的牦牛皮置于5wt％～20wt％正丁醇的水溶液中(即在溶液中，正丁醇的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為5—20％)，在溶液溫度為0～10℃下連續(xù)攪拌4～48h，得到脫脂的牦牛皮，所述步驟1脫毛的牦牛皮與正丁醇的水溶液的質(zhì)量比為1：(5～20)；步驟3，牦牛皮的除雜蛋白，即將步驟2脫脂的牦牛皮置于堿液中，在0～10℃下連續(xù)攪拌5～48h，得到除雜蛋白的牦牛皮，其中所述堿液為0.01～0.2M的氫氧化鈉水溶液或者氫氧化鉀水溶液，所述步驟2脫脂的牦牛皮與堿液的質(zhì)量比為1：(15～40)；步驟4，牦牛皮的脫酸，即將步驟3除雜蛋白的牦牛皮置于酸液中，在室溫20—25℃攪拌浸泡2～15h，再反復(fù)水洗牦牛皮至pH值達到5～7，得到脫酸牦牛皮，其中所述酸液為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.01％～2％的鹽酸水...
【技術(shù)特征摘要】
1. 牦牛皮降血壓膠原蛋白多肽，其特征在于，按照下述步驟進行： 步驟1，牦牛皮的脫毛，即將牦牛皮置于水中清洗除去表面雜質(zhì)，在剪去折干牦牛皮上 的毛后在60?80°C溫水中浸泡牦牛皮4?48h，機械徹底脫毛，清水沖洗，清除毛屑，將皮 剪切成0. 5X0. 5cm的小塊，得到脫毛的牦牛皮，置于-18?-20°C冷凍保存； 步驟2,牦牛皮的脫脂，即將步驟1脫毛的牦牛皮置于5wt%?20wt%正丁醇的水溶液 中（即在溶液中，正丁醇的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為5-20% )，在溶液溫度為0?10°C下連續(xù)攪拌4? 48h，得到脫脂的牦牛皮，所述步驟1脫毛的牦牛皮與正丁醇的水溶液的質(zhì)量比為1 : (5? 20)； 步驟3,牦牛皮的除雜蛋白，即將步驟2脫脂的牦牛皮置于堿液中，在0?10°C下連續(xù) 攪拌5?48h，得到除雜蛋白的牦牛皮，其中所述堿液為0. 01?0. 2M的氫氧化鈉水溶液或 者氫氧化鉀水溶液，所述步驟2脫脂的牦牛皮與堿液的質(zhì)量比為1 : (15?40); 步驟4,牦牛皮的脫酸，即將步驟3除雜蛋白的牦牛皮置于酸液中，在室溫20- 25°C攪 拌浸泡2?15h，再反復(fù)水洗牦牛皮至pH值達到5?7,得到脫酸牦牛皮，其中所述酸液為 質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為〇. 01 %?2%的鹽酸水溶液或者硫酸水溶液，所述步驟3除雜蛋白的牦牛皮 與酸液的質(zhì)量比為1 : (5?15); 步驟5,對脫酸牦牛皮進行抽提，即將步驟4脫酸的牦牛皮置于70?90°C的熱水中攪 拌抽提，所述步驟4脫酸的牦牛皮與熱水的質(zhì)量比為1 : (5?15)，在攪拌抽提過程中每隔 30?120min進行過濾并更換熱水繼續(xù)進行攪拌抽提，直至牦牛皮全部溶解，每次過濾得到 的濾液匯總成為水抽提產(chǎn)物； 步驟6,將水抽提產(chǎn)物制備明膠粉末，即將步驟5得到的水抽提產(chǎn)物（即牦牛皮全部溶 解后得到的全部膠液）在4000?10000g離心力下離心2?20min，收集上清液，利用旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀進行濃縮后干燥得到明膠粉末，2?4°C儲存?zhèn)溆茫? 步驟7,對明膠粉末進行酶解，即將步驟6制備的明膠粉末溶于0. 01?0. 2M的磷酸鈉 緩沖溶液中以得到質(zhì)量百分?jǐn)?shù)4?10 %的明膠水溶液，加入復(fù)合酶進行酶解，加酶量為底 物（即明膠粉末）重量的〇· 1?2%，酶解溫度為35?55°C，酶解時間4?8h，pH值為7 ; 酶解后置于75?90°C滅酶處理5?15min ;滅活后，在4000?10000g離心力下離心15? 40min,保留上清液； 步驟8,將步驟7制備的上清液進行超濾以得到所需分子量的膠原蛋白溶液，其中選擇 使用超濾膜進行超濾，分別使用分子量為10kDa及3000Da的超濾膜進行超濾，得到分子量 為小于10kDa和3000Da的膠原蛋白溶液。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的牦牛皮降血壓膠原蛋白多肽，其特征在于，在步驟2中，所述 正丁醇濃度優(yōu)選10 - 20%，溫度為5?10°C，時間為20?40h ;在步驟3中，所述堿液為氫 氧化鈉的水溶液，摩爾濃度為0. 01M，除雜溫度為2?6°C，時間為15-40h ;在步驟4中，所 述酸液為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為〇. 01 %?2%的鹽酸水溶液，在室溫20- 25°C攪拌浸泡10?15h。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的牦牛皮降血壓膠原蛋白多肽，其特征在于，在步驟6中，在濃 縮后進行的干燥為冷凍干燥或者噴霧干燥。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的牦牛皮降血壓膠原蛋白多肽，其特征在于，在完成步驟8的超 濾之后，進行離子交換層析、凝膠過濾層析和高效液相色譜等方法進行分離純化多肽，濃縮 干燥，以得到膠原蛋白多肽的粉末...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：朱宏吉，馬力，王世鵬，
申請(專利權(quán))人：天津大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：天津;12
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