一種四環(huán)二萜類化合物及其制備方法與應用技術

本發(fā)明專利技術公開了一種四環(huán)二萜類化合物及其制備方法與應用，所述的四環(huán)二萜類化合物是以黑果土當歸根為原料，經(jīng)浸膏提取、有機溶劑萃取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離得到的，該化合物分子式為C20H30O3，命名為dumetorumane?B，具有下述結(jié)構(gòu)式：?。制備方法是以黑果土當歸根為原料，經(jīng)浸膏提取、有機溶劑萃取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離獲得。應用為四環(huán)二萜類化合物在制備預防和/或治療腫瘤藥物中的應用和在制備預防和/或治療人肺腺癌、人急性早幼粒白血病或人乳腺癌藥物中的應用。所述的四環(huán)二萜類化合物對人肺腺癌、人急性早幼粒白血病或人乳腺癌細胞株有顯著的抑制作用，提示其具有良好的抗癌活性，可以作為抗癌活性成分或先導化合物。

【技術實現(xiàn)步驟摘要】
一種四環(huán)二萜類化合物及其制備方法與應用
本專利技術屬于植物有效成分提取
，具體涉及一種四環(huán)二萜類化合物及其制備方法與應用。
技術介紹
目前全球癌癥發(fā)病形勢嚴峻，發(fā)病率與死亡率呈持續(xù)上升趨勢，已經(jīng)成為嚴重危害人類健康、導致現(xiàn)代人類死亡的第一大惡疾和頑癥。世界衛(wèi)生組織于2014年2月發(fā)布報告,預測全球癌癥病例將逐年呈現(xiàn)迅猛增長態(tài)勢，由2012年的1400萬人，逐年遞增至2025年的1900萬人，到2035年將達到2400萬人。該組織統(tǒng)計數(shù)據(jù)還顯示，中國每年新增癌癥病例約350萬，約有250萬人因此死亡。因此尋找有效的抗癌藥物已成為當務之急。在抗癌藥物研究中，化療藥物的研究和臨床應用已取得很大進展?；瘜W合成的抗癌藥物如金屬配合物鉑絡合物、有機鍺化合物等，雖然具有強抗癌性，但存在毒副作用，水溶性差等缺陷。近年來，中外研究人員逐漸將目光投向資源豐富、純天然的中草藥、民族藥，希望從中尋找新的抗癌藥物。目前從中草藥、民族藥中發(fā)現(xiàn)了紫杉醇、喜樹堿、三尖杉酯堿類、長春新堿、鬼臼毒素、欖香烯乳等一系列天然抗癌藥物，并且每年都有多只新品上市。這些天然藥物均表現(xiàn)了良好的抗癌活性并在臨床上得到了廣泛的應用，也日益證明從天然產(chǎn)物中篩選抗腫瘤藥物是一個很有前景的方向。黑果土當歸(AraliadumetorumHand.-Mazz)系五加科(Araliaceae)楤木屬植物，在云南稱“牛角七”，“白九股?！保懊塾蛥ⅰ薄Ｃ耖g以根入藥，入脾、胃二經(jīng)。中草藥，2001，32(9):847-850報道，該植物有補中益氣、托毒外出、消炎的功效，用于淋巴腺炎、慢性化膿性骨髓炎和癤癰等癥。該屬植物化學成分主要含二萜、三萜皂苷、香豆素、黃酮、木脂素及甾醇。該屬植物中的二萜類化合物有抗腫瘤、抗炎等活性。本專利技術試圖對黑果土當歸中二萜類化合物的抗腫瘤作用做進一步深入研究，以期發(fā)現(xiàn)其中的細胞毒活性天然產(chǎn)物，為篩選高效、低毒的抗腫瘤藥物提供依據(jù)。
技術實現(xiàn)思路
本專利技術的第一目的是提供一種四環(huán)二萜類化合物；第二目的在于提供所述四環(huán)二萜類化合物的制備方法；第三目的在于提供所述四環(huán)二萜類化合物的應用。本專利技術的第一目的是這樣實現(xiàn)的，所述的四環(huán)二萜類化合物是以黑果土當歸根為原料，經(jīng)浸膏提取、有機溶劑萃取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離得到的，該化合物分子式為C20H30O3，命名為dumetorumaneB，具有下述結(jié)構(gòu)式：。本專利技術的第二目的是這樣實現(xiàn)的，是以黑果土當歸根為原料，經(jīng)浸膏提取、有機溶劑萃取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離獲得，具體為：A、浸膏提取：將黑果土當歸根晾干粉碎得到0.05~0.15cm粒徑大小的顆粒，加入黑果土當歸根重量比4~8倍的體積百分濃度80~95%乙醇溶液于65~74℃下回流提取3~5次，每次1~3h，合并提取液，提取液過濾，減壓濃縮提取液至比重為1.1~1.3得到浸膏a；B、有機溶劑萃取：浸膏a中加入重量比2~4倍量的水，依次用與水等體積的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇溶劑進行萃取，每種溶劑萃取4~6次，蒸去溶劑分別得到石油醚萃取物b、乙酸乙酯萃取物c和正丁醇萃取物d；C、硅膠柱層析：1）將乙酸乙酯萃取物c上硅膠柱，裝柱硅膠為100~200目，用量為萃取物c重量6~8倍量；用體積比為30:1~0:1的氯仿-甲醇有機溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測，合并相同的部分；2）將1）中以15:1配比的氯仿-甲醇有機溶劑進行洗脫得到的洗脫液e上硅膠柱，裝柱硅膠為200~300目，用量為洗脫液e體積6~8倍量；用體積比25:1~5:1的氯仿甲醇有機溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng)TLC檢測，合并相同的部分；D、高效液相色譜分離：將C步驟2）中以20:1配比的氯仿-甲醇有機溶劑進行洗脫得到的洗脫液采用半制備高效液相色譜儀分離純化，即得所述的四環(huán)二萜類化合物dumetorumaneB。本專利技術四環(huán)二萜類化合物是首次被分離出來的，通過核磁共振和其他波譜技術測定方法確定為四環(huán)二萜類化合物，并表征其具體結(jié)構(gòu)為：化合物dumetorumaneB，為白色無定型粉末(溶劑為氯仿)，=+43.5°(c0.45,CHCl3);IR(KBr)譜在3345,2969,1711,1652,1123,1067cm-1有吸收，表明分子中存在羧基、羥基和雙鍵。HRESI-MS(附圖1)顯示其準分子離子峰m/z317.2131[M-H]-(calcd.317.2116)，結(jié)合NMR譜確定其分子式為C20H30O3，不飽和度為6。1HNMR(附圖2，數(shù)據(jù)歸屬見表1)顯示分子中有3個甲基單峰，分別為δH1.25(3H,s),1.18(3H,s)及0.81(3H,s))，有1個連氧亞甲基峰（δH3.72(1H,dd,J=11.2,7.2Hz)；3.60(1H,dd,J=11.2,8.0Hz)）;13CNMR(附圖3及附圖4，數(shù)據(jù)歸屬見表1)顯示分子中有20個碳，其中有6個季碳，3個次甲基，8個亞甲基，及3個甲基。結(jié)合HSQC相關譜(附圖5)，并對比文獻數(shù)據(jù)可證實,該化合物與已知化合物acasianeA結(jié)構(gòu)相似,為含有1個三元小環(huán)的二萜類化合物,區(qū)別在于分子中多了1個羰基(δC182.7)和1個雙鍵(δC127.8及135.5)，少了1個連氧亞甲基(δC63.8)和2個次甲基(δC56.3及37.1)；進一步經(jīng)HMBC相關(附圖6)證實C-18（羰基）與C-4位相連，C-8及C-9位為一雙鍵。進一步經(jīng)HMBC相關(附圖6)、COSY相關(附圖7)和ROESY(附圖8)及與文獻(LinA.S.,LinC.R.,DuY.C.,LübkenT.,ChiangM.Y.,ChenI.H.,WuC.C.,HwangT.L.,ChenS.L.,YenM.H.,ChangF.R.,WuY.C.AcasianeAandBandfarnesiraneAandB,diterpenederivativesfromtherootsofAcaciafarnesiana.PlantaMed2009,75:256-261.)對比證實，使化合物的結(jié)構(gòu)最終得到確認，化合物具有下述結(jié)構(gòu)式：通過SCIFINDER數(shù)據(jù)庫檢索和文獻查詢證實該化合物為新化合物。表1本專利技術化合物的1H-和13C-NMR(CDCl3)數(shù)據(jù)本專利技術的第三目的是這樣實現(xiàn)的，所述的四環(huán)二萜類化合物在制備預防和/或治療腫瘤藥物中的應用。所述的四環(huán)二萜類化合物在制備預防和/或治療人肺腺癌、人急性早幼粒白血病或人乳腺癌藥物中的應用。本專利技術所述的四環(huán)二萜類化合物進行了細胞毒活性測試，實驗結(jié)果顯示出良好的抑制人肺腺癌、人急性早幼粒白血病及人乳腺癌細胞株活性，可為醫(yī)用工業(yè)提供有應用價值的新化合物或先導化合物。本專利技術的優(yōu)點：1、本專利技術中的四環(huán)二萜類化合物對人肺腺癌、人急性早幼粒白血病或人乳腺癌細胞株有顯著的抑制作用，提示其具有良好的抗癌活性，可以作為抗癌活性成分或先導化合物。2、本專利技術中的四環(huán)二萜類化合物可為天然存在的有機化合物，原料來源廣泛，并且化合物制備操作流程簡單，所獲得的化合物純度高，隨后的工業(yè)化生產(chǎn)易實現(xiàn)。附圖說明圖1是本專利技術化合物高分辨質(zhì)譜（HRESI-MS)；圖2是本專利技術化合物的核磁共振氫譜（1HNMR)；圖3是本專利技術化合物的核磁共振碳譜本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術保護點】
一種四環(huán)二萜類化合物，其特征在于所述的四環(huán)二萜類化合物是以黑果土當歸根為原料，經(jīng)浸膏提取、有機溶劑萃取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離得到的，該化合物分子式為C20H30O3，命名為dumetorumane?B，具有下述結(jié)構(gòu)式：。

【技術特征摘要】
1.一種四環(huán)二萜類化合物制備方法，其特征在于所述的四環(huán)二萜類化合物是以黑果土當歸根為原料，經(jīng)浸膏提取、有機溶劑萃取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離得到的，該化合物分子式為C20H30O3，命名為dumetorumaneB，具有下述結(jié)構(gòu)式：；制備方法具體為：A、浸膏提?。簩⒑诠廉敋w根晾干粉碎得到0.05~0.15cm粒徑大小的顆粒，加入黑果土當歸根重量比4~8倍的體積百分濃度80~95%乙醇溶液于65~74℃下回流提取3~5次，每次1~3h，合并提取液，提取液過濾，減壓濃縮提取液至比重為1.1~1.3得到浸膏a；B、有機溶劑萃?。航郺中加入重量比2~4倍量的水，依次用與水等體積的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇溶劑進行萃取，每種溶劑萃取4~6次，蒸去溶劑分別得到石油醚萃取物b、乙酸乙酯萃取物c和正丁醇萃取物d；C、硅膠柱層析：1）將乙酸乙酯萃取物c上硅膠柱，裝柱硅膠為100~200目，用量為萃取物c重量6~8倍量；用體積比為30:1~0:1的氯仿-甲醇有機溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測，合并相同的部分；2）將1）中以15:1配比的氯仿-甲醇有機溶劑進行洗脫得到的洗脫液e上硅膠柱，裝柱硅膠為200~300目，用量為洗脫液e體積6~8倍量；用體積比25:1~5:1的氯仿甲醇有機溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng)TLC檢測，合并相同的部分；D、高效液相色譜分離：將C步驟2...

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：田凱，黃相中，江志勇，孫靜賢，夏福婷，李艷紅，王韋，
申請(專利權(quán))人：云南民族大學，
類型：發(fā)明
國別省市：云南;53