一種海洋真菌爪曲霉溴代縮酚環(huán)酸醚類化合物及其制備方法和應(yīng)用技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種海洋真菌爪曲霉溴代縮酚環(huán)酸醚類化合物及其制備方法和應(yīng)用。所述海洋真菌爪曲霉溴代縮酚環(huán)酸醚類化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下式（Ⅰ）所示：

A marine fungus Aspergillus unguis brominated phenol reduction tranexamic acid ether compound and preparation method and application thereof

The invention discloses a marine fungus Aspergillus unguis brominated phenol reduction tranexamic acid ether compound and preparation method and application thereof. The marine fungus Aspergillus unguis brominated chemical structure of Depsides tranexamic acid ether compounds (I) is shown as follows:

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
一種海洋真菌爪曲霉溴代縮酚環(huán)酸醚類化合物及其制備方法和應(yīng)用
本專利技術(shù)屬于微生物發(fā)酵物提取
，具體地，涉及一種海洋真菌爪曲霉溴代縮酚酸環(huán)醚類化合物及其制備方法和應(yīng)用。
技術(shù)介紹
目前在臨床治療中發(fā)現(xiàn)病原微生物的耐藥性越來越強，尤其是耐甲氧基青霉素金黃色葡萄球菌（MRSA）、銅綠假單胞菌（俗稱綠膿桿菌）和白色假絲酵母（俗稱白色念珠菌）造成的感染越來越嚴重，很多傳統(tǒng)抗生素已基本喪失療效，因此有必要尋找新型的抗生素來應(yīng)對此挑戰(zhàn)。此外，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)因為過度使用各種化學(xué)合成農(nóng)藥，造成嚴重的食品、土壤及水污染，并經(jīng)過食物鏈危及人體健康和生態(tài)平衡，農(nóng)藥殘留也嚴重阻礙了我國的農(nóng)產(chǎn)品出口；而生物農(nóng)藥具有不易產(chǎn)生抗藥性、對非靶生物安全、環(huán)境友好且易于自然降解等優(yōu)點，對于人類健康、環(huán)境保護及農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展具有重要的意義。海洋真菌來源的抗生素及殺蟲劑具有易于大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)、高效、易于克服抗藥性等優(yōu)點，易于實現(xiàn)藥源穩(wěn)定供給，具有較好的經(jīng)濟、社會與環(huán)境效益。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有抗生素及殺蟲劑的缺陷和不足，提供一種提取自海洋真菌爪曲霉的溴代縮酚酸環(huán)醚類化合物，該化合物具有抗真菌、抗細菌活性和殺蟲活性，在制備抗真菌劑、抗細菌劑及農(nóng)用殺蟲劑中具有廣泛的應(yīng)用前景。本專利技術(shù)的目的是提供一種海洋真菌爪曲霉溴代縮酚酸環(huán)醚類化合物。本專利技術(shù)的另一目的是提供上述化合物的制備方法。本專利技術(shù)的再一目的是提供上述化合物的應(yīng)用。本專利技術(shù)的上述目的是用過以下技術(shù)方案給予實現(xiàn)的。本專利技術(shù)采用的海洋真菌爪曲霉（Aspergillusunguis）CGMCCNo.3372菌種，于2009年10月28日保存于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC），保藏編號為CGMCCNo.3372，株號為DLEP2008001。一種海洋真菌爪曲霉（Aspergillusunguis）溴代縮酚酸環(huán)醚類化學(xué)物，其特征在于，所述化學(xué)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如（）所示：（）上述海洋真菌爪曲霉溴代縮酚酸環(huán)醚類化學(xué)物的制備方法包括如下步驟：S1.發(fā)酵：將爪曲霉DLEP2008001接種于真菌培養(yǎng)基中靜置發(fā)酵后，分別收集菌絲體和發(fā)酵液；；S2.粗提：將步驟S1的發(fā)酵液經(jīng)乙酸乙酯萃取后濃縮，菌絲體經(jīng)有機溶劑提取后濃縮，合并后得粗提物；S3.分離純化：將步驟S2的粗提物進行硅膠柱梯度層析，經(jīng)硅膠薄層層析檢測，將含有目標物質(zhì)的洗脫組分繼續(xù)進行硅膠柱、凝膠柱層析和正相制備液相色譜分離純化得到目標化合物；其中，步驟S1所述真菌液體培養(yǎng)基的配方為：每升中含有如下組分：土豆汁400～600mL，NaBr15～25g，蔗糖15～25g，純水或自來水400～600mL。優(yōu)選地，所述真菌液體培養(yǎng)基的配方為：每升中含有如下組分：土豆汁500mL，NaBr20g，蔗糖20g，純水或自來水500mL。具體地，上述海洋真菌爪曲霉溴代縮酚酸環(huán)醚類化學(xué)物的制備方法包括如下步驟：S1.發(fā)酵：將爪曲霉（Aspergillusunguis）CGMCCNo.3372接種于真菌液體培養(yǎng)基中靜置發(fā)酵，發(fā)酵2～4天后，加入終濃度為0.5～2mM（優(yōu)選1mM）的普魯卡因溶液，繼續(xù)發(fā)酵18～22天，過濾，分別收集菌絲體和發(fā)酵液；S2.粗提：將步驟S1獲得的發(fā)酵液經(jīng)乙酸乙酯萃取并濃縮，將步驟S1獲得的菌絲體用有機溶劑提取并濃縮，將所得濃縮物合并，即為粗提物；其中，所述有機溶劑為氯仿、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇中一種或幾種；S3.分離純化：a.將步驟S2獲得的粗提物經(jīng)硅膠柱層析，用石油醚-二氯甲烷或石油醚-氯仿進行預(yù)洗脫，繼而用氯仿-甲醇或二氯甲烷-甲醇進行梯度洗脫，收集以洗脫液體積比100:0～100:1梯度的洗脫的組分；組分特征為硅膠薄層層析板上展開劑為體積比15:1的氯仿-甲醇溶液展開下，比移值為0.29～0.74的混合物組分；b.將步驟a收集的洗脫組分再進行硅膠柱層析，洗脫液為體積比5:1的石油醚-丙酮；c.將步驟b收集的洗脫組分進行葡聚糖凝膠柱層析，洗脫液為甲醇，流速0.5～0.7mL/min；d.將步驟c收集的洗脫組分進行正向制備液相色譜純化，洗脫液為體積比3～5:1（優(yōu)選4:1）的氯仿-石油醚，在硅膠柱填充20～30g（優(yōu)選25g）硅膠、流速2～4mL/min（優(yōu)選3mL/min）情況下，收集保留時間為14～28min的組分；e.將步驟d收集的洗脫組分繼續(xù)進行正向制備液相色譜純化，洗脫液為純氯仿，在硅膠柱填充10～15g（優(yōu)選12g）硅膠、流速1～3mL/min（優(yōu)選2mL/min）情況下，收集保留時間為14～35min的主峰，得到收集物。優(yōu)選地，步驟a或b所述硅膠柱層析的硅膠為200～300目。另外，具體地，所述溴代縮酚酸環(huán)醚類化合物在薄層色譜上的比移值及化學(xué)顯色特征如下：層析展開劑為純氯仿時，所述化合物在GF254薄層硅膠板上的Rf值為0.26，254nm紫外線照射下呈單個、均勻的黑色～暗藍色斑點，茴香醛硫酸顯色為棕褐色。優(yōu)選地，所述化合物在高效液相分析條件下保留時間為4.0～5.0min的單一色譜峰。更優(yōu)選地，所述高效液相色譜分析條件為AcquityUPLC?BEHC18柱，填料粒徑1.7微米，柱尺寸2.1mm×50mm，流動相為添加萬分之一體積的改性劑甲酸的乙腈水溶液，0～2.5min乙腈比例為60%，2.5～2.6min乙腈比例線性升至100%，2.6～3.0min乙腈比例為100%，3.0～3.1min乙腈比例線性降至60%，3.1～5.0min乙腈比例為60%，流速0.3ml/min。優(yōu)選地，所述溴代縮酚酸環(huán)醚類化合物在常溫常壓下為無色針晶。經(jīng)抗菌實驗得出，本專利技術(shù)所述化合物對白色假絲酵母的MIC值為6.4μmol/L，具有抑制白色假絲酵母的活性；對銅綠假單胞菌的MIC為1.6μmol/L，表明該化合物具有抑制銅綠假單胞菌生長的活性；對耐甲氧基青霉素的金黃色葡萄球菌的MIC值為25.6μmol/L，具有抑制MRSA的活性；對鹵蟲的半致死劑量LC50為12.0μmol/L，表明其具有殺蟲活性。所以，上述溴代縮酚酸環(huán)醚類化學(xué)物在抗真菌、抗細菌或殺蟲上的應(yīng)用，以及在制備抗真菌劑、抗細菌劑或殺蟲劑中的應(yīng)用，都應(yīng)在本專利技術(shù)的保護范圍之內(nèi)。優(yōu)選地，所述真菌為白色假絲酵母。優(yōu)選地，所述細菌為革蘭氏陰性菌。更優(yōu)選地，所述革蘭氏陰性菌為銅綠假單胞桿菌。另外，更優(yōu)選地，所述細菌為銅綠假單胞桿菌或耐甲氧基青霉素金黃色葡萄球菌。優(yōu)選地，所述蟲為農(nóng)業(yè)害蟲。更優(yōu)選地，所述農(nóng)業(yè)害蟲為鹵蟲、線蟲、甜菜夜蛾、蚜蟲、庫蚊幼蟲或朱砂葉螨等害蟲。本專利技術(shù)與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下有益效果：本專利技術(shù)獲得了一種新的海洋真菌爪曲霉溴代縮酚酸環(huán)醚類化合物，具有良好的抗真菌、抗細菌活性與殺蟲活性，而且化合物制備方法簡單，易于大規(guī)模生產(chǎn)，在制備抗真菌劑、抗細菌劑或農(nóng)用殺蟲劑中具有廣泛的應(yīng)用前景。附圖說明圖1為本專利技術(shù)所述溴代縮酚酸環(huán)醚類化合物的核磁共振氫譜。圖2為本專利技術(shù)所述溴代縮酚酸環(huán)醚類化合物的核磁共振碳譜。圖3為本專利技術(shù)所述溴代縮酚酸環(huán)醚類化合物的ESI-質(zhì)譜。具體實施方式下面結(jié)合說明書附圖和具體實施例對本專利技術(shù)作出進一步地詳細闡述，所述實施例只用于解釋本專利技術(shù)，并非用于限定本專利技術(shù)的范圍。下述實施例中所使用的試驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種海洋真菌爪曲霉溴代縮酚酸環(huán)醚類化合物，其特征在于，所述化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如式（

【技術(shù)特征摘要】
1.一種海洋真菌爪曲霉溴代縮酚酸環(huán)醚類化合物，其特征在于，所述化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如式（）所示：。2.權(quán)利要求1所述溴代縮酚酸環(huán)醚類化合物的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：S1.發(fā)酵：將爪曲霉DLEP2008001接種于真菌液體培養(yǎng)基中靜置發(fā)酵后，分別收集菌絲體和發(fā)酵液；S2.粗提：將步驟S1的發(fā)酵液經(jīng)乙酸乙酯萃取后濃縮，菌絲體經(jīng)有機溶劑提取后濃縮，將所得濃縮物合并后得粗提物；S3.分離純化：將步驟S2的粗提物進行硅膠柱梯度層析，經(jīng)硅膠薄層層析檢測，將含有目標物質(zhì)的洗脫組分繼續(xù)進行硅膠柱、凝膠柱層析和正相制備液相色譜分離純化，得到目標化合物；其中，步驟S1所述真菌液體培養(yǎng)基的配方為：每升中含有如下組分：土豆汁400～600mL，NaBr15～25g，蔗糖15～25g，純水或自來水400～600mL。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟S1所述發(fā)酵是靜置發(fā)酵2～4天后，加入終濃度為0.5～2mM的普魯卡因溶液，繼續(xù)發(fā)酵18～22天；步驟S2所述乙酸乙酯萃取次數(shù)為2～4次，所述有機溶劑萃取次數(shù)為2～4次；所述有機溶劑為氯仿、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇中一種或幾種。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟S3所述分離純化的具體方法如下：a.將步驟S2獲得的粗提物經(jīng)硅膠柱層析，用石油醚-二氯甲烷或石油醚-氯仿進行預(yù)洗脫，繼而用氯仿-甲醇或二氯甲烷-...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張翼，鮑海燕，馮妍，聶影影，劉亞月，楊文聰，楊靜明，
申請(專利權(quán))人：廣東海洋大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：廣東,44