一種微生物多功能肥的制備方法與發(fā)酵培養(yǎng)基組成技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種微生物多功能肥的制備方法與發(fā)酵培養(yǎng)基組成，屬于微生物肥料制備技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種微生物肥的制備方法。該微生物多功能肥的制備方法包括如下操作步驟：（1）培養(yǎng)基配制；（2）菌種活化；（3）液體種子制備；（4）液態(tài)發(fā)酵；（5）?拌種肥、葉面肥制備；（6）地面肥制備。發(fā)酵培養(yǎng)基組成為：葡萄糖15000g，蛋白胨10000g，酵母膏5000g，KH

Preparation method of microbial multifunctional fertilizer and fermentation medium composition

The invention discloses a preparation method of a microbial multifunctional fertilizer and a fermentation culture medium, belonging to the technical field of microbial fertilizer preparation, in particular to a preparation method of microbial fertilizer. The multifunctional microbial fertilizer preparation method comprises the following steps: (1) medium; (2) strain activation; (3) liquid seed preparation; liquid fermentation; (4) (5) seed fertilizer, foliar fertilizer preparation; (6) the ground fertilizer preparation. The fermentation medium was made up of glucose, 15000g, peptone, 10000g, yeast extract, 5000g, KH

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種微生物多功能肥的制備方法與發(fā)酵培養(yǎng)基組成
本專利技術(shù)涉及微生物肥料制備
，具體涉及一種微生物多功能肥的制備方法與發(fā)酵培養(yǎng)基組成。
技術(shù)介紹
我國(guó)人口多，人均耕地面積少，提高農(nóng)作物產(chǎn)量具有重要意義。土壤施肥是一種常用的增產(chǎn)途徑。目前，農(nóng)業(yè)上使用的肥料包括微生物肥料和化學(xué)肥料。長(zhǎng)期施用化學(xué)肥料會(huì)造成土壤板結(jié)；且當(dāng)前基于“綠色”、“環(huán)保”的健康理念，人們對(duì)無污染、安全、衛(wèi)生的綠色食品的需求日益增加，使得微生物肥料備受青睞。另外，施用微生物肥料可減少化學(xué)肥料的施用，改善土壤，提高農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)；而且微生物肥料具有長(zhǎng)效、無毒、無污染、節(jié)約資源、成本低等特點(diǎn)，可彌補(bǔ)化學(xué)肥料的缺點(diǎn)和不足。地面肥是植物吸收營(yíng)養(yǎng)成分的重要途徑，葉面肥是植物吸收營(yíng)養(yǎng)成分的重要補(bǔ)充。隨著植物生長(zhǎng)過程中各種病蟲害影響的加劇，如果施用既能促進(jìn)植物生長(zhǎng)又能拮抗植物病害的微生物肥料，將有利于植物、作物的增產(chǎn)增收，提高農(nóng)戶經(jīng)濟(jì)利益。因此，可以利用研發(fā)的優(yōu)良菌株，進(jìn)行發(fā)酵，獲得的發(fā)酵產(chǎn)物，制備成地面肥、葉面肥、拌種肥等多功能微生物肥。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)涉及一種應(yīng)用枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）BS501a制備微生物肥的方法和發(fā)酵生產(chǎn)微生物肥的培養(yǎng)基配方，制得的微生物多功能肥既能防治植物病害，又能促進(jìn)植物生長(zhǎng)，解決了現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題。本專利技術(shù)是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種微生物多功能肥的制備方法，包括如下操作步驟：（1）培養(yǎng)基配制：分別配制菌種活化培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基，高溫滅菌后備用；所述菌種活化培養(yǎng)基為：蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化鈉10g，加水至1L，pH7.0-7.5；所述種子培養(yǎng)基為：蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化鈉10g，加水至1L，pH7.0-7.5；所述發(fā)酵培養(yǎng)基為：葡萄糖15000g，蛋白胨10000g，酵母膏5000g，KH2PO41300g，K2HPO41000g，MgSO4·7H2O500g，MnSO4·H2O100g，F(xiàn)eSO4·7H2O100g，CaC12·2H2O1500g，加水至1000L，pH7.0-7.5；（2）菌種活化：挑取斜面保藏的BacillussubtilisBS501a接種于步驟（1）制得的菌種活化培養(yǎng)基中，于35-37℃，180-220r/min搖床振蕩培養(yǎng)16-24h，得活化枯草芽孢桿菌菌液；（3）液體種子制備：按5％-10％（體積百分?jǐn)?shù)）的接種量將步驟（2）活化的枯草芽孢桿菌菌液接種于步驟（1）制得的種子培養(yǎng)基中，于35-37℃，通無菌空氣培養(yǎng)16-24h，得到液體種子；（4）液態(tài)發(fā)酵：按5％-10％（體積百分?jǐn)?shù)）的接種量將步驟（3）制得的液體種子接種于步驟（1）制得的發(fā)酵培養(yǎng)基中，于30℃，通無菌空氣培養(yǎng)48h，經(jīng)平板細(xì)菌計(jì)數(shù)，活菌數(shù)達(dá)1×109-9×109CFU/mL，即得活菌體培養(yǎng)物；（5）葉面肥和拌種肥制備：將步驟（4）制得的活菌體培養(yǎng)物靜置，菌體沉淀。除去菌體，即得微生物葉面肥和拌種肥；（6）地面肥的制備：將步驟（4）獲得的活菌體培養(yǎng)物通風(fēng)干燥，即獲得地面肥。上述微生物多功能肥的使用方法：拌種使用時(shí)，拌種肥用水100倍稀釋，拌種使用；葉面噴灑使用時(shí)，葉面肥用水100倍稀釋，在農(nóng)作物苗期葉面噴施、果實(shí)期噴灑；地面肥于耕種時(shí)地面播撒。本專利技術(shù)的有益效果是：1、本專利技術(shù)枯草芽孢桿菌兼具促進(jìn)植物生長(zhǎng)和拮抗植物病原菌功能，經(jīng)其發(fā)酵制備所得的微生物多功能肥兼具促進(jìn)作物生長(zhǎng)、防治植物葉面病害和果實(shí)病害的雙重作用，可減少化肥和農(nóng)藥用量，改善土壤，改善農(nóng)田環(huán)境質(zhì)量，提高農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)。本專利技術(shù)枯草芽孢桿菌可成功定殖于植物根際、體表或體內(nèi)，分泌抗菌物質(zhì)抑制病原菌生長(zhǎng)，具有生防效果，對(duì)多種植物、農(nóng)作物病原真菌都有很強(qiáng)的抑制作用；2、在本專利技術(shù)制備方法中，發(fā)酵培養(yǎng)基可提升發(fā)酵產(chǎn)物中枯草芽孢桿菌的數(shù)量；通過微生物代謝，提高拮抗代謝產(chǎn)物的分泌量，在充分發(fā)揮活菌體促植物生長(zhǎng)的同時(shí)，能保證在植物或作物的整個(gè)生長(zhǎng)周期內(nèi)發(fā)揮有效的生物殺菌劑作用，增強(qiáng)植物或作物抗病能力。培養(yǎng)基中富含氮、磷、鉀，及各種礦物質(zhì)，可增強(qiáng)土壤肥力，減少土壤施肥量。具體實(shí)施方式實(shí)施例1正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化獲得發(fā)酵培養(yǎng)基為提高B.subtilisBS501a發(fā)酵產(chǎn)物的拮抗能力，采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化了發(fā)酵培養(yǎng)基組成和發(fā)酵條件，得到最佳培養(yǎng)基組成為：葡萄糖1.5%，蛋白胨1%，酵母膏0.5%，KH2PO40.13%,K2HPO40.1%,MgSO4·7H2O0.05%,MnSO4·H2O0.01%,FeSO4·7H2O0.01%,CaC12·2H2O0.15%,pH7.0；最適發(fā)酵溫度30℃,最適發(fā)酵時(shí)間48h。實(shí)施例2枯草芽孢桿菌BS501a發(fā)酵液抗菌譜采用對(duì)峙試驗(yàn)測(cè)枯草芽孢桿菌BS501a的抗菌譜。由于植物病原真菌生長(zhǎng)速度不同，為準(zhǔn)確判斷枯草芽孢桿菌BS501a的拮抗活性，采用枯草芽孢桿菌BS501a與植物病原真菌分期或同期培養(yǎng)的方法。對(duì)生長(zhǎng)速度較快的植物病原真菌，先在新鮮PDA平板上呈對(duì)角線接種枯草芽孢桿菌BS501a，26℃培養(yǎng)24h后，在平板中央移入受試真菌菌餅，而后繼續(xù)培養(yǎng)48h，測(cè)量拮抗帶寬度。對(duì)生長(zhǎng)速度中等的植物病原真菌，采用在新鮮PDA平板中央接種受試真菌菌餅，同時(shí)圍繞菌餅呈對(duì)角線接種枯草芽孢桿菌BS501a菌株，26℃培養(yǎng)72h，測(cè)量拮抗帶寬度。對(duì)生長(zhǎng)速度較慢的植物病原真菌，采用在新鮮PDA平板中央接種受試真菌菌餅，26℃培養(yǎng)24h后，在平板上呈對(duì)角線接種枯草芽孢桿菌BS501a，繼續(xù)培養(yǎng)72h，測(cè)量拮抗帶寬度。結(jié)果如表1所示。表1枯草芽孢桿菌BS501a抗菌譜受試真菌拮抗帶寬度/mm稻瘟病菌（7.4±0.23）a黃瓜鐮刀菌（6.98±0.21）a禾生腐霉（3.06±0.15）b西瓜枯萎病菌（5.25±0.34）c辣椒枯萎病菌（4.73±0.30）c玉米串珠鐮孢（3.50±0.21）d玉米青枯病菌（4.25±0.16）cd小麥根腐病菌（8.58±0.47）a玉米小斑病菌（7.18±0.32）b小麥赤霉病菌（5.38±0.36）c蘋果腐爛病菌（5.00±0.20）c蘋果輪紋病菌（4.72±0.38）c黃瓜灰霉病菌（8.03±0.71）ab小麥紋枯病菌（9.10±0.12）a番茄早疫病菌（8.65±0.43）ab棉花枯萎病菌（7.10±0.21）bc棉花黃萎病菌（7.25±0.09）b注：英文字母相同表示差異不顯著，不相同表示差異顯著。以拮抗帶寬度4.25mm為臨界點(diǎn)，拮抗帶寬度大于4.25mm為抑制作用強(qiáng)，拮抗帶寬度小于4.25mm為抑制作用弱。對(duì)峙試驗(yàn)結(jié)果表明枯草芽胞桿菌BS501a發(fā)酵液對(duì)小麥紋枯病菌、小麥根腐病菌、小麥赤霉病菌、番茄早疫病菌、黃瓜灰霉病菌、黃瓜鐮刀菌、棉花枯萎病菌、棉花黃萎病菌、辣椒枯萎病菌、水稻紋枯病菌、玉米小斑病菌、西瓜枯萎病菌、蘋果腐爛病菌、蘋果輪紋病菌的抑制作用強(qiáng)；對(duì)玉米青枯菌、玉米串珠鐮孢菌、禾生腐霉的抑制作用較弱。實(shí)施例3枯草芽胞桿菌BS501a發(fā)酵液生物安全性測(cè)定根據(jù)藥典，采用急性毒性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)枯草芽胞桿菌BS501a發(fā)酵液的生物安全性。將枯草芽胞桿菌BS501a發(fā)酵液冷凍干燥，制成凍干粉。將凍干粉用生理鹽水依次稀釋至5×10-2g/mL，5×10-3g/mL，5×10-本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種微生物多功能肥的制備方法與發(fā)酵培養(yǎng)基組成，其特征為：包括如下操作步驟：（1）培養(yǎng)基配制：分別配制菌種活化培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基，高溫滅菌后備用；所述菌種活化培養(yǎng)基為：蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化鈉10g，加水至1L，pH?7.0?7.5；所述種子培養(yǎng)基為：蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化鈉10g，加水至1L，pH?7.0?7.5；所述發(fā)酵培養(yǎng)基為：葡萄糖15000g，蛋白胨10000g，酵母膏5000g，KH

【技術(shù)特征摘要】
1.一種微生物多功能肥的制備方法與發(fā)酵培養(yǎng)基組成，其特征為：包括如下操作步驟：（1）培養(yǎng)基配制：分別配制菌種活化培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基，高溫滅菌后備用；所述菌種活化培養(yǎng)基為：蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化鈉10g，加水至1L，pH7.0-7.5；所述種子培養(yǎng)基為：蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化鈉10g，加水至1L，pH7.0-7.5；所述發(fā)酵培養(yǎng)基為：葡萄糖15000g，蛋白胨10000g，酵母膏5000g，KH2PO41300g，K2HPO41000g，MgSO4·7H2O500g，MnSO4·H2O100g，F(xiàn)eSO4·7H2O100g，CaC12·2H2O1500g，加水至1000L，pH7.0-7.5；（2）菌種活化：挑取斜面保藏的枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）BS501a接種于步驟（1）制得的菌種活化培養(yǎng)基中，于35-37℃，180-220r/min搖床振蕩培養(yǎng)16-24h，得活化枯草芽孢桿菌菌液；（3）液體種子制備：按5％...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李瑞芳，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：河南工業(yè)大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：河南,41